Kinetics of B cell response during Yersinia enterocolitica infection in resistant and susceptible strains of mice.

In this study we analyze the B-cell response in murine yersiniosis. To this end, we determined whether polyclonal activation of B-lymphocytes occurs during infection of susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice with Y. enterocolitica O:8 and compared the immunoglobulin (Ig) isotypes produced in response to the infection by the two strains. The number of splenic cells secreting nonspecific and specific immunoglobulins was determined by ELISPOT. The presence of anti-Yersinia antibodies in serum was detected by ELISA. In both strains, the number of specific Ig-secreting cells was relatively low. Polyclonal B-cell activation was observed in both strains of mice, and the greatest activation was observed in the BALB/c mice, mainly for IgG1- and IgG3- secreting cells. The C57BL/6 mice showed a predominance of IgG2a-secreting cells. The peak production of anti-Yersinia IgG antibodies in the sera of BALB/c mice was seen on the 28th day after infection. The greatest increase in IgM occurred on the 14th day. A progressive increase of specific IgG antibodies was observed in C57BL/6 mice up to the 28th day after infection while IgM increased on the 21st day after infection. The production of specific IgA antibodies was not detected in either BALB/c or C57BL/6 mice. We conclude that polyclonal activation of B lymphocytes occurs in both the Yersinia-resistant and Yersinia-susceptible mice and that the more intense activation of B lymphocytes observed in the susceptible BALB/c mice does not enhance their resistance to Y. enterocolitica infection.

Production of autoantibodies associated with polyclonal activation in Yersinia enterocolitica O: 8-infected mice.

Polyclonal lymphocyte stimulation is one of the immunomodulatory mechanisms induced by arthritogenic pathogens. In this study we examined the polyclonal activation potential of a virulent strain of Y. enterocolitica serotype O: 8 (WA 2707(+)) and its plasmidless isogenic pair (WA 2707(-)). SPF Swiss mice were infected intragastrically and spleen cells were obtained on days 7, 14, 21, 28, 35 and 42 after infection. The number of cells secreting nonspecific immunoglobulins of IgG, IgM and IgA isotypes was determined by the ELISPOT technique. The presence of serum-specific antibodies was investigated by ELISA and the presence of autoantibodies by dot-blot assay. Although the patterns of infection of the two bacterial strains were almost the same, only the animals infected with the virulent strain presented clinical anomalies. Neither arthritic nor inflammatory signs were observed in the joints of the infected animals. The greatest activation observed was that of the nonspecific IgM-secreting cells, and their peak of secretion occurred between the 28th and the 42nd day after infection, for both strains of Y. enterocolitica O: 8. Only the animals infected with the virulent strain (WA 2707(+)) produced IgG-specific antibodies in the serum, from the 28th day after infection. The serum of animals infected with either strain showed reactivity to all the autologous constituents tested, mainly on the 28th and 42nd day after infection. It was concluded that infection of mice with either the virulent strain of Y. enterocolitica O: 8 or with its plasmidless isogenic pair resulted in the polyclonal activation of the splenic B lymphocytes including some autoreactive clones.

Influence of Yersinia pseudotuberculosis outer proteins (Yops) on interleukin-12, tumor necrosis factor alpha and nitric oxide production by peritoneal macrophages.

An essential key to pathogenicity in Yersinia is the presence of a 70 kb plasmid (pYV) which encodes a type-III secretion system and several virulence outer proteins whose main function is to enable the bacteria to survive in the host. Thus, a specific immune response is needed in which cytokines are engaged. The aim of this study was to assess the influence of Yersinia outer proteins (Yops) released by Yersinia pseudotuberculosis on the production of the proinflammatory cytokines, interleukin-12 (IL-12), and tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), and nitric oxide (NO) by murine peritoneal macrophages. To this end, female Swiss mice were infected intravenously with wild-type Y. pseudotuberculosis or with mutant strains unable to secrete specific Yops (YopE, YopH, YopJ, YopM, and YpkA). On the 7th, 14th, 21st, and 28th days after infection, the animals were sacrificed and the cytokines and NO were assayed in the peritoneal macrophages culture supernatants. A fall in NO production was observed during the course of infection with all the strains tested, though during the infection with the strains that did not secrete YopE and YopH, the suppression occurred later. There was, in general, an unchanged or sometimes increased production of TNF-alpha between the 7th and the 21st day after infection, compared to the control group, followed by an abrupt decrease on the last day of infection. The IL-12 production was also suppressed during the infection, with most of the strains tested, except with those that did not secrete YopJ and YopE. The results suggest that Yops may suppress IL-12, TNF-alpha, and NO production and that the most important proteins involved in this suppression are YopE and YopH.

Yersinia enterocolitica O:3 isolated from patients with or without reactive arthritis induces polyclonal activation of B cells and autoantibody production in vivo.

