Identificación de porphyromonas gingivalis por inmunofluorescencia en muestras de placa subgingival de pacientes con periodontitis / Identification of gingival porphyromonas by Immunofluorescence in samples of sub gingival plaque of patients with periodontitis

El propósito de este estudio fue identificar la porphyromonas gingivalis (P.g.) en muestras de placa subgingival de pacientes con periodontitis por inmunofluorescencia, usando un anticuerpo policlonal anti-P gingivales obtenido a partir de la yema de huevos de gallina. Se obtuvo por medio del sistema comercial EGGstrac, el cual garantiza un 90 de pureza del anticuerpo recuperado. Se tomaron muestras de 14 pacientes con diagnóstico de periodontitis del adulto, las cuales fueron procesadas para inmunofluorescencia indirecta, previamente estandarizada, usando diferentes diluciones de p.gingivalis cepaATCC 33277 y diferentes diluciones de anticuerpo anti p.gingivalis y conjugado. Finalmente se utilizó una dilucion del antígeno 1:2, de IgY anti-P gingivalis 1:1000 al igual que IgY preinmune y del conjugado una dilucion de 1:200. El examen en el microscopio de fluorescencia reveló marcaje del antígeno Pgingivalis en 11 de las 14 muestras (78.5), correspondientes a pacientes con diagnóstico de periodontitis del adulto activa. Tres de las 14 muestras (21.5) fueron negativas para el antígeno de Pgingivalis; correspondiendo a dos pacientes que recibieron raspaje y alisado radicular, y a un paciente con diagnóstico de periodontitis Rápida progresiva. Se puede concluir, que la efectividad del anticuerpo anti-P.gingivalis es relevante ya que muestra reacción con el antígeno de fluorescencia en una dilución de 1:3200 y la técnica de inmunofluorescencia es efectiva y rápida para el diagnóstico de este microorganismo asociado a la enfermedad periodontal.

Obtención y caracterización inmunoquímica de una IgY anti-porphyromonas gingivalis / Immunochemical and characterization of a IgY Anti-gingival porphyromonas

El objetivo principal de este trabajo fue la producción y caraterización inmunoquímica de anticuerpos policlonales aviares dirigidos contra porphyromonas gingivalis (P.g). La bacteria fue cultivada en ambiente de anaerobiosis, se homogenizó y se realizaron electroforesis denaturantes para conocer su perfil. Con el homogenizado se inmunizaron dos gallinas Leghorn y se hizo la recolección de los huevos, tanto pre-inmunes, como a los 5 días de terminado el esquema de inmunización. Fueron determinadas las concentraciones de inmunoglobulina presentes, su peso molecular y la pureza del purificado mediante electroforesis no denaturante. Se realizaron pruebas con las diluciones mínimas de trabajo del homogenizado bacteriano (Antígeno), del anticuerpo anti P.g. y del conjugado anti IgY en Dot blot y finalmente un Western blot proporcionó información acerca de la sensibilidad de los complejos formados por proteínas reconocidas por los anticuerpos. Los resultados evidenciaron en primera instancia un alto rendimiento en el proceso de purificación de la IgY y adicionalmente un reconocimiento de alta especificidad y sensibilidad tanto en el Dot blot como en el Western blot, demostrando las grandes ventajas de usar modelos diferentes a los de mamíferos para la obtención de anticuerpos para la investigación, diagnóstico y terapéutica.