Preliminary studies on the prevention of the ovalbumin-induced allergic response by Enterococcus faecalis CECT7121 in mice.

BACKGROUND: Allergic diseases are featured by an increased production of IgE due to an imbalance in the immune response towards a Th2 profile. In this work, the ability of Enterococcus faecalis CECT7121 to regulate this Th2-exaggerated response in a murine model of ovalbumin (OVA)-induced allergy was studied. METHODS: BALB/c mice intragastrically inoculated with E. faecalis CECT7121 before and during a subcutaneous immunization protocol with OVA were studied in comparison with an immunized control group. The allergen-specific immune response (IgE, IgG, IgG1 and IgG2a) was assessed. The proliferative activity of memory splenocytes and the levels of IL-4, IL-5, IL-13, IL-10, IL-12 and IFN-γ were also determined. RESULTS: Upon treatment with E. faecalis CECT7121 the following effects were observed: (1) a decrease in specific IgE levels, (2) an increase in anti-OVA IgG2a levels, (3) the levels of anti-OVA IgG and IgG1 remained unaltered, (4) a reduction in the proliferation rate of memory cells, (5) a decrease in the levels of the Th2 cytokines IL-4, IL-5 and IL-13, and (6) the secretion of IL-10, IL-12 and IFN-γ remained unchanged. Moreover, the incubation of human basophils with non-viable E. faecalis CECT7121 together with an allergen preparation induced the release of ß-hexosaminidase at levels that were lower than control reactions and similar i.g. the spontaneous release. CONCLUSIONS: In this model, the i.g. administration of E. faecalis CECT7121 hampers the establishment of the OVA-induced allergic immune response, suggesting that this strain could be useful for the treatment of IgE-mediated allergic diseases.

Modificaciones de parámetros clínicos, celulares y moleculares al cabo de un año de inmunoterapia alérgeno específica / Parameters modified of allergy after immunotherapy

Antecedentes. En general, los pacientes alérgicos, después de un año de inmunoterapia (IT), muestran mejoría en la frecuencia e intensidad de los síntomas. Objetivo. Demostrar que la IT tiene efectos moduladores sobre parámetros clínicos, celulares y moleculares de alergia de acuerdo con las edades. Metodología. Se incluyeron 81 pacientes alérgicos asmáticos: 28 infantes, 36 niños, 17 adultos y 27 controles. En los niños y jóvenes se evaluó el pico flujo espiratorio (PEF), reactividad cutánea, se registró eosinofilia sanguínea y de exudado de mucosa nasal, liberación de enzima ß-hexosaminidase (ß-H) de basófilos, proliferación de PBMC estimuladas con alérgeno específico o PHA; se cuantificaron las concentraciones de IgE, IL-13 y sCD23 en sueros y de IFN-γ en sobrenadantes de cultivos de PBMC. Resultados. Niños y adultos sin IT empeoraron sus reducidos valores de PEF. Niños y adultos después de IT mostraron incremento en los volúmenes de PEF (p<0,0001). Todos los grupos con IT redujeron la reactividad cutánea (p<0,0001, p<0,0001 y p<0,02) y la liberación de B-H de basófilos desafiados con el alérgeno específico (p<0,0001, p<0,0001 y p<0,003). Niños y adultos con IT observaron disminución en los niveles de IgE, ambos p<0,05, y redujeron los niveles de células eosinófilos nasales (p<0,0001 y p<0,01). Solamente los niños tratados con IT redujeron los niveles de células eosinófilas sanguíneas (p<0,0001). Las PBMC de infantes y niños con IT disminuyeron los índices de proliferación desafiadas con el alérgeno específico, ambos p<0,05. Los pacientes alérgicos observaron menores niveles de IFN-γ (p<0,02) y más altos niveles de IL-13 (p<0,05) y sCD23 (p<0,001) que los hallados en controles. Conclusiones. La IT demostró efectividad terapéutica en pacientes asmáticos y cambios en parámetros clínicos celulares y moleculares. Algunos de esos parámetros fueron indicadores de la evolución de la enfermedad y ellos fueron diferentes de acuerdo con las edades(AU)