The mechanisms by which arthritis-provoking pathogens such as Yersinia enterocolitica interact with the human immune system to produce inflammatory synovitis are not well known. One of the immunomodulating mechanisms used against these pathogens is the polyclonal activation of lymphocytes. In this study, we investigated the extent of the B-lymphocyte activation induced in mice by a strain of Y. enterocolitica O:3 (FCF 526) isolated from a patient with arthritis, and compared it with two other strains, a virulent one (FCF 397[+]) isolated from a patient without arthritis and its plasmidless isogenic pair (FCF397[-]). Also we investigated the production of autoantibodies in mice infected with these different strains. SPF Swiss mice were infected intravenously with a suspension of Y. enterocolitica. Spleen cells were taken on days 7, 14, 21 and 28 after infection and the number of cells secreting nonspecific and specific antibodies of IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgM and IgA isotypes were determined by the ELISPOT technique. The presence of autoantibodies in mouse serum was investigated by the dot-blot assay. The pattern of infection of the three bacterial strains were almost the same. We observed a general increase in the number of nonspecific Ig-secreting cells with all three strains, and the greatest increases observed were in the IgG2a and IgG3 isotypes. Only a small fraction of the immunoglobulins detected were antibacterial, suggesting that the rest resulted from polyclonal B cell activation. The strain isolated from the patient with arthritis (FCF526) induced the greatest production of autoantibodies, coinciding with the period in which the greatest activation of nonspecific B lymphocytes was seen. There were no signs of arthritis or inflammation in the joints of the infected animals. Based on our results, we were unable to determine whether there is an association between the arthritogenic capability of Y. enterocolitica and polyclonal activation of B cells.

Comparaçäo entre a capacidade ativadora policlonal de Yersinia enterocolitica O: 3 e outros ativadores / Comparison between the polyclonal activation capability of Yersinia enterocolitica O: 3 and others activators

Ativaçäo policlonal de linfócitos induzida por endotoxinas bacterianas e superantígenos pode contribuir para o desenvolvimento de auto-imunidade. O objetivo deste trabalho foi comparar a ativaçäo policlonal de linfócitos B provocada por Yersinia enterocolitica O: 3 com aquela provocada por LPS de E. coli e por hemácias de carneiro. Camundongos Swiss foram infectados por via intraperitoneal com 10µg de LPS de E. coli ou com uma suspensäo de hemácias de carneiro a 2,5 por cento. Um grupo de animais normais foi usado como controle. No quinto dia pós-inoculaçäo, cinco animais de cada grupo foram sacrificados e as células esplênicas secretoras de imunoglobulinas detectadas pelo teste de PFC-Proteína A isotipo específico. No grupo dos animais infectados com Y. enterocolítica O: 3, a maior ativaçäo ocorreu em relaçäo às células secretoras de IgM (13 vezes aumentadas em relaçäo aos animais controles), seguida por IgG2b e IgG1 (ambos nove vezes). No grupo inoculado com LPS de E. coli, a maior ativaçäo ocorreu com relaçäo às células secretoras de IgG1 (cinco vezes), e, no grupo inoculado com hemácias de carneiro, a maior ativaçäo ocorreu com relaçäo às células secretoras de IgG1 (16 vezes) e IgM (oito vezes). O perfil comparativo do número de PFC revelou que Y. enterocolitica O: 3 apresentou maior capacidade de estimular linfócitos B in vivo do que os outros ativadores.

Ativaçäo de linfócitos B das placas de Peyer de camundongos infectados por via gástrica com Yersinia enterocolitica O: 8 / Peyer's patches B lymphocyte activation of mice infected by gastric route with Yersinia enterocolitica O: 8

Foi realizada infecçäo experimental de camundongos Swiss, "SPF", com amostra virulenta de Y. enterocolitica O: 8, inoculada por via gástrica, com o objetivo de verificar a ativaçäo de células B presentes nas placas de Peyer dos animais e comparar com aquela provocada por uma amostra isogênica, curada do plasmídeo de virulência. Para tanto, foi determinada a cinética de células secretoras de imunoglobulinas inespecíficas e específicas dos diferentes isótipos (IgG, IgA e IgM), pela técnica de ELISPOT e pesquisada a presença de anticorpos específicos anti-Yersinia nos soros dos animais infectados, por meio de ELISA. Foi verificada uma ativaçäo das células secretoras de imunoglobulinas inespecíficas nas placas de Peyer. Para a amostra virulenta, a maior ativaçäo ocorreu no número de células secretoras de IgG, e o pico de secreçäo ocorreu no 35§ dia pós-infecçäo (aumento de 8,9 vezes em relaçäo aos animais controles). Nos animais infectados com a amostra avirulenta, a maior ativaçäo ocorreu para o isótipo IgA, no 21§ dia pós-infecçäo (aumento de 16,1 vezes). Näo foi possível a detecçäo de células secretoras de Igs específicas. Anticorpos específicos do isotipo IgG foram detectados apenas nos soros dos animais infectados com a amostra virulenta, a partir do 28§ dia pós-infecçäo. Conclui-se que ambas as amostras de Y. enterocolitica O: 8 provocaram ativaçäo policlonal de linfócitos B das placas de Peyer.

