First record of Bulimulus tenuissimus (Mollusca) as potential experimental intermediate host of Angiostrongylus cantonensis (Nematoda) / Primeiro registro de Bulimulus tenuissimus (Mollusca) como hospedeiro intermediário de Angiostrongylus cantonensis (Nematoda)

Abstract Snails are essential to complete the life cycle of the metastrongylid nematode Angiostrongylus cantonensis, the causative agent of infections in domestic and wild animals, mainly rodents, and also of neural angiostrongyliasis or eosinophilic meningitis in humans. There are many reports of mollusks that can act as intermediate hosts of this parasite, especially freshwater snails and the African giant Achatina fulica. The terrestrial gastropod Bulimulus tenuissimus is widely distributed in Brazil and other species of the same genus occur in Brazil and other countries, overlapping regions in which there are reports of the occurrence of A. cantonensis and angiostrongyliasis. In spite of this, there are no records in the literature of this species performing the role of intermediate host to A. cantonensis. The present study analyzed the experimental infection with first-stage larvae of A. cantonensis, under laboratory conditions, of B. tenuissimus, by using histology and electron microscopy techniques. Three weeks after exposure to L1 larvae, it was possible to recover L3 larvae in small numbers from the infected snails. Developing larvae were observed in the cephalopedal mass (foot), ovotestis, and mantle tissues, being located inside a granulomatous structure composed of hemocyte infiltration, but there was no calcium or collagen deposition in these structures in significant amounts. In the third week post exposure, it was possible observe a sheath around the developing larvae. The infected snails presented reduction in the fibrous muscular tissue in the foot region, loss of the acinar organization in the digestive gland, with increase of amorphous material inside the acini and loss of epithelial pattern of nuclear organization in the acinar cells. However, the ovotestis seemed unaffected by the infection, since there was a large number of developing oocytes and spermatozoa in different stages of formation. The digestion of infected snails allows us the third-stage recovery rate of 17.25%, at 14 days post exposure to the L1. These L3 recovered from B. tenuissimus were used to infect rats experimentally, and 43 days post infection first-stage (L1) larvae of A. cantonensis were recovered from fresh feces. The results presented constituted the first report of the role of B. tenuissimus as an experimental intermediate host to A. cantonensis and shed some light on a possible problem, since the overlapping distribution of B. tenuissimus and A. cantonensis in Brazil and other countries where different species of Bulimulus occur enables the establishment and maintenance of the life cycle of this parasite in nature, with wild rodents as reservoirs, acting as a source of infection to humans, causing neural angiostrongyliasis.

Resumo Os moluscos são um requisito essencial para a conclusão do ciclo de vida pelo nematoide metastrogilídeo Angiostrongylus cantonensis, o agente causador de infecções em animais domésticos e selvagens, principalmente roedores, e também de angiostrongilíase neural ou meningite eosinofílica em humanos. Há muitos relatos de moluscos que podem atuar como hospedeiro para este parasito, sendo o foco dado aos moluscos de água doce e no gigante africano Achatina fulica. O gastrópode terrestre Bulimulus tenuissimus é amplamente distribuído no território brasileiro e há outras espécies do mesmo gênero que ocorrem no Brasil e outros países, sobrepondo-se às regiões em que há relatos à ocorrência de A. cantonensis e angiostornigilíase. Apesar disso, não há registro na literatura, acerca desta espécie como hospedeiro intermediário para A. cantonensis. O presente estudo teve como objetivo verificar a possibilidade de infectar experimentalmente, utilizando larvas L1 de A. cantonensis, em condições laboratoriais, o molusco B. tenuissimus, utilizando técnicas de histologia e microscopia eletrônica. Três semanas após a exposição às larvas L1, foi possível recuperar larvas L3 dos moluscos infectados, em pequena quantidade. As larvas em desenvolvimento foram observadas na massa cefalopediosa (pé), ovotestis e nos tecidos do manto, sendo localizadas dentro de uma estrutura granulomatosa constituída por infiltração hemocitária, mas não houve deposição de cálcio ou colágeno nessas estruturas em quantidade significativa. Na terceira semana pós exposição, foi possível observar uma bainha ao redor das larvas em desenvolvimento. Os caracóis infectados apresentaram redução no tecido muscular fibroso na região do pé, perda da organização acinar na glândula digestiva, com aumento de material amorfo dentro dos ácinos e perda do padrão epitelial da organização nuclear nas células acinares. No entanto, o ovotestis, pareceu não ser afetado pela infecção, uma vez que houve um grande número de oócitos em desenvolvimento e espermatozóides em diferentes estágios de formação. A digestão dos moluscos infectados nos permitiu a recuperação de larvas de terceiro estágio (17,25%), aos 14 dias após a exposição à L1 de A. cantonensis . Estas L3 recuperadas de B. tenuissimus foram utilizados para infectar ratos experimentalmente, e 43 dias após a infecção, as larvas do primeiro estágio (L1) foram recuperadas de fezes frescas. Os resultados apresentados representam o primeiro registro do papel de B. tenuissimus como hospedeiro intermediário experimental de A. cantonensis e trazem alguma luz a um problema, até então silencioso, uma vez que a sobreposição da distribuição de B. tenuissimus e A. cantonensis no Brasil, e outros países, onde as diferentes espécies de Bulimulus ocorrem, torna possível o estabelecimento e manutenção do ciclo de vida deste parasito na natureza, com roedores selvagens como reservatório, agindo como fonte de infecção para humanos e causando a angiostrongilíase neural.