Background: Most allergic patients, after a year of specific immunotherapy (SIT), show improvement in the frequency and intensity of the symptoms. Objective. The objective was to demonstrate that specific immunotherapy has modulating effects on clinical, cellular and molecular parameters, of allergy. Methods. The study included 81 asthmatic allergic patients and 27 healthy controls from 2 to 50 years of age. Peak expiratory flow, skin reactivity, blood and nasal smear eosinophilia was conducted. ß- hexosaminidase enzyme (B-H) release assays and Peripheral Blood Mononuclear Cells cultures stimulated with specific allergens, were realized. Total IgE, sCD23 and IL-13 were measured in serum and IFN- γ, in culture supernatants. Results. In all the cases a reduction in the frequency and intensity of the asthma attacks and a decrease in medical consultations and antiallergic drugs consumption were observed. The patients without SIT diminished low PEF values. Children and adult people with SIT increased the volumes of peak expiratory flow, (p<0.0001). Skin reactivity was reduced in all the SIT groups'. Skin reactivity were p < 0.0001, p<0.0001 y p<0.02) respectively, and B-H released were p<0.0001, p<0.0001 y p<0.003) to each group. The infants without SIT increased IgE levels. Nasal smear eosinophilia fell from children and adults, p < 0.0001. In Infants and children with SIT, the cellular expansion by the allergen was reduced (p<0.05). In allergic patients IFN-γ values were lower than controls, (p < 0.02). IFN -γ synthesis did not vary after a year of allergen -specific immunotherapy. Allergic patients observed higher serum levels of IL-13 (p<0.05) and sCD23 (p<0.001) than controls. Conclusions. SIT after a year demonstrated therapeutic effectiveness in asthmatic patients with changes in multiple parameters: clinical, cellular and molecular. (AU)

Achyrocline satureioides (LAM.) DC (Marcela): antimicrobial activity on Staphylococcus spp. and immunomodulating effects on human lymphocytes.

Achyrocline satureioides (LAM.) DC (Compositae) is a sub-bush original from America and distributed in Europe and Africa. It is mainly used in infusions, as digestive, sedative among others and has antimicrobial and antiviral properties. A research was made into the anti-microbial activity of the A. satureioides decoction on the Staphylococcus spp strains. They were isolated from 18 patients with acne lesions and from 7 patients infected with Staphylococcus spp. (5 strains were taken from catheters and 2 from wounds). The strains were classified through biochemical tests and then were seeded in triptein-soy agar with or without decoction to observe the antibacterial activity. On the other hand, cultures of lymphocytes were made from those patients who displayed infections caused by Staphylococcus spp. and from 12 control non-infected individuals. The lymphocytes were stimulated with decoction or PHA-M. Among the expanded, CD8+ T cells, with anti-human CD8 monoclonal antibody were the outstanding ones by indirect IF. The A. satureiodes decoction inhibited 95% of the isolated Staphylococcus spp. strains and stimulated the lymphocyte expansion, of which 40% were CD8+ T cells. The A. satureiodes decoction showed anti-microbial activity and resulted to be an immunostimulating agent on CD8+ T cells, with lesser mitogenic effects than PHA-M.

Immunomodulating properties of Minthostachys verticillata on human lymphocytes and basophils.

BACKGROUND: Minthostachys verticillata (Griseb.) Epling is a South American traditional medicinal herb used as digestive, anti-spasmodic, anti-inflammatory and bronchial dilator agent among other uses. Its anti-microbial activity against staphylococcal strains and its anti-viral properties against HVS-1 and strain RC/79 of PrV have been demonstrated. OBJECTIVE: To determine the immunomodulating ability of M. verticillata decoction and essential oil. As a complementary study, the main constituents of the essential oil were identified. MATERIALS AND METHODS: Lymphocyte-proliferating activity of both vegetal derivatives was tested and compared with cellular expansion induced by PHA, Pokeweed, CGB in cytomorphological study. A non-stimulate culture was used as control reference. The score of lymphocyte clusters and colonies was performed using the method described by Lange. Among proliferated cells, LT CD8+ subpopulation was characterized by direct immunofluorescence. The in vitro degranulant ability of the vegetal fractions was tested on basophils from allergic and non-allergic individuals sensitized to environmental fungi. Essential oil components of M. verticillata were identified by gas chromatography technique. RESULTS: M. verticillata derivatives reached higher proliferation levels compared to non-stimulated cultures, showed mitogenic activity and induced cluster and colony formation similar to PHA, Pokeweed and CGB. Cells that proliferated after stimulation with derivatives showed 40% of LT CD8+. Tested concentrations of decoction and essential oil did not reach minimum degranulation indexes over basophils, from both allergic and non-allergic individuals. Gas chromatography analysis revealed the presence of pulegone and menthone as the main constituents. CONCLUSIONS: M. verticillata derivatives were mitogenic over LT, inducing significant cluster and colony formation. There was no evidence of degranulating ability over basophils at the concentrations tested. We assume that the derivatives from M. verticillata would induce Th1 deviation in cellular cultures from allergic patients, which would diminish hypersensitivity reactions. Some of the compounds of the essential oil revealed by gas chromatography analysis may be responsible of the biological activity of these products.

