ABSTRACT
Dihydroxyacetone (DHA) can be used as an energy source by many cell types; however, it is toxic at high concentrations. The enzyme dihydroxyacetone kinase (DAK) has shown to be involved in DHA detoxification and osmoregulation. Among protozoa of the genus Trypanosoma, T. brucei, which causes sleeping sickness, is highly sensitive to DHA and does not have orthologous genes to DAK. Conversely, T. cruzi, the etiological agent of Chagas Disease, has two putative ATP-dependent DAK (TcDAKs) sequences in its genome. Here we show that T. cruzi epimastigote lysates present a DAK specific activity of 27.1 nmol/min/mg of protein and that this form of the parasite is able to grow in the presence of 2 mM DHA. TcDAK gene was cloned and the recombinant enzyme (recTcDAK) was expressed in Escherichia coli. An anti-recTcDAK serum reacted with a protein of the expected molecular mass of 61 kDa in epimastigotes. recTcDAK presented maximal activity using Mg+2, showing a Km of 6.5 µM for DHA and a K0.5 of 124.7 µM for ATP. As it was reported for other DAKs, recTcDAK activity was inhibited by FAD with an IC50 value of 0.33 mM. In conclusion, TcDAK is the first DAK described in trypanosomatids confirming another divergent metabolism between T. brucei and T. cruzi.
Subject(s)
Phosphotransferases (Alcohol Group Acceptor)/isolation & purification , Trypanosoma cruzi/enzymology , Amino Acid Sequence , Animals , Blotting, Western , Chlorocebus aethiops , Dihydroxyacetone/metabolism , Dihydroxyacetone/toxicity , Electrophoresis, Polyacrylamide Gel , Fluorescent Antibody Technique , Male , Mice , Mice, Inbred BALB C , Molecular Sequence Data , Osmoregulation , Phosphotransferases (Alcohol Group Acceptor)/chemistry , Phosphotransferases (Alcohol Group Acceptor)/classification , Trypanosoma brucei brucei/drug effects , Trypanosoma cruzi/drug effects , Vero CellsABSTRACT
Direct observation of Leishmania parasites in tissue aspirates has shown low sensitivity for the detection of canine visceral leishmaniasis (VL). Therefore in the last quarter century immunoenzymatic tests have been developed to improve diagnosis. The purpose of this study was to develop a fast recombinant K28 antigen, naked-eye qualitative enzyme-linked immunosorbent assay (VL Ql-ELISA) and a quantitative version (VL Qt-ELISA), and to display it in a kit format, whose cutoff value (0.156) was selected as the most adequate one to differentiate reactive from nonreactive samples. Considering 167 cases and 300 controls, sensitivity was 91% for both assays and specificity was 100% and 98.7% in Ql-ELISA and Qt-ELISA, respectively. Positive predictive values were 100% and 97.4% for Ql-ELISA and Qt-ELISA, respectively, and negative predictive values were 95.2% for both ELISAs. Reagent stability, reliability studies, including periodic repetitions and retest of samples, cutoff selection, and comparison of rK28 ELISAs with rK39 immunochromatographic test, were the international criteria that supported the quality in both kits. The performance of both ELISA kits in this work confirmed their validity and emphasized their usefulness for low-to-medium complexity laboratories.
Subject(s)
Dog Diseases/diagnosis , Immunoenzyme Techniques , Leishmaniasis, Visceral/diagnosis , Leishmaniasis, Visceral/veterinary , Animals , Antibodies, Protozoan/blood , Antigens, Protozoan/blood , Case-Control Studies , Dog Diseases/parasitology , Dogs/parasitology , Latin America , Leishmania/isolation & purification , Reproducibility of Results , Sensitivity and Specificity , Trypanosoma cruzi/isolation & purificationABSTRACT
Being independent of artificial power sources, self administered sunlight triggered photodynamic therapy could be a suitable alternative treatment for cutaneous leishmaniasis, that avoids the need for injectables and the toxic side effects of pentavalent antimonials. In this work we have determined the in vitro leishmanicidal activity of sunlight triggered photodynamic ultradeformable liposomes (UDL). ZnPc is a hydrophobic Zn phthalocyanine that showed 20% anti-promastigote activity (APA) and 20% anti-amastigote activity (AA) against Leishmania braziliensis (strain 2903) after 15min sunlight irradiation (15J/cm(2)). However, when loaded in UDL as UDL-ZnPc (1.25µM ZnPc-1mM phospholipids) it elicited 100% APA and 80% AA at the same light dose. In the absence of host cell toxicity, UDL and UDL-ZnPc also showed non-photodynamic leishmanicidal activity. Confocal laser scanning microscopy of cryosectioned human skin mounted in non-occlusive Saarbrücken Penetration Model, showed that upon transcutaneous administration ZnPc penetrated nearly 10 folds deeper as UDL-ZnPc than if loaded in conventional liposomes (L-ZnPc). Quantitative determination of ZnPc confirmed that UDL-ZnPc penetrated homogeneously in the stratum corneum, carrying 7 folds higher amount of ZnPc 8 folds deeper than L-ZnPc. It is envisioned that the multiple leishmanicidal effects of UDL-ZnPc could play a synergistic role in prophylaxis or therapeutic at early stages of the infection.