First record of Bulimulus tenuissimus (Mollusca) as potential experimental intermediate host of Angiostrongylus cantonensis (Nematoda).

Snails are essential to complete the life cycle of the metastrongylid nematode Angiostrongylus cantonensis, the causative agent of infections in domestic and wild animals, mainly rodents, and also of neural angiostrongyliasis or eosinophilic meningitis in humans. There are many reports of mollusks that can act as intermediate hosts of this parasite, especially freshwater snails and the African giant Achatina fulica. The terrestrial gastropod Bulimulus tenuissimus is widely distributed in Brazil and other species of the same genus occur in Brazil and other countries, overlapping regions in which there are reports of the occurrence of A. cantonensis and angiostrongyliasis. In spite of this, there are no records in the literature of this species performing the role of intermediate host to A. cantonensis. The present study analyzed the experimental infection with first-stage larvae of A. cantonensis, under laboratory conditions, of B. tenuissimus, by using histology and electron microscopy techniques. Three weeks after exposure to L1 larvae, it was possible to recover L3 larvae in small numbers from the infected snails. Developing larvae were observed in the cephalopedal mass (foot), ovotestis, and mantle tissues, being located inside a granulomatous structure composed of hemocyte infiltration, but there was no calcium or collagen deposition in these structures in significant amounts. In the third week post exposure, it was possible observe a sheath around the developing larvae. The infected snails presented reduction in the fibrous muscular tissue in the foot region, loss of the acinar organization in the digestive gland, with increase of amorphous material inside the acini and loss of epithelial pattern of nuclear organization in the acinar cells. However, the ovotestis seemed unaffected by the infection, since there was a large number of developing oocytes and spermatozoa in different stages of formation. The digestion of infected snails allows us the third-stage recovery rate of 17.25%, at 14 days post exposure to the L1. These L3 recovered from B. tenuissimus were used to infect rats experimentally, and 43 days post infection first-stage (L1) larvae of A. cantonensis were recovered from fresh feces. The results presented constituted the first report of the role of B. tenuissimus as an experimental intermediate host to A. cantonensis and shed some light on a possible problem, since the overlapping distribution of B. tenuissimus and A. cantonensis in Brazil and other countries where different species of Bulimulus occur enables the establishment and maintenance of the life cycle of this parasite in nature, with wild rodents as reservoirs, acting as a source of infection to humans, causing neural angiostrongyliasis.

First record of Bulimulus tenuissimus (Mollusca) as potential experimental intermediate host of Angiostrongylus cantonensis (Nematoda) / Primeiro registro de Bulimulus tenuissimus (Mollusca) como hospedeiro intermediário de Angiostrongylus cantonensis (Nematoda)

Snails are essential to complete the life cycle of the metastrongylid nematode Angiostrongylus cantonensis, the causative agent of infections in domestic and wild animals, mainly rodents, and also of neural angiostrongyliasis or eosinophilic meningitis in humans. There are many reports of mollusks that can act as intermediate hosts of this parasite, especially freshwater snails and the African giant Achatina fulica. The terrestrial gastropod Bulimulus tenuissimus is widely distributed in Brazil and other species of the same genus occur in Brazil and other countries, overlapping regions in which there are reports of the occurrence of A. cantonensis and angiostrongyliasis. In spite of this, there are no records in the literature of this species performing the role of intermediate host to A. cantonensis. The present study analyzed the experimental infection with first-stage larvae of A. cantonensis, under laboratory conditions, of B. tenuissimus, by using histology and electron microscopy techniques. Three weeks after exposure to L1 larvae, it was possible to recover L3 larvae in small numbers from the infected snails. Developing larvae were observed in the cephalopedal mass (foot), ovotestis, and mantle tissues, being located inside a granulomatous structure composed of hemocyte infiltration, but there was no calcium or collagen deposition in these structures in significant amounts. In the third week post exposure, it was possible observe a sheath around the developing larvae. The infected snails presented reduction in the fibrous muscular tissue in the foot region, loss of the acinar organization in the digestive gland, with increase of amorphous material inside the acini and loss of epithelial pattern of nuclear organization in the acinar cells. However, the ovotestis seemed unaffected by the infection, since there was a large number of developing oocytes and spermatozoa in different stages of formation. The digestion of infected snails allows us the third-stage recovery rate of 17.25%, at 14 days post exposure to the L1. These L3 recovered from B. tenuissimus were used to infect rats experimentally, and 43 days post infection first-stage (L1) larvae of A. cantonensis were recovered from fresh feces. The results presented constituted the first report of the role of B. tenuissimus as an experimental intermediate host to A. cantonensis and shed some light on a possible problem, since the overlapping distribution of B. tenuissimus and A. cantonensis in Brazil and other countries where different species of Bulimulus occur enables the establishment and maintenance of the life cycle of this parasite in nature, with wild rodents as reservoirs, acting as a source of infection to humans, causing neural angiostrongyliasis(AU).

