Validation of a Simple HPLC-Based Method for Lysine Quantification for Ruminant Nutrition.

Robust and selective quantification methods are required to better analyze feed supplementation effectiveness with specific amino acids. In this work, a reversed-phase high-performance liquid chromatography method with fluorescence detection is proposed and validated for lysine quantification, one of the most limiting amino acids in ruminant nutrition and essential towards milk production. To assess and widen method applicability, different matrices were considered: namely Li2CO3 buffer (the chosen standard reaction buffer), phosphate buffer solution (to mimic media in cellular studies), and rumen inoculum. The method was validated for all three matrices and found to be selective, accurate (92% ± 2%), and precise at both the inter- and intra-day levels in concentrations up to 225 µM, with detection and quantification limits lower than 1.24 and 4.14 µM, respectively. Sample stability was evaluated when stored at room temperature, 4 °C, and -20 °C, showing consistency for up to 48 h regardless of the matrix. Finally, the developed method was applied in the quantification of lysine on real samples. The results presented indicate that the proposed method can be applied towards free lysine quantification in ruminant feeding studies and potentially be of great benefit to dairy cow nutrition supplementation and optimization.

Structural dynamics of the β-coronavirus Mpro protease ligand binding sites

{beta}-coronaviruses alone have been responsible for three major global outbreaks in the 21st century. The current crisis has led to an urgent requirement to develop therapeutics. Even though a number of vaccines are available, alternative strategies targeting essential viral components are required as a back-up against the emergence of lethal viral variants. One such target is the main protease (Mpro) that plays an indispensible role in viral replication. The availability of over 270 Mpro X-ray structures in complex with inhibitors provides unique insights into ligand-protein interactions. Herein, we provide a comprehensive comparison of all non-redundant ligand-binding sites available for SARS-CoV2, SARS-CoV and MERS-CoV Mpro. Extensive adaptive sampling has been used to explore conformational dynamics employing convolutional variational auto encoder-based deep learning, and investigates structural conservation of the ligand binding sites using Markov state models across {beta}-coronavirus homologs. Our results indicate that not all ligand-binding sites are dynamically conserved despite high sequence and structural conservation across {beta}-coronavirus homologs. This highlights the complexity in targeting all three Mpro enzymes with a single pan inhibitor.

Preocupações maternas no pós-parto: Estudo em puérperas às três semanas após a alta da maternidade / Maternal preoccupations in the postpartum period: A study of postpartum women three weeks after discharge from the maternity hospital

Este estudo subordinado ao tema " Preocupações maternas no pós-parto: estudo em puérperas às três semanas após a alta da maternidade " é um estudo de carácter quantitativo, descritivo-correlacional cuja amostra é constituída por 245 puérperas. Foram utilizadas três escalas: Escala de Vinculação do Adulto (EVA- M. C. Canavarro 1995, Versão Portuguesa da Adult Attacment Scale (Collins & Read, 1990), Escala de Auto-percepção Materna nos Cuidados Neonatais (EAPMCCN ­ Mendes & Santos, 2009) e o Questionário de Preocupações Maternas (QPM), de Sheil et al, (1985), versão piloto Portuguesa de Mendes, Rodrigues, Santos & Pedrosa (2010). Os objectivos que delineámos para o presente estudo foram: identificar as principais preocupações sentidas pelas puérperas após a alta da maternidade e analisar factores associados com as preocupações maternas no período pós-parto. O estudo permitiu concluir que as principais preocupações maternas após a alta da maternidade foram ­ Em relação a si: "Cansaço", "Cuidado com as mamas", "Tensão emocional". ­ Relacionadas com o bebé: "Crescimento e desenvolvimento normais", "Ser uma boa mãe", " Reconhecer sinais de doença". ­ Relacionadas com o companheiro: "Relações sexuais", "Terem tempo para estarem sozinhos", "Planeamento familiar". ­ Referentes à família: "Recursos económicos","Gerir as exigências do lar", "Mudança do estilo de vida familiar". ­ Relativas à comunidade: "Trabalho/Emprego", "Acesso aos cuidados de saúde", "Facilidade de aceder às compras". Os itens para os quais as mães demonstraram menor auto-percepção das suas competências no cuidado ao RN para a Dimensão cognitivo-motora foram: "Identificar as características da urina", "Identificar as características das fezes" e "Definir o horário de dar de mamar". Para a Dimensão cognitivo-afectiva, foram: "Identificar os diferentes tipos de sono" e "Perceber quando o bebé está irritado". Este estudo permitiu identificar um conjunto de preocupações maternas bem como a identificação de factores associados com estas preocupações, de onde se evidencia que o tipo de parto e a auto-percepção das competências maternas influencia as preocupações das puérperas. Deste modo, actuação dos enfermeiros junto das puérperas (nos serviços onde o estudo foi desenvolvido) deverá promover de forma mais efectiva a aquisição de competências, conhecimentos e habilidades na preparação para a alta, com especial ênfase nos aspectos onde foram verificadas as maiores preocupações e onde foram identificados níveis mais baixos de competência materna.