Subject(s)
Indoles/pharmacology , Leishmania braziliensis/drug effects , Leishmaniasis, Cutaneous/drug therapy , Organometallic Compounds/pharmacology , Photochemotherapy , Photosensitizing Agents/pharmacology , Sunlight , Administration, Cutaneous , Animals , Chemistry, Pharmaceutical , Chlorocebus aethiops , Drug Compounding , Female , Humans , Hydrophobic and Hydrophilic Interactions , Indoles/administration & dosage , Indoles/chemistry , Indoles/metabolism , Indoles/toxicity , Isoindoles , Liposomes , Mice , Microscopy, Confocal , Organometallic Compounds/administration & dosage , Organometallic Compounds/chemistry , Organometallic Compounds/metabolism , Organometallic Compounds/toxicity , Particle Size , Photosensitizing Agents/administration & dosage , Photosensitizing Agents/chemistry , Photosensitizing Agents/metabolism , Photosensitizing Agents/toxicity , Skin/metabolism , Skin Absorption , Time Factors , Vero Cells , Zinc CompoundsABSTRACT
Objetivos: Realizar un diagnóstico de sistema provincial de monitoreo y auditoriades las muertes maternas o vigilancia de la muerte materna en la provincia de Catamarca. Establecer el subregistro de las muertes maternas en el año 2004 en la provincia de Catamarca para contribuir a diagnosticar el estado de situación de la vigilancia de las muertes maternas. Caracterizar el sistema provincial de vigilancia de las muertes maternas en términos de su estructura organizacional y funcional. Identificar barreras y facilitadores para el desempeño de los profesionales involucrados en los sistemas de vigilancia
Subject(s)
Argentina , Maternal Mortality , Fellowships and ScholarshipsABSTRACT
Less toxic drugs are needed to combat the human parasite Trypanosoma cruzi (Chagas's disease). One novel target for antitrypanosomal drug design is farnesyltransferase. Several farnesyltransferase inhibitors based on the benzophenone scaffold were assayed in vitro and in vivo with the parasite. The common structural feature of all inhibitors is an amino function which can be protonated. Best in vitro activity (LC50 values 1 and 10 nM, respectively) was recorded for the R-phenylalanine derivative 4a and for the N-propylpiperazinyl derivative 2f. These inhibitors showed no cytotoxicity to cells. When tested in vivo, the survival rates of infected animals receiving the inhibitors at 7 mg/kg body weight/day were 80 and 60% at day 115 postinfection, respectively.