Os moluscos são um requisito essencial para a conclusão do ciclo de vida pelo nematoide metastrogilídeo Angiostrongylus cantonensis, o agente causador de infecções em animais domésticos e selvagens, principalmente roedores, e também de angiostrongilíase neural ou meningite eosinofílica em humanos. Há muitos relatos de moluscos que podem atuar como hospedeiro para este parasito, sendo o foco dado aos moluscos de água doce e no gigante africano Achatina fulica. O gastrópode terrestre Bulimulus tenuissimus é amplamente distribuído no território brasileiro e há outras espécies do mesmo gênero que ocorrem no Brasil e outros países, sobrepondo-se às regiões em que há relatos à ocorrência de A. cantonensis e angiostornigilíase. Apesar disso, não há registro na literatura, acerca desta espécie como hospedeiro intermediário para A. cantonensis. O presente estudo teve como objetivo verificar a possibilidade de infectar experimentalmente, utilizando larvas L1 de A. cantonensis, em condições laboratoriais, o molusco B. tenuissimus, utilizando técnicas de histologia e microscopia eletrônica. Três semanas após a exposição às larvas L1, foi possível recuperar larvas L3 dos moluscos infectados, em pequena quantidade. As larvas em desenvolvimento foram observadas na massa cefalopediosa (pé), ovotestis e nos tecidos do manto, sendo localizadas dentro de uma estrutura granulomatosa constituída por infiltração hemocitária, mas não houve deposição de cálcio ou colágeno nessas estruturas em quantidade significativa. Na terceira semana pós exposição, foi possível observar uma bainha ao redor das larvas em desenvolvimento. Os caracóis infectados apresentaram redução no tecido muscular fibroso na região do pé, perda da organização acinar na glândula digestiva, com aumento de material amorfo dentro dos ácinos e perda do padrão epitelial da organização nuclear nas células acinares. No entanto, o ovotestis, pareceu não ser afetado pela infecção, uma vez que houve um grande número de oócitos em desenvolvimento e espermatozóides em diferentes estágios de formação. A digestão dos moluscos infectados nos permitiu a recuperação de larvas de terceiro estágio (17,25%), aos 14 dias após a exposição à L1 de A. cantonensis . Estas L3 recuperadas de B. tenuissimus foram utilizados para infectar ratos experimentalmente, e 43 dias após a infecção, as larvas do primeiro estágio (L1) foram recuperadas de fezes frescas. Os resultados apresentados representam o primeiro registro do papel de B. tenuissimus como hospedeiro intermediário experimental de A. cantonensis e trazem alguma luz a um problema, até então silencioso, uma vez que a sobreposição da distribuição de B. tenuissimus e A. cantonensis no Brasil, e outros países, onde as diferentes espécies de Bulimulus ocorrem, torna possível o estabelecimento e manutenção do ciclo de vida deste parasito na natureza, com roedores selvagens como reservatório, agindo como fonte de infecção para humanos e causando a angiostrongilíase neural.(AU)

First record of Bulimulus tenuissimus (Mollusca) as potential experimental intermediate host of Angiostrongylus cantonensis (Nematoda)

Abstract Snails are essential to complete the life cycle of the metastrongylid nematode Angiostrongylus cantonensis, the causative agent of infections in domestic and wild animals, mainly rodents, and also of neural angiostrongyliasis or eosinophilic meningitis in humans. There are many reports of mollusks that can act as intermediate hosts of this parasite, especially freshwater snails and the African giant Achatina fulica. The terrestrial gastropod Bulimulus tenuissimus is widely distributed in Brazil and other species of the same genus occur in Brazil and other countries, overlapping regions in which there are reports of the occurrence of A. cantonensis and angiostrongyliasis. In spite of this, there are no records in the literature of this species performing the role of intermediate host to A. cantonensis. The present study analyzed the experimental infection with first-stage larvae of A. cantonensis, under laboratory conditions, of B. tenuissimus, by using histology and electron microscopy techniques. Three weeks after exposure to L1 larvae, it was possible to recover L3 larvae in small numbers from the infected snails. Developing larvae were observed in the cephalopedal mass (foot), ovotestis, and mantle tissues, being located inside a granulomatous structure composed of hemocyte infiltration, but there was no calcium or collagen deposition in these structures in significant amounts. In the third week post exposure, it was possible observe a sheath around the developing larvae. The infected snails presented reduction in the fibrous muscular tissue in the foot region, loss of the acinar organization in the digestive gland, with increase of amorphous material inside the acini and loss of epithelial pattern of nuclear organization in the acinar cells. However, the ovotestis seemed unaffected by the infection, since there was a large number of developing oocytes and spermatozoa in different stages of formation. The digestion of infected snails allows us the third-stage recovery rate of 17.25%, at 14 days post exposure to the L1. These L3 recovered from B. tenuissimus were used to infect rats experimentally, and 43 days post infection first-stage (L1) larvae of A. cantonensis were recovered from fresh feces. The results presented constituted the first report of the role of B. tenuissimus as an experimental intermediate host to A. cantonensis and shed some light on a possible problem, since the overlapping distribution of B. tenuissimus and A. cantonensis in Brazil and other countries where different species of Bulimulus occur enables the establishment and maintenance of the life cycle of this parasite in nature, with wild rodents as reservoirs, acting as a source of infection to humans, causing neural angiostrongyliasis.