Propiedades inmunológicas y mitogénicas de productos derivados de Minthostachys verticillata sobre linfocitos de niños alérgicos con infección viral / Immunological and mitogenis properties of Minthostachys verticillata derivates products on lymphocytes from allergic children with viral infection

Antecedentes. La decocción y el aceite esencial de Minthostachys verticillata han demostrado efectos antimicrobianos sobre el género Staphylococcus y propiedad antiherpéticas. Objetivos. Determinar la capacidad inmunogénica de la decocción vegetal en inmunizaciones experimentales. Investigar la capacidad proliferativa de linfocitos estimulados con derivados de M. verticillata. Evaluar los efectos de la dococción sobre el mitógeno pokeweed (PWM). Detectar y cuantificar LT CD8+ y LB en células proliferadas provenientes de niños alérgicos con infección VHS-1. Materiales y métodos. Se inmunizaron 2 conejos con la decocción. Se evaluaron los anticuerpos por precipitación y hemaglutinación pasiva. Se estudió la proliferación de linfocitos de 25 pacientes de 2 a 14 años, 15 alérgicos con lesiones de Herpes Simplex Tipo 1 (VHS-1) y 10 controles. Las células fueron estimuladas con a) decocción, b) aceite esencial, c) PWM, d) decocción + PWM, e) control. Se caracterizaron y cuantificaron LT CD8+ y LB por IFD. Resultados. La decocción indujo la síntesis de anticuerpos no precipitantes y hemaglutinantes de glóbulos rojos de carnero. Los linfocitos de los pacientes con VHS-1 mostraron niveles linfoproliferativos más elevados(p<0,01). La decocción y el aceite mostraron efectos mitogénicos similares a PWM. El agregado simultáneo de decocción y PWM redujo la proliferación alcamzada por cada uno (p<0,001) tanto en infectados como en controles. Entre células proliferadas se caracterizaron LT CD8+ y LB. Conclusión. La decocción fue inmunogénica, los anticuerpos tuvieron características de coprecipitantes. Los derivados de M. verticillata mostraron propiedades mitogénicas similares a PWM. La decocción inhibió los efectos de PWM (AU)

Propiedades inmunológicas y mitogénicas de productos derivados de Minthostachys verticillata sobre linfocitos de niños alérgicos con infección viral / Immunological and mitogenis properties of Minthostachys verticillata derivates products on lymphocytes from allergic children with viral infection

Antecedentes. La decocción y el aceite esencial de Minthostachys verticillata han demostrado efectos antimicrobianos sobre el género Staphylococcus y propiedad antiherpéticas. Objetivos. Determinar la capacidad inmunogénica de la decocción vegetal en inmunizaciones experimentales. Investigar la capacidad proliferativa de linfocitos estimulados con derivados de M. verticillata. Evaluar los efectos de la dococción sobre el mitógeno pokeweed (PWM). Detectar y cuantificar LT CD8+ y LB en células proliferadas provenientes de niños alérgicos con infección VHS-1. Materiales y métodos. Se inmunizaron 2 conejos con la decocción. Se evaluaron los anticuerpos por precipitación y hemaglutinación pasiva. Se estudió la proliferación de linfocitos de 25 pacientes de 2 a 14 años, 15 alérgicos con lesiones de Herpes Simplex Tipo 1 (VHS-1) y 10 controles. Las células fueron estimuladas con a) decocción, b) aceite esencial, c) PWM, d) decocción + PWM, e) control. Se caracterizaron y cuantificaron LT CD8+ y LB por IFD. Resultados. La decocción indujo la síntesis de anticuerpos no precipitantes y hemaglutinantes de glóbulos rojos de carnero. Los linfocitos de los pacientes con VHS-1 mostraron niveles linfoproliferativos más elevados(p<0,01). La decocción y el aceite mostraron efectos mitogénicos similares a PWM. El agregado simultáneo de decocción y PWM redujo la proliferación alcamzada por cada uno (p<0,001) tanto en infectados como en controles. Entre células proliferadas se caracterizaron LT CD8+ y LB. Conclusión. La decocción fue inmunogénica, los anticuerpos tuvieron características de coprecipitantes. Los derivados de M. verticillata mostraron propiedades mitogénicas similares a PWM. La decocción inhibió los efectos de PWM

Characterization of an allele-nonspecific intragenic suppressor in the yeast plasma membrane H+-ATPase gene (Pma1).