Subject(s)
Benzophenones/chemical synthesis , Farnesyltranstransferase/antagonists & inhibitors , Trypanocidal Agents/chemical synthesis , Trypanosoma cruzi/drug effects , Animals , Benzophenones/chemistry , Benzophenones/pharmacology , Chagas Disease/mortality , Chagas Disease/parasitology , Farnesyltranstransferase/chemistry , Male , Mice , Mice, Inbred BALB C , Models, Molecular , Protein Subunits/chemistry , Sequence Homology, Amino Acid , Structure-Activity Relationship , Trypanocidal Agents/chemistry , Trypanocidal Agents/pharmacology , Trypanosoma cruzi/enzymologyABSTRACT
El estudio describe la cinética de aparición de anticuerpos específicos en el suero de 30 niños con enfermedad de Chagas aguda durante los primeros 30 días de evolución de la sintomatología. Los resultados obtenidos con reacción de aglutinación directa reflejan una respuesta primaria clásica de producción de anticuerpos. Se observaron diferencias entre el dosaje de IgG e IgM respecto de los sueros normales. Se obtuvo una disminución de las fracciones del complemento principalmente el C1q, en la mayoría de los sueros estudiados. Se investigaron inmunocomplejos por tratamiento con polietilenglicol y la especificidad antigénica del anticuerpo involucrado quedó demostrado en 2 sueros. Para ello se utilizó una inmunodifusión doble enfrentando los precipitados obtenidos disociados con buffer glicina-ClH pH: 2,8, antisueros anti-IgG, anti-IgM y fracciones mitocondriales y solubles en distintas concentraciones. La reacción de identidad del antisuero anti-IgM la fracción soluble demuestra que la IgM es el anticuerpo del inmunocomplejo responsable de la especificidad antigénica. Es de suponer, entonces, que existen anticuerpos con distintas especificidades antigénicas que forman otros inmunocomplejos que podrían ser demostrados en el curso de la enfermedades de Chagas aguda. Este ensayo preliminar permitió detectar inmunocomplejos cuyos anticuerpos de tipo IgM demostraron especificidad para fracciones solubles y mitocondriales. Los valores bajos de C1q, más concentraciones altas de... (AU)
Subject(s)
Humans , Infant , Child, Preschool , Child , Chagas Disease/immunology , Immunoglobulin G/analysis , Immunoglobulin M/analysis , Antibody Formation , Antigen-Antibody Complex/analysis , Agglutination Tests , Acute DiseaseABSTRACT
El estudio describe la cinética de aparición de anticuerpos específicos en el suero de 30 niños con enfermedad de Chagas aguda durante los primeros 30 días de evolución de la sintomatología. Los resultados obtenidos con reacción de aglutinación directa reflejan una respuesta primaria clásica de producción de anticuerpos. Se observaron diferencias entre el dosaje de IgG e IgM respecto de los sueros normales. Se obtuvo una disminución de las fracciones del complemento principalmente el C1q, en la mayoría de los sueros estudiados. Se investigaron inmunocomplejos por tratamiento con polietilenglicol y la especificidad antigénica del anticuerpo involucrado quedó demostrado en 2 sueros. Para ello se utilizó una inmunodifusión doble enfrentando los precipitados obtenidos disociados con buffer glicina-ClH pH: 2,8, antisueros anti-IgG, anti-IgM y fracciones mitocondriales y solubles en distintas concentraciones. La reacción de identidad del antisuero anti-IgM la fracción soluble demuestra que la IgM es el anticuerpo del inmunocomplejo responsable de la especificidad antigénica. Es de suponer, entonces, que existen anticuerpos con distintas especificidades antigénicas que forman otros inmunocomplejos que podrían ser demostrados en el curso de la enfermedades de Chagas aguda. Este ensayo preliminar permitió detectar inmunocomplejos cuyos anticuerpos de tipo IgM demostraron especificidad para fracciones solubles y mitocondriales. Los valores bajos de C1q, más concentraciones altas de...
Subject(s)
Humans , Infant , Child, Preschool , Child , Chagas Disease/immunology , Immunoglobulin G/analysis , Immunoglobulin M/analysis , Acute Disease , Agglutination Tests , Antibody Formation , Antigen-Antibody Complex/analysisABSTRACT
Objetivos: Realizar un diagnóstico de sistema provincial de monitoreo y auditoriades las muertes maternas o vigilancia de la muerte materna en la provincia de Catamarca. Establecer el subregistro de las muertes maternas en el año 2004 en la provincia de Catamarca para contribuir a diagnosticar el estado de situación de la vigilancia de las muertes maternas. Caracterizar el sistema provincial de vigilancia de las muertes maternas en términos de su estructura organizacional y funcional. Identificar barreras y facilitadores para el desempeño de los profesionales involucrados en los sistemas de vigilancia
Subject(s)
Argentina , Maternal Mortality , Fellowships and ScholarshipsABSTRACT
Objetivos: Realizar un diagnóstico de sistema provincial de monitoreo y auditoriades las muertes maternas o vigilancia de la muerte materna en la provincia de Catamarca. Establecer el subregistro de las muertes maternas en el año 2004 en la provincia de Catamarca para contribuir a diagnosticar el estado de situación de la vigilancia de las muertes maternas. Caracterizar el sistema provincial de vigilancia de las muertes maternas en términos de su estructura organizacional y funcional. Identificar barreras y facilitadores para el desempeño de los profesionales involucrados en los sistemas de vigilancia