Resumo Os moluscos são um requisito essencial para a conclusão do ciclo de vida pelo nematoide metastrogilídeo Angiostrongylus cantonensis, o agente causador de infecções em animais domésticos e selvagens, principalmente roedores, e também de angiostrongilíase neural ou meningite eosinofílica em humanos. Há muitos relatos de moluscos que podem atuar como hospedeiro para este parasito, sendo o foco dado aos moluscos de água doce e no gigante africano Achatina fulica. O gastrópode terrestre Bulimulus tenuissimus é amplamente distribuído no território brasileiro e há outras espécies do mesmo gênero que ocorrem no Brasil e outros países, sobrepondo-se às regiões em que há relatos à ocorrência de A. cantonensis e angiostornigilíase. Apesar disso, não há registro na literatura, acerca desta espécie como hospedeiro intermediário para A. cantonensis. O presente estudo teve como objetivo verificar a possibilidade de infectar experimentalmente, utilizando larvas L1 de A. cantonensis, em condições laboratoriais, o molusco B. tenuissimus, utilizando técnicas de histologia e microscopia eletrônica. Três semanas após a exposição às larvas L1, foi possível recuperar larvas L3 dos moluscos infectados, em pequena quantidade. As larvas em desenvolvimento foram observadas na massa cefalopediosa (pé), ovotestis e nos tecidos do manto, sendo localizadas dentro de uma estrutura granulomatosa constituída por infiltração hemocitária, mas não houve deposição de cálcio ou colágeno nessas estruturas em quantidade significativa. Na terceira semana pós exposição, foi possível observar uma bainha ao redor das larvas em desenvolvimento. Os caracóis infectados apresentaram redução no tecido muscular fibroso na região do pé, perda da organização acinar na glândula digestiva, com aumento de material amorfo dentro dos ácinos e perda do padrão epitelial da organização nuclear nas células acinares. No entanto, o ovotestis, pareceu não ser afetado pela infecção, uma vez que houve um grande número de oócitos em desenvolvimento e espermatozóides em diferentes estágios de formação. A digestão dos moluscos infectados nos permitiu a recuperação de larvas de terceiro estágio (17,25%), aos 14 dias após a exposição à L1 de A. cantonensis . Estas L3 recuperadas de B. tenuissimus foram utilizados para infectar ratos experimentalmente, e 43 dias após a infecção, as larvas do primeiro estágio (L1) foram recuperadas de fezes frescas. Os resultados apresentados representam o primeiro registro do papel de B. tenuissimus como hospedeiro intermediário experimental de A. cantonensis e trazem alguma luz a um problema, até então silencioso, uma vez que a sobreposição da distribuição de B. tenuissimus e A. cantonensis no Brasil, e outros países, onde as diferentes espécies de Bulimulus ocorrem, torna possível o estabelecimento e manutenção do ciclo de vida deste parasito na natureza, com roedores selvagens como reservatório, agindo como fonte de infecção para humanos e causando a angiostrongilíase neural.

First record of Bulimulus tenuissimus (Mollusca) as potential experimental intermediate host of Angiostrongylus cantonensis (Nematoda)

Abstract Snails are essential to complete the life cycle of the metastrongylid nematode Angiostrongylus cantonensis, the causative agent of infections in domestic and wild animals, mainly rodents, and also of neural angiostrongyliasis or eosinophilic meningitis in humans. There are many reports of mollusks that can act as intermediate hosts of this parasite, especially freshwater snails and the African giant Achatina fulica. The terrestrial gastropod Bulimulus tenuissimus is widely distributed in Brazil and other species of the same genus occur in Brazil and other countries, overlapping regions in which there are reports of the occurrence of A. cantonensis and angiostrongyliasis. In spite of this, there are no records in the literature of this species performing the role of intermediate host to A. cantonensis. The present study analyzed the experimental infection with first-stage larvae of A. cantonensis, under laboratory conditions, of B. tenuissimus, by using histology and electron microscopy techniques. Three weeks after exposure to L1 larvae, it was possible to recover L3 larvae in small numbers from the infected snails. Developing larvae were observed in the cephalopedal mass (foot), ovotestis, and mantle tissues, being located inside a granulomatous structure composed of hemocyte infiltration, but there was no calcium or collagen deposition in these structures in significant amounts. In the third week post exposure, it was possible observe a sheath around the developing larvae. The infected snails presented reduction in the fibrous muscular tissue in the foot region, loss of the acinar organization in the digestive gland, with increase of amorphous material inside the acini and loss of epithelial pattern of nuclear organization in the acinar cells. However, the ovotestis seemed unaffected by the infection, since there was a large number of developing oocytes and spermatozoa in different stages of formation. The digestion of infected snails allows us the third-stage recovery rate of 17.25%, at 14 days post exposure to the L1. These L3 recovered from B. tenuissimus were used to infect rats experimentally, and 43 days post infection first-stage (L1) larvae of A. cantonensis were recovered from fresh feces. The results presented constituted the first report of the role of B. tenuissimus as an experimental intermediate host to A. cantonensis and shed some light on a possible problem, since the overlapping distribution of B. tenuissimus and A. cantonensis in Brazil and other countries where different species of Bulimulus occur enables the establishment and maintenance of the life cycle of this parasite in nature, with wild rodents as reservoirs, acting as a source of infection to humans, causing neural angiostrongyliasis.