We have analyzed the ability of A165V, V169I/D170N, and P536L mutations to suppress pma1 dominant lethal alleles and found that the P536L mutation is able to suppress the dominant lethality of the pma1-R271T, -D378N, -D378E, and -K474R mutant alleles. Genetic and biochemical analyses of site-directed mutants at Pro-536 suggest that this amino acid may not be essential for function but is important for biogenesis of the ATPase. Proteins encoded by dominant lethal pma1 alleles are retained in the endoplasmic reticulum, thus interfering with transport of wild-type Pma1. Immunofluorescence studies of yeast conditionally expressing revertant alleles show that the mutant enzymes are correctly located at the plasma membrane and do not disturb targeting of the wild-type enzyme. We propose that changes in Pro-536 may influence the folding of the protein encoded by a dominant negative allele so that it is no longer recognized and retained as a misfolded protein by the endoplasmic reticulum.

Efecto de budesonide en rinitis alérgica / Effects by budesonide in allergic rhinitis

Se evaluó mediante estudio doble ciego la eficacia de Budesonide, glucocorticoide no halogenado en pacientes con rinitis alérgica aguda estacional e hipersensibilidad a ácaros domésticos, pólenes, polvo de cereales, hongos aerógenos y soja. Se estudiaron 56 paientes de ambos sexos, 36 niños y 20 adultos, provenientes de poblaciones cerealeras: Gral. Deheza, Sampacho, Moldes y Río Cuarto. El diagnóstico de terreno alérgico se realizó por historia clínica, examen de mucosa nasal, dosaje de IgE sérica total y estudio de exudado nasal seriado, por técnica de Hansel. El diagnóstico de los alergenos involucrados se realizó por pruebas cutáneas y de degranulación de basófilos. Antes y después de la administración de la droga se estableció una escala de 0 a 6 puntos para evaluación de los síntomas; un punto por presencia de cada síntoma: rinorrea, prurito nasal, estornudos, obstrucción nasal, alteraciones de la olfación y otros (conjuntivitis, cefaleas, palidez de mucosas y/o dolor). Se administró el producto A 26 niños y 10 adultos. Los pacientes que recibieron Budesonide tanto niños como adultos, mostraron mejoría respecto al grupo placebo (p<0,01) y respecto de la evaluación previa al tratamiento (p<0,01). Los trastornos en la olfación mejoraron en los grupos con Budesonide: 22 niños: 84,62 por ciento y 8 adultos: 80 por ciento y en ninguno de los que recibieron placebo. En los grupos que emplearon el glucocorticoide disminuyeron todos los síntomas con diferencias estadísticamente muy significativas tanto en los grupos antes vs después como al compararlos con los grupos correspondientes que recibieron placebo. El producto aplicado en tópico intranasal, estaría indicado con posibilidades de efectos benéficos en el tratamiento de rinitis alérgica tanto en niños como en adultos (AU)

Efecto de budesonide en rinitis alérgica / Effects by budesonide in allergic rhinitis

Se evaluó mediante estudio doble ciego la eficacia de Budesonide, glucocorticoide no halogenado en pacientes con rinitis alérgica aguda estacional e hipersensibilidad a ácaros domésticos, pólenes, polvo de cereales, hongos aerógenos y soja. Se estudiaron 56 paientes de ambos sexos, 36 niños y 20 adultos, provenientes de poblaciones cerealeras: Gral. Deheza, Sampacho, Moldes y Río Cuarto. El diagnóstico de terreno alérgico se realizó por historia clínica, examen de mucosa nasal, dosaje de IgE sérica total y estudio de exudado nasal seriado, por técnica de Hansel. El diagnóstico de los alergenos involucrados se realizó por pruebas cutáneas y de degranulación de basófilos. Antes y después de la administración de la droga se estableció una escala de 0 a 6 puntos para evaluación de los síntomas; un punto por presencia de cada síntoma: rinorrea, prurito nasal, estornudos, obstrucción nasal, alteraciones de la olfación y otros (conjuntivitis, cefaleas, palidez de mucosas y/o dolor). Se administró el producto A 26 niños y 10 adultos. Los pacientes que recibieron Budesonide tanto niños como adultos, mostraron mejoría respecto al grupo placebo (p<0,01) y respecto de la evaluación previa al tratamiento (p<0,01). Los trastornos en la olfación mejoraron en los grupos con Budesonide: 22 niños: 84,62 por ciento y 8 adultos: 80 por ciento y en ninguno de los que recibieron placebo. En los grupos que emplearon el glucocorticoide disminuyeron todos los síntomas con diferencias estadísticamente muy significativas tanto en los grupos antes vs después como al compararlos con los grupos correspondientes que recibieron placebo. El producto aplicado en tópico intranasal, estaría indicado con posibilidades de efectos benéficos en el tratamiento de rinitis alérgica tanto en niños como en adultos

Glucose activation of the yeast plasma membrane H+-ATPase requires the ubiquitin-proteasome proteolytic pathway.

