Pulsed Field Gel Electrophoresis: Past, present, and future.

Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) has been considered for many years the 'gold-standard' for characterizing many pathogenic organisms as well as for subtyping bacterial species causing infection outbreaks. This article reviews the basic principles of PFGE and it includes the main advantages and limitations of the different electrode configurations that have been used in PFGE equipment and their influence on the DNA electrophoretic separation. Remarkably, we summarize here the most relevant theoretical and practical aspects that we have learned for more than 20 years developing and using the miniaturized PFGE systems. We also discussed the theoretical aspects related to DNA migration in PFGE agarose gels. It served as the basis for simulating the DNA electrophoretic patterns in CHEF mini gels and mini-chambers during experimental design and optimization. A critical comparison between standard and miniaturized PFGE systems, as well as the enzymatic and non-enzymatic methods for intact immobilized DNA preparation, is provided throughout the review. The PFGE current applications, advantages, limitations and future challenges of the methodology are also discussed.

Evaluación de la respuesta inmune humoral por western blot en ratones inmunizados con una biblioteca genómica de expresión de Trypanosoma cruzi / Evaluation of the answer immune humoral for western blot in mice immunized with a library genómica of expression of Trypanosoma cruzi

Se construyó una biblioteca genómica de expresión de Trypanosoma cruzi con la utilización como vector el plásmido pcDNA3, con la cual se inmunizaron ratones de la línea isogénica BALB/c por vía intramuscular. Se empleó un grupo control positivo al que se le administraron antígenos solubles de T. cruzi y otro grupo que recibió el plásmido utilizado para la construcción de la biblioteca genómica; un grupo no recibió inmunización. A todos los animales se les extrajo sangre del plexo retrorbital 2 semanas posteriores a la tercera inmunización, para estudiar la respuesta de anticuerpos específicos contra los antígenos solubles del parásito mediante la técnica de western blot. Se obtuvo una respuesta de anticuerpos en los animales inmunizados con la biblioteca genómica de expresión y con antígenos solubles del parásito(AU)