Resumo Os moluscos são um requisito essencial para a conclusão do ciclo de vida pelo nematoide metastrogilídeo Angiostrongylus cantonensis, o agente causador de infecções em animais domésticos e selvagens, principalmente roedores, e também de angiostrongilíase neural ou meningite eosinofílica em humanos. Há muitos relatos de moluscos que podem atuar como hospedeiro para este parasito, sendo o foco dado aos moluscos de água doce e no gigante africano Achatina fulica. O gastrópode terrestre Bulimulus tenuissimus é amplamente distribuído no território brasileiro e há outras espécies do mesmo gênero que ocorrem no Brasil e outros países, sobrepondo-se às regiões em que há relatos à ocorrência de A. cantonensis e angiostornigilíase. Apesar disso, não há registro na literatura, acerca desta espécie como hospedeiro intermediário para A. cantonensis. O presente estudo teve como objetivo verificar a possibilidade de infectar experimentalmente, utilizando larvas L1 de A. cantonensis, em condições laboratoriais, o molusco B. tenuissimus, utilizando técnicas de histologia e microscopia eletrônica. Três semanas após a exposição às larvas L1, foi possível recuperar larvas L3 dos moluscos infectados, em pequena quantidade. As larvas em desenvolvimento foram observadas na massa cefalopediosa (pé), ovotestis e nos tecidos do manto, sendo localizadas dentro de uma estrutura granulomatosa constituída por infiltração hemocitária, mas não houve deposição de cálcio ou colágeno nessas estruturas em quantidade significativa. Na terceira semana pós exposição, foi possível observar uma bainha ao redor das larvas em desenvolvimento. Os caracóis infectados apresentaram redução no tecido muscular fibroso na região do pé, perda da organização acinar na glândula digestiva, com aumento de material amorfo dentro dos ácinos e perda do padrão epitelial da organização nuclear nas células acinares. No entanto, o ovotestis, pareceu não ser afetado pela infecção, uma vez que houve um grande número de oócitos em desenvolvimento e espermatozóides em diferentes estágios de formação. A digestão dos moluscos infectados nos permitiu a recuperação de larvas de terceiro estágio (17,25%), aos 14 dias após a exposição à L1 de A. cantonensis . Estas L3 recuperadas de B. tenuissimus foram utilizados para infectar ratos experimentalmente, e 43 dias após a infecção, as larvas do primeiro estágio (L1) foram recuperadas de fezes frescas. Os resultados apresentados representam o primeiro registro do papel de B. tenuissimus como hospedeiro intermediário experimental de A. cantonensis e trazem alguma luz a um problema, até então silencioso, uma vez que a sobreposição da distribuição de B. tenuissimus e A. cantonensis no Brasil, e outros países, onde as diferentes espécies de Bulimulus ocorrem, torna possível o estabelecimento e manutenção do ciclo de vida deste parasito na natureza, com roedores selvagens como reservatório, agindo como fonte de infecção para humanos e causando a angiostrongilíase neural.

Molecular investigation of Neorickettsia risticii in trematodes and snails in a region with serological evidence of this agent in horses, state of Rio de Janeiro / Pesquisa molecular de Neorickettsia risticii em trematódeos e moluscos em região com evidência sorológica do agente em equinos, estado do Rio de Janeiro

In Brazil, some studies have indicated that Neorickettsia risticii circulates in horses, but it is unclear which are the possible intermediate vectors of this bacterium in the country. The aim of this study was to use molecular techniques in order to analyze the presence of N. risticii in snails and larval stages of trematodes in farms in a region with a history of seroreactive horses towards this bacterium, in Rio de Janeiro, Brazil. Convenience sampling was used in the studied region. The collected snails were exposed to incandescent light (60W) for 2-4 hours in order to investigate trematodes in larval forms. Deoxyribonucleic acid (DNA) was extracted from snail tissue and trematode. Real-time PCR (qPCR) technique was used to investigate the presence of a 16S rRNA gene fragment of N. risticii. Snail specimens (n=410) were collected from 11 horse-breeding farms, and the following species were identified: Melanoides tuberculata, Pomacea sp., Biomphalaria tenagophila, Physa acuta, Drepanotrema anatinum and Biomphalaria straminea. Only 3.17% (n=13/410) of the collected snails were infected by trematodes. The cercariae obtained from these snails were classified as Megalourous cercariae, Pleurolophocercus cercariae and Furcocercous cercariae. There was no amplification of the target DNA of N. risticii in the snail and trematode samples tested by qPCR. Based on these data, the transmission of N. risticii by trematodes using these snail species in this region does not appear to occur or occurs at very low rates. Thus, further studies are needed in order to clarify which species of invertebrate hosts are infected by this bacterium and potentially participate in the transmission chain of equine neorickettsiosis in the state of Rio de Janeiro, Brazil.(AU)

No Brasil, estudos apontam a circulação de Neorickettsia risticii em equinos, contudo não estão claros quais os possíveis vetores intermediários dessa bactéria no país. O objetivo do presente estudo foi analisar a presença de N. risticii, utilizando-se técnicas moleculares, em caramujos e estágios larvais de trematódeos em propriedades rurais de uma região com histórico de equinos sororreativos para essa bactéria, no Rio de Janeiro, Brasil. Uma amostragem por conveniência foi utilizada na região de estudo. Os caramujos coletados foram expostos à luz incandescente (60W) durante duas-quatro horas para a investigação de trematódeos nas formas larvais. A extração de ácido desoxirribonucleico (DNA) foi realizada em tecidos de caramujos e trematódeos. A técnica de PCR em tempo real (qPCR) foi utilizada para investigar a presença de um fragmento do gene 16S rRNA de N. risticii. Foram coletados 410 espécimes de caramujos de 11 propriedades com criações de equinos, sendo identificadas as seguintes espécies: Melanoides tuberculata, Pomacea sp., Biomphalaria tenagophila, Physa acuta, Drepanotrema anatinum e Biomphalaria straminea. Apenas 3,17% (n=13/410) dos caramujos identificados estavam infectados por trematódeos. As cercárias obtidas desses caramujos foram classificadas em Megalourous cercariae, Pleurolophocercus cercariae e Furcocercous cercariae. Não foi observada a amplificação do DNA-alvo de N. risticii, por meio da qPCR, em nenhuma das amostras de caramujos e trematódeos testadas. Com base nesses dados, a transmissão de N. risticii por trematódeos que utilizam as espécies de caramujos nessa região parece não ocorrer ou ocorre a taxas muito reduzidas. Portanto, novos estudos são necessários para elucidar quais espécies de hospedeiros invertebrados se infectam por essa bactéria e potencialmente participam da cadeia de transmissão da neorickettsiose equina no estado do Rio de Janeiro, Brasil.(AU)