Glucose triggers transcriptional and post-transcriptional mechanisms that increase the level and activity of Saccharomyces cerevisiae plasma membrane H+-ATPase. We have studied the post-transcriptional activation of the enzyme by glucose and have found that Rsp5, a ubiquitin-protein ligase enzyme, Ubc4, a ubiquitin-conjugating enzyme, and the 26S proteasome complex are implicated in this activation. These results suggest that ATPase activation by glucose requires the ubiquitin-proteasome proteolytic pathway. This is supported by the fact that over-expression of the ubiquitin-specific protease Ubp2, which cleaves ubiquitin from its branched conjugates, inhibits this activation. We propose that glucose triggers degradation of an inhibitory protein resulting in enzyme activation.

Glucose-independent inhibition of yeast plasma-membrane H+-ATPase by calmodulin antagonists.

Glucose metabolism causes activation of the yeast plasma-membrane H+-ATPase. The molecular mechanism of this regulation is not known, but it is probably mediated by phosphorylation of the enzyme. The involvement in this process of several kinases has been suggested but their actual role has not been proved. The physiological role of a calmodulin-dependent protein kinase in glucose-induced activation was investigated by studying the effect of specific calmodulin antagonists on the glucose-induced ATPase kinetic changes in wild-type and two mutant strains affected in the glucose regulation of the enzyme. Preincubation of the cells with calmidazolium or compound 48/80 impeded the increase in ATPase activity by reducing the Vmax of the enzyme without modifying the apparent affinity for ATP in the three strains. In one mutant, pma1-T912A, the putative calmodulin-dependent protein kinase-phosphorylatable Thr-912 was eliminated, and in the other, pma1-P536L, H+-ATPase was constitutively activated, suggesting that the antagonistic effect was not mediated by a calmodulin-dependent protein kinase and not related to glucose regulation. This was corroborated when the in vitro effect of the calmodulin antagonists on H+-ATPase activity was tested. Purified plasma membranes from glucose-starved or glucose-fermenting cells from both pma1-P890X, another constitutively activated ATPase mutant, and wild-type strains were preincubated with calmidazolium or melittin. In all cases, ATP hydrolysis was inhibited with an IC50 of approximately 1 microM. This inhibition was reversed by calmodulin. Analysis of the calmodulin-binding protein pattern in the plasma-membrane fraction eliminates ATPase as the calmodulin target protein. We conclude that H+-ATPase inhibition by calmodulin antagonists is mediated by an as yet unidentified calmodulin-dependent membrane protein.

Yeast gene YOR137c is involved in the activation of the yeast plasma membrane H+-ATPase by glucose.

Glucose triggers transcriptional and post-transcriptional mechanisms that increase the level and activity of Saccharomyces cerevisiae plasma membrane H+-ATPase. We have studied the post-transcriptional activation of the enzyme by glucose and have found that the YOR137c gene product is implicated in this activation. Deletion of YOR137c does not affect the level of Pma1 at the plasma membrane, but disturbs the glucose-triggered Vmax increase of the enzyme. We propose that at least two independent mechanisms are involved in glucose activation of the H+-ATPase.

Antigenicidad de fórmulas de soja en lactantes alérgicos a la leche de vaca / Antigenicity of formulas of soy in infants allergic to cows milk