Molecular investigation of Neorickettsia risticii in trematodes and snails in a region with serological evidence of this agent in horses, state of Rio de Janeiro / Pesquisa molecular de Neorickettsia risticii em trematódeos e moluscos em região com evidência sorológica do agente em equinos, estado do Rio de Janeiro

In Brazil, some studies have indicated that Neorickettsia risticii circulates in horses, but it is unclear which are the possible intermediate vectors of this bacterium in the country. The aim of this study was to use molecular techniques in order to analyze the presence of N. risticii in snails and larval stages of trematodes in farms in a region with a history of seroreactive horses towards this bacterium, in Rio de Janeiro, Brazil. Convenience sampling was used in the studied region. The collected snails were exposed to incandescent light (60W) for 2-4 hours in order to investigate trematodes in larval forms. Deoxyribonucleic acid (DNA) was extracted from snail tissue and trematode. Real-time PCR (qPCR) technique was used to investigate the presence of a 16S rRNA gene fragment of N. risticii. Snail specimens (n=410) were collected from 11 horse-breeding farms, and the following species were identified: Melanoides tuberculata, Pomacea sp., Biomphalaria tenagophila, Physa acuta, Drepanotrema anatinum and Biomphalaria straminea. Only 3.17% (n=13/410) of the collected snails were infected by trematodes. The cercariae obtained from these snails were classified as Megalourous cercariae, Pleurolophocercus cercariae and Furcocercous cercariae. There was no amplification of the target DNA of N. risticii in the snail and trematode samples tested by qPCR. Based on these data, the transmission of N. risticii by trematodes using these snail species in this region does not appear to occur or occurs at very low rates. Thus, further studies are needed in order to clarify which species of invertebrate hosts are infected by this bacterium and potentially participate in the transmission chain of equine neorickettsiosis in the state of Rio de Janeiro, Brazil.(AU)

No Brasil, estudos apontam a circulação de Neorickettsia risticii em equinos, contudo não estão claros quais os possíveis vetores intermediários dessa bactéria no país. O objetivo do presente estudo foi analisar a presença de N. risticii, utilizando-se técnicas moleculares, em caramujos e estágios larvais de trematódeos em propriedades rurais de uma região com histórico de equinos sororreativos para essa bactéria, no Rio de Janeiro, Brasil. Uma amostragem por conveniência foi utilizada na região de estudo. Os caramujos coletados foram expostos à luz incandescente (60W) durante duas-quatro horas para a investigação de trematódeos nas formas larvais. A extração de ácido desoxirribonucleico (DNA) foi realizada em tecidos de caramujos e trematódeos. A técnica de PCR em tempo real (qPCR) foi utilizada para investigar a presença de um fragmento do gene 16S rRNA de N. risticii. Foram coletados 410 espécimes de caramujos de 11 propriedades com criações de equinos, sendo identificadas as seguintes espécies: Melanoides tuberculata, Pomacea sp., Biomphalaria tenagophila, Physa acuta, Drepanotrema anatinum e Biomphalaria straminea. Apenas 3,17% (n=13/410) dos caramujos identificados estavam infectados por trematódeos. As cercárias obtidas desses caramujos foram classificadas em Megalourous cercariae, Pleurolophocercus cercariae e Furcocercous cercariae. Não foi observada a amplificação do DNA-alvo de N. risticii, por meio da qPCR, em nenhuma das amostras de caramujos e trematódeos testadas. Com base nesses dados, a transmissão de N. risticii por trematódeos que utilizam as espécies de caramujos nessa região parece não ocorrer ou ocorre a taxas muito reduzidas. Portanto, novos estudos são necessários para elucidar quais espécies de hospedeiros invertebrados se infectam por essa bactéria e potencialmente participam da cadeia de transmissão da neorickettsiose equina no estado do Rio de Janeiro, Brasil.(AU)

Molecular characterization of Hepatozoon sp. from Brazilian dogs and its phylogenetic relationship with other Hepatozoon spp.

To characterize phylogenetically the species which causes canine hepatozoonosis at two rural areas of Rio de Janeiro State, Brazil, we used universal or Hepatozoon spp. primer sets for the 18S SSU rRNA coding region. DNA extracts were obtained from blood samples of thirteen dogs naturally infected, from four experimentally infected, and from five puppies infected by vertical transmission from a dam, that was experimentally infected. DNA of sporozoites of Hepatozoon americanum was used as positive control. The amplification of DNA extracts from blood of dogs infected with sporozoites of Hepatozoon spp. was observed in the presence of primers to 18S SSU rRNA gene of Hepatozoon spp., whereas DNA of H. americanum sporozoites was amplified in the presence of either universal or Hepatozoon spp.-specific primer sets; the amplified products were approximately 600bp in size. Cloned PCR products obtained from DNA extracts of blood from two dogs experimentally infected with Hepatozoon sp. were sequenced. The consensus sequence, derived from six sequence data sets, were blasted against sequences of 18S SSU rRNA of Hepatozoon spp. available at GenBank and aligned to homologous sequences to perform the phylogenetic analysis. This analysis clearly showed that our sequence clustered, independently of H. americanum sequences, within a group comprising other Hepatozoon canis sequences. Our results confirmed the hypothesis that the agent causing hepatozoonosis in the areas studied in Brazil is H. canis, supporting previous reports that were based on morphological and morphometric analyses.