Se estudiaron las propiedades hipoalergénicas de soja parcialmente hidrolizada como alimento destinado a alérgicos a leche de vaca y reactivos a epitopes lácteos que persisten o aparecen luego de digestión parcial. Se realizó in vitro la hidrólisis parcial de soja. Se comprobaron las modificaciones por electroforesis en poliacrilamida aniónica. Se evaluaron las respuestas humoral y celular por parámetros in vivo e in vitro en pacientes alérgicos a leche de vaca, alimentados más de 2 meses con fórmulas de soja. Se investigaron: antigenicidad de soja y soja digerida por pruebas de precipitación en gel y hemaglutinación pasiva. En sueros, sobrenadantes de cultivos sin antígeno y sobrenadantes de cultivos adicionados de PHA se midieron niveles de IgE por EIA, total en KU/I y específica para leche y soja: prick y desgranulación de basófilos. Se midieron IgG e IgAS por inmunodifusión radial y calcemia por método colorimétrico directo. Se determinaron niveles de sCD23, receptos de baja afinidad para Fc de IgE y la correlación entre sCD23 y niveles séricos de IgE total. Resultó que soja digerida era menos inmunógena que soja (p<0,01) tanto en lactantes alérgicos como en animales de experimentación. El producto natural mostró antigenicidad cruzada con las fórmulas comerciales. Se detectaron por Ppt Acs para soja en 25 niños y para soja digerida en 3. Por hemaglutinación se detectaron anticuerpos para soja en todos los casos y para soja digerida en 6. Se hallaron antígenos completos o haptenos relacionados en todos los casos. Los niveles de IgG e IgAs no se modificaron con la dieta. En sueros y sobrenadantes de cultivos los niveles de IgE total asi como de IgE leche se elevaron mientras que IgE-soja no se modificaron en el transcurso del seguimiento. En los prick tests fueron reactivos 12 pacientes a soja y 4 a soja digerida. La correlación entre niveles de desgranulación de basófilos reaccionaron 17 con soja y 7 con soja digerida. La correlación entre niveles de desgranulación de basófilos e IgE-leche fue de r=0,69 y para IgE-soja r=0,11. La correlación entre puntaje de síntomas y bajos niveles de calcemia fue: r=0,57. La digestión de soja logró péptidos menos reactivos in vivo e in vitro. Soja digerida provocó escasa estimulación linfoblástica específica para la síntesis de IgE en sobrenadantes de cultivos. Habría Acs coprecipitantes bloqueadores de anafilaxia...(AU)

Antigenicidad de fórmulas de soja en lactantes alérgicos a la leche de vaca / Antigenicity of formulas of soy in infants allergic to cow's milk

Se estudiaron las propiedades hipoalergénicas de soja parcialmente hidrolizada como alimento destinado a alérgicos a leche de vaca y reactivos a epitopes lácteos que persisten o aparecen luego de digestión parcial. Se realizó in vitro la hidrólisis parcial de soja. Se comprobaron las modificaciones por electroforesis en poliacrilamida aniónica. Se evaluaron las respuestas humoral y celular por parámetros in vivo e in vitro en pacientes alérgicos a leche de vaca, alimentados más de 2 meses con fórmulas de soja. Se investigaron: antigenicidad de soja y soja digerida por pruebas de precipitación en gel y hemaglutinación pasiva. En sueros, sobrenadantes de cultivos sin antígeno y sobrenadantes de cultivos adicionados de PHA se midieron niveles de IgE por EIA, total en KU/I y específica para leche y soja: prick y desgranulación de basófilos. Se midieron IgG e IgAS por inmunodifusión radial y calcemia por método colorimétrico directo. Se determinaron niveles de sCD23, receptos de baja afinidad para Fc de IgE y la correlación entre sCD23 y niveles séricos de IgE total. Resultó que soja digerida era menos inmunógena que soja (p<0,01) tanto en lactantes alérgicos como en animales de experimentación. El producto natural mostró antigenicidad cruzada con las fórmulas comerciales. Se detectaron por Ppt Acs para soja en 25 niños y para soja digerida en 3. Por hemaglutinación se detectaron anticuerpos para soja en todos los casos y para soja digerida en 6. Se hallaron antígenos completos o haptenos relacionados en todos los casos. Los niveles de IgG e IgAs no se modificaron con la dieta. En sueros y sobrenadantes de cultivos los niveles de IgE total asi como de IgE leche se elevaron mientras que IgE-soja no se modificaron en el transcurso del seguimiento. En los prick tests fueron reactivos 12 pacientes a soja y 4 a soja digerida. La correlación entre niveles de desgranulación de basófilos reaccionaron 17 con soja y 7 con soja digerida. La correlación entre niveles de desgranulación de basófilos e IgE-leche fue de r=0,69 y para IgE-soja r=0,11. La correlación entre puntaje de síntomas y bajos niveles de calcemia fue: r=0,57. La digestión de soja logró péptidos menos reactivos in vivo e in vitro. Soja digerida provocó escasa estimulación linfoblástica específica para la síntesis de IgE en sobrenadantes de cultivos. Habría Acs coprecipitantes bloqueadores de anafilaxia...

Genetic analysis of the fluorescein isothiocyanate binding site of the yeast plasma membrane H(+)-ATPase.

The highly conserved motif of Saccharomyces cerevisiae H(+)-ATPase 474KGAP has been proposed to participate in the formation of the phosphorylated intermediate during the catalytic cycle (Portillo, F., and Serrano, R. (1988) EMBO J. 7, 1793-1798). In addition, Lys-474 is the FITC binding site of the yeast enzyme (Portillo, F. and Serrano, R. (1989) Eur. J. Biochem. 186, 501-507). We have performed an intragenic suppressor analysis of the K474R mutation to identify the interacting regions involved in these functions. Random in vitro mutagenesis of the K474R allele resulted in seven suppressor (second-site) mutations. One mutation (V396I), located 18 residues away from the Asp-378 residue, which is phosphorylated during catalysis, is allele-specific. This provides genetic evidence of a direct interaction between the KGAP motif and the phosphorylation domain during the catalytic cycle. Three mutations (V484I, V484I/E485K, and E485K/E486K) are located near Lys-474 and may compense the structural alteration introduced by the K474R mutation. Two substitutions at the end of the predicted transmembrane stretch 2 (A165V and V169I/D170N) and another in the predicted ATP binding domain (P536L) may act as allele-nonspecific suppressors, as they are also able to suppress a mutation at the enzyme's carboxyl terminus.

Transcriptional control of yeast plasma membrane H(+)-ATPase by glucose. Cloning and characterization of a new gene involved in this regulation.

The expression of the ATPase gene (PMA1) is regulated by glucose (Rao, R., Drummond-Barbosa, D., and Slayman, C. W. (1993) Yeast 9, 1075-1084) and by the TUF/RAP1/GRF1 transcription factor (Capieaux, E., Vignais, M.-L., Sentenac, A., and Goffeau, A. (1989) J. Biol. Chem. 264, 7437-7446). In this work, we describe the isolation of mutations on seven genes that affect the levels of ATPase. One of these genes (APA1) was cloned by complementation and shown to encode a protein with six putative transmembrane stretches. Expression of APA1 gene is regulated by the carbon source and requires the protein GCR1. Deletion of APA1 causes a defective regulation of the PMA1 expression by glucose but has not noticeable effect on the expression of other TUF-regulated genes. Nevertheless the expression of glucose-repressible HXT3 and SNF3 genes is significantly reduced. These results suggest a model in which APA1 acts on a glucose-signaling pathway that controls the expression of several genes that are transcriptionally regulated by glucose.

Incidencia de Streptococcus mutans y alteración en la concentración de inmunoglobulinas séricas e IgAS en niños alérgicos con caries / Incidence of Streptococcus mutans and changes in the concentration of serum immunoglobulins and SIgA in allergic children with caries

Se investigó en niños alérgicos la incidencia de Streptococcus mutans en placa dental, la existencia de caries dentales y niveles modificados de Igs séricas de IgAS, la relación entre valores promedios de IgAS y a) dieta cariogánica, b) consumo de aguas con distintas concentraciones de fluoruros, c) diferentes hábitos de higiene bucal. Se realizó examen de las muestras obtenidas de placas dentales y caries por observación directa. Se hicieron cultivos en caldo tripticasa soya y agar sangre. Se llevaron a cabo las pruebas de catalasa, nitrato-reductasa y pruebas bioquímicas para identificar S. mutans. Las Igs séricas y las IgAS fueron medidas por la técnica de inmunodifusión radial. Se identificaron S. mutans en 25/45 muestras de niños alérgicos, en 3/16 no alérgicos, en 25/43 niños con caries y en 3/18 sin caries IgM alcanzó niveles más altos en los niños con caries. Los valores medios de IgA sérica fueron más en los alérgicos y aumentaron muy significantemente en los no alérgicos con caries. En los niños alérgicos se encontraron frecuentemente valores subnormales de IgAS. Dieta cariogénica, consumo de aguas fluoradas y hábito de higiene bucal no fueron factores incidentes en las concentraciones de IgAS. Los niños alérgicos manifestaron niveles disminuidos de IgA sérica y mostraron con mayor frecuencia S. mutans en placa dental. En estos niños estuvo disminuida la respuesta IgA clase específica a la invasión de microorganismos potencialmente cariógenos. Independientemente de que el niño fuera o no alérgico, la presencia de caries fue muchas veces acompañada de bajos niveles de IgAS. Los valores subnormales de IgAS pueden ser causa importante en el desarrollo de caries (AU)

Incidencia de Streptococcus mutans y alteración en la concentración de inmunoglobulinas séricas e IgAS en niños alérgicos con caries / Incidence of Streptococcus mutans and changes in the concentration of serum immunoglobulins and SIgA in allergic children with caries