Ectoparasites of Nasua nasua (Carnivora, Procyonidae) from an urban forest in Southeastern Brazil / Ectoparasitos de quatis Nasua nasua (Carnivora, Procyonidae) em uma floresta urbana no sudeste brasileiro

Em um fragmento de mata na área urbana de Juiz de Fora (MG) foram capturados 15 quatis com armadilha e ceva, para estudo dos seus ectoparasitos. Outros quatro animais, atropelados no entorno, foram também examinados imediatamente após o atropelamento, e incluídos na análise. Os ectoparasitos foram removidos com a utilização de pinça e pente-fino e acondicionados em etanol 70°GL. Pulgas e piolhos foram clarificados e montados para análise em microscopia. Os ixodídeos foram identificados sob estereoscopia. Não foram encontrados carrapatos adultos. Larvas e ninfas de carrapatos foram encontradas, respectivamente, em 36,8% e 63,1% dos hospedeiros examinados. Ninfas que sofreram muda foram identificadas como Amblyomma cajenennse. A espécie de piolho Neotrichodectes pallidus foi obtida em 52,6% dos quatis. As pulgas Ctenocephalides felis felis e Rhopalopsyllus lutzi lutzi apresentaram, respectivamente, as seguintes prevalências: 36,8% e 35,1%. O estudo mostra que no fragmento de mata na área urbana os quatis podem manter espécies de ectoparasitos comuns a estes hospedeiros, bem como intercambia-las entre o ambiente silvestre e urbano.(AU)

Ectoparasites of Nasua nasua (Carnivora, Procyonidae) from an urban forest in Southeastern Brazil

Em um fragmento de mata na área urbana de Juiz de Fora (MG) foram capturados 15 quatis com armadilha e ceva, para estudo dos seus ectoparasitos. Outros quatro animais, atropelados no entorno, foram também examinados imediatamente após o atropelamento, e incluídos na análise. Os ectoparasitos foram removidos com a utilização de pinça e pente-fino e acondicionados em etanol 70°GL. Pulgas e piolhos foram clarificados e montados para análise em microscopia. Os ixodídeos foram identificados sob estereoscopia. Não foram encontrados carrapatos adultos. Larvas e ninfas de carrapatos foram encontradas, respectivamente, em 36,8 por cento e 63,1 por cento dos hospedeiros examinados. Ninfas que sofreram muda foram identificadas como Amblyomma cajenennse. A espécie de piolho Neotrichodectes pallidus foi obtida em 52,6 por cento dos quatis. As pulgas Ctenocephalides felis felis e Rhopalopsyllus lutzi lutzi apresentaram, respectivamente, as seguintes prevalências: 36,8 por cento e 35,1 por cento. O estudo mostra que no fragmento de mata na área urbana os quatis podem manter espécies de ectoparasitos comuns a estes hospedeiros, bem como intercambia-las entre o ambiente silvestre e urbano.

Diagnosis of Hepatozoon spp. in Amblyomma ovale and its experimental transmission in domestic dogs in Brazil.

Transmission of Hepatozoon spp. to dogs was investigated using four species of ixodid ticks: Rhipicephalus sanguineus, Amblyomma aureolatum, Amblyomma ovale and Amblyomma cajennense. We collected completely or partially engorged adult ticks of these species from dogs that were naturally infested and positive for Hepatozoon spp. We selected some of these ixodids and inoculated them orally in four negative dogs. The other ticks were dissected and examined for oocysts. Of all dogs inoculated orally with R. sanguineus, A. aureolatum, A. cajennense and A. ovale, only the animal that received the macerate of A. ovale was positive; evidence (gametocytes in peripheral blood) of infection was found 63 days after inoculation. Among all dissected ticks, we found only two oocysts; these were similar to those of Hepatozoon canis, and both were recovered from a single A. ovale specimen. We inoculated sporozoites recovered from the oocysts intraperitoneally into a Hepatozoon spp. negative dog, and circulating gametocytes were detected 84 days later. Our study demonstrated that A. ovale can be a vector of Hepatozoon spp. in Brazil.

VARIAÇÃO DA SOROTITULAÇÃO AO TESTE DE FIXAÇÃO DE COMPLEMENTO PARA Babesia equi E Babesia caballi EM EQÜINOS DA REGIÃO SERRANA DO RIO DE JANEIRO.

Este estudo analisou a variação da sorotitulação de 248 animais com suspeita de babesiose eqüina, por meio do testede Fixação de Complemento (FC), em cavalos da raça Puro Sangue Inglês (PSI), com a idade entre quatro a seis anos,pertencentes a grandes estabelecimentos eqüestres (haras e centro de treinamento), da região Serrana do estado do Rio de Janeiro, no período de 1995 a 1997. A queda de desempenho foi evidenciada em 70,0% (174) dos cavalos soropositivos a FC para as babesioses eqüinas, durante o período experimental. A freqüência global média de sororreagentes à Babesia equi (Laveran, 1901) foi 21,0% e à Babesia caballi (Nuttall & Strickland, 1912) 6,4%, para os estabelecimentos estudados. Houve antagonismo entre as duas babésias. Na variação da sorotitulação o escore de grau quatro (100% de fixação de complemento) foi o mais freqüente para B. equi, nos estabelecimentos A (Petrópolis) e B (Teresópolis), e para B. caballi, no haras C (Nova Friburgo). As espécies de carrapatos identificadas foram Amblyomma cajennense e Anocentor nitens, com amplo predomínio da primeira.PALAVRAS-CHAVE: Babesia equi. Babesia caballi. Eqüino.

Hepatozoon canis infection associated with dog ticks of rural areas of Rio de Janeiro State, Brazil.