Se investigó en niños alérgicos la incidencia de Streptococcus mutans en placa dental, la existencia de caries dentales y niveles modificados de Igs séricas de IgAS, la relación entre valores promedios de IgAS y a) dieta cariogánica, b) consumo de aguas con distintas concentraciones de fluoruros, c) diferentes hábitos de higiene bucal. Se realizó examen de las muestras obtenidas de placas dentales y caries por observación directa. Se hicieron cultivos en caldo tripticasa soya y agar sangre. Se llevaron a cabo las pruebas de catalasa, nitrato-reductasa y pruebas bioquímicas para identificar S. mutans. Las Igs séricas y las IgAS fueron medidas por la técnica de inmunodifusión radial. Se identificaron S. mutans en 25/45 muestras de niños alérgicos, en 3/16 no alérgicos, en 25/43 niños con caries y en 3/18 sin caries IgM alcanzó niveles más altos en los niños con caries. Los valores medios de IgA sérica fueron más en los alérgicos y aumentaron muy significantemente en los no alérgicos con caries. En los niños alérgicos se encontraron frecuentemente valores subnormales de IgAS. Dieta cariogénica, consumo de aguas fluoradas y hábito de higiene bucal no fueron factores incidentes en las concentraciones de IgAS. Los niños alérgicos manifestaron niveles disminuidos de IgA sérica y mostraron con mayor frecuencia S. mutans en placa dental. En estos niños estuvo disminuida la respuesta IgA clase específica a la invasión de microorganismos potencialmente cariógenos. Independientemente de que el niño fuera o no alérgico, la presencia de caries fue muchas veces acompañada de bajos niveles de IgAS. Los valores subnormales de IgAS pueden ser causa importante en el desarrollo de caries

[Incidence of Streptococcus mutans and changes in the concentration of serum immunoglobulins and SIgA in allergic children with caries]. / Incidencia de Streptococcus mutans y alteración en la concentración de inmunoglobulinas séricas e IgAS en niños alérgicos con caries.

The incidence of Streptococcus mutans in dental plaque and the relationship between dental caries and the levels of serum Igs and IgAS was investigated in allergic children. The relationship between IgAS mean levels and a) cariogenic diet, b) fluoride concentration in consumption water and c) different frequency in brush-washing was also studied. Direct examination of specimens obtained from either dental plaque or caries was performed. Cultures in tryptone soy agar and blood agar base were carried out. Catalase and nitrate reductase tests and biochemical tests for the identification of Streptococcus mutans were also done. Seric Igs and IgAS from saliva secretion were measured by radial immunodiffusion technique. Streptococcus mutans were found in 25/45 samples from allergic children, in 3/16 non allergic, in 25/43 children with caries and 3/18 children without caries. IgM reached higher levels in children with caries. Seric IgA average levels were lower in allergic children and were significantly increased in the non-allergic with caries. Most allergic children with caries showed very low IgAS values. Cariogenic diet, fluoride water ingestion and frequent brush-washing had no effect on IgAS concentration. Allergic children with caries showed low levels of seric IgA and Streptococcus mutans were frequently found in dental plaque. In these patients the specific class IgA response against the potentially cariogenic microorganisms was diminished. Allergic as well as non-allergic children with dental caries showed low IgAS levels suggesting that this may be an important factor in caries development.

Incidencia de Streptococcus mutans y alteración en la concentración de inmunoglobulinas séricas e IgAS en niños alérgicos con caries. / [Incidence of Streptococcus mutans and changes in the concentration of serum immunoglobulins and SIgA in allergic children with caries]

The incidence of Streptococcus mutans in dental plaque and the relationship between dental caries and the levels of serum Igs and IgAS was investigated in allergic children. The relationship between IgAS mean levels and a) cariogenic diet, b) fluoride concentration in consumption water and c) different frequency in brush-washing was also studied. Direct examination of specimens obtained from either dental plaque or caries was performed. Cultures in tryptone soy agar and blood agar base were carried out. Catalase and nitrate reductase tests and biochemical tests for the identification of Streptococcus mutans were also done. Seric Igs and IgAS from saliva secretion were measured by radial immunodiffusion technique. Streptococcus mutans were found in 25/45 samples from allergic children, in 3/16 non allergic, in 25/43 children with caries and 3/18 children without caries. IgM reached higher levels in children with caries. Seric IgA average levels were lower in allergic children and were significantly increased in the non-allergic with caries. Most allergic children with caries showed very low IgAS values. Cariogenic diet, fluoride water ingestion and frequent brush-washing had no effect on IgAS concentration. Allergic children with caries showed low levels of seric IgA and Streptococcus mutans were frequently found in dental plaque. In these patients the specific class IgA response against the potentially cariogenic microorganisms was diminished. Allergic as well as non-allergic children with dental caries showed low IgAS levels suggesting that this may be an important factor in caries development.