Hepatozoon canis is a tick-borne protozoan that infects dogs and has been reported throughout the world. Manifestation of H. canis infection varies from being sub-clinical in apparently healthy dogs to severe illness. The main vector of the infection is the dog tick, Rhipicephalus sanguineus although other species may also transmit this agent. H. canis has been reported previously in Brazil, but mostly as an occasional finding during laboratory exams and always associated with other diseases. The prevalence of H. canis in dogs of rural areas of Brazil has been little studied. For this study, 250 dogs from seven counties of Rio de Janeiro state were examined. All the dogs were from rural areas, near forest. Of the dogs examined, 26 dogs were from Seropédica, 82 from Itaguaí, 41 from Paracambi, 26 from Mangaratiba, 32 from Barra do Piraí, 32 from Piraí and 11 from Miguel Pereira. Blood smears from the peripheral blood of the ear were taken and ticks found on the dogs were collected for identification in the laboratory. Using blood smear evaluation, H. canis was identified in 39.2% of the animals examined. Other hemoparasites identified were Babesia canis (5.2%) and Ehrlichia canis (4.8%). Four tick species were found parasitizing the dogs: Amblyomma cajennense (23.6%), R. sanguineus (12.4%), Amblyomma aureolatum (2.8%) and Amblyomma ovale (2.0%). There was a positive correlation between the presence of A. cajennense and H. canis infection.

[Epidemiological aspects of canine American tegumentary leishmaniasis in the Municipality of Paraty, State of Rio de Janeiro, brazil]. / Aspectos epidemiológicos da leishmaniose tegumentar americana em cães, no Município de Paraty, Estado do Rio de Janeiro, Brasil.

American tegumentary leishmaniasis (ATL) is endemic in the State of Rio de Janeiro, with the highest incidence observed in the municipalities along the Southern coast. A total of 169 human cases were reported from 1993 to 1995 in the municipality of Paraty, representing 15% of all case reports in the State of Rio de Janeiro during that period. From March to December, 1996, a survey was conducted in endemic american tegumentary leishmaniasis (ATL) areas (Praia Grande, Taquari, Várzea do Machado, and Graúna) in Paraty. 326 households with 215 pet dogs were surveyed. The initial study consisted of taking venous blood samples to perform RIFI and ELISA tests. The canine skin test was performed during the same visit and was positive in 8.8% of dogs. Of the 215 dogs, 5 presented lesions suspected of ATL; biopsies and the vacuum aspiration technique were performed on these cases. Correlating the study areas with the results obtained, some dogs presented sub-clinical infection, highly relevant to studies on canine ATL infection in the State of Rio de Janeiro.

Effect of vaccination with a recombinant Bm86 antigen preparation on natural infestations of Boophilus microplus in grazing dairy and beef pure and cross-bred cattle in Brazil.

Current methods for the control of the cattle tick Boophilus microplus infestations are not effective and the parasite remains a serious problem for the cattle industry in tropical and sub-tropical areas. Recent advances have introduced the possibility for the immunological control of the parasite through the use of recombinant vaccines. Recently, it was shown that the recombinant vaccine Gavac (Heber Biotec S.A.) is able to control B. microplus populations in artificially infected grazing dairy cattle in Cuba. To assay the effect of the vaccine on a different B. microplus strain and under different ecological conditions, we conducted a trial in Brazil on grazing dairy and beef pure and cross-bred cattle under natural infestation conditions. A farm in the northeast of the state of Sao Paulo was selected and two groups of animals per breed were included in the experiment and were maintained grazing on separate but similar pastures. For each breed, one group was vaccinated with the vaccine Gavac and the second group was not vaccinated and was employed as a control. In vaccinated cattle, during 36 weeks of experiment, the average infestation rate was maintained below 78 ticks per animal while average infestation peaks (mean +/- S.E.) of 144 +/- 44 ticks per animal (for dairy cross-bred cattle) and 195 +/- 42 ticks per animal (for beef cross-bred cattle) were recorded in the control groups. Tick infestation rates showed statistical significant differences (p = 0.04) between both experimental groups throughout the experiment. These results clearly showed, as in the Cuban study, that the vaccine controlled tick numbers in successive generations in the field.

Sanidade animal: tristeza parasitária dos bovinos / Animal sanity: parasitic sadness of bovines

Babesiose e Anaplasmose continuam causando grandes prejuízos à bovinocultura brasileira, além de constituírem fator impeditivo à erradicaçäo do carrapato. O presente trabalho é uma síntese de palestra proferida na Convençäo Anual da Schering Veterinária, realizada em Natal, RN, em janeiro de 1990. Utilizando dados históricos e informaçöes atualizadas, o autor faz uma revisäo bibliográfica de grande utilidade para veterinários e criadores

The occurrence of an intraerythrocytic microorganism Neitziella rezendei gen. nov. sp. nov. (Microtatobiotes, Rickettsiales) of poultry in Brazil.

An extremely polymorphous intraerythrocytic microorganism occurring in naturally infected turkeys, ducks and fowls has been discovered in the states of Minas Gerais, Rio de Janeiro and Espirito Santo. 2. Studies on the morphology and biology have shown that it is a hitherto undescribed heteroxenous parasite for which the name Neitziella rezendei gen. nov., sp. nov. is proposed. 3. Its morphological features permit its inclusion in the class Microtatobiotes and order Rickettsiales. 4. Microscopical examination of blood films have shown that the parasitic carrier state in turkeys persists for more than 200 days (endpoint not determined). 5. The natural mode of transmission needs to be determined. 6. The suspicion that the parasite may cause illthrift and deaths in poultry requires confirmation.