Síndrome da rubéola congênita. Uma proposta para imunizaçäo / Congenital Rubella Syndrome. A proposal to immunization

O objetivo deste estudo foi detectar anticorpos IgG para rubéola em gestantes inscritas no Programa Saúde Materna do Serviço Especial de Saúde de Araraquara (Sesa) da Faculdade de Saúde Pública-USP, no período de julho de 1994 a agosto de 1996. Foram dosados 493 soros pelo método imunoenzimático (ELISA), sendo as gestantes classificadas segundo as faixas etárias. Verificamos 100 por cento de sorologia positiva nas gestantes da faixa etária < 15 anos; nas outras faixas etárias a positividade se manteve entre 82 por cento e 92 por cento. Concluimos que há necessidade da realizaçäo de sorologia para a rubéola nos exames pré-nupciais e pré-natal, e a vacinaçäo deve ser indicada de imediato no primeiro caso e no pós-parto, para evitar problemas em gestaçöes futuras.

Humoral immune response in yersinia enterocolitica 0: 3 - infected balb/c mice

Balb/c mice were experimentally infected by oral or intravenous route with Yersinia enterocolitica 0:3 for evaluation of their humaral immune response. Agroup of normal mice was used as control. Five mice from each group were bled by heart puncture and their spleens were removed on the 3rd, 7th, 14th, 21st and 28th day after infection. Immunoglobulin-secreting spleen cells were detected by the isotype-specific protein A plaque assay. The presence of specific anti-Yersinia antibodies was determined in mouse serum by ELISA. In the group infected by the intragastric route there was a reduction of immunoglobuling-secreting spleen cells compared to control during the first week after infection; the animals did not develop anti-Yersinia antibodies. In the group infected by the intravenous route there was ans increase in the cells secreting immunoglobulins of all isotypes, with the following peaks of maximum activation: IgM on the 3rd day, IgG2a and IgG3 on the 7th day and IgA, IgG1 and IgG2b on the 14th day after infection. Specific antibodies of the IgG and IgM isotype were detected in the sera of these animals. Previous Balb/c mouse infection with Y. enterocolitica by the oral route did not change the patterns of humoral response to sheep red blood cells by these animals. We conclude that the immune humoral response differs between the animals inoculated intravenously or orally, with a short-term immunosupression being observed only in the latter group.

Characterization of plasmid-related antigen of Yersinia enterocolitica by immunological techniques

Yersínia enterocolitica tem sua virulência relacionada a plasmídeo de 40-48-MDa que codifica proteínas que podem ser expressas nas membranas ou excretadas no meio de cultura. Procurou-se determinar o perfil dessas proteínas em cepas de Y. enterocolitica com e sem o plasmídeo de 40-48-MDa, através de gel de poliacrilamida com SDS (SDS-PAGE). Procurou-se também estudar as condiçöes ótimas de cultura de bactérias para expressäo dessas proteínas e finalmente analisá-las empregando a técnica de Immunoblot e utilizando anti-soro preparado com a amostra com e sem plasmídeo. Esses estudos resultaram na demonstraçäo da ocorrência, entre outros, de uma proteína de 38-kDa, presente apenas na cepa com plasmídeo e que era excretada quando o cultivo era realizado a 37ºC em meio de MOX

Levantamento sorológico para sífilis em gestantes da cidade de Humaitá - AM / Serum, survey for syphilis in pregnant women in the city of Humaitá - AM

A sorologia da sífilis compreende dois tipos de testes: os chamados näo específicos ou näo treponêmicos, que utilizam cadiolipina como antígeno, e os testes específicos ou treponêmicos, que utilizam como antígeno o próprio Treponema pallidum. O objetivo desta pesquisa foi o de comparar os resultados do teste de VDRL nos exames de pré-natal realizados em gestantes em laboratório de Humaitá-AM, com os obtidos com as amostras através do mesmo teste e mais um teste näo específico (Fixaçäo do Complemento) e de um teste específico (FTA-ABS), realizados na Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Araraquara -UNESP. Foram encontradas discrepâncias entre os resultados obtidos através dos testes realizados em Humaitá e na Faculdade de Ciências Farmacêuticas, que podem ser atribuídas a uma execuçäo mais criteriosa do teste de VDRL em nossa Unidade, confirmada pela maior especificidade e/ou sensibilidade das demais provas usadas

Presença de aglutininas anti-yersinia no soro de pacientes com doenças auto-imunes / Anti-Yersinia agglutinins in the sera of patients with autoimmune diseases

Foi realizado um estudo em 177 amostras de soro humano com o objetivo de se pesquisar anticorpos anti-Yersinia enterocolitica sorotipos 0:3, 0:5, 0:527, 0:6, 31, 0:7, 8, 0:8 e 0:9 em pacientes com manifestaçöes auto-imunes e outras; 142 soros eram de pacientes com doenças auto-imunes; 26 de pacientes com outras doenças e 9 de pessoas normais. A técnica utilizada foi aglutinaçäo em lâminas e em tubos. Soros com título igual ou superior a 1/80 foram considerados positivos. Anticorpos anti-Yersinia enterocolitica 0:6, 31 num título de 1/320 foram detectados em um soro de pacientes do grupo de doenças auto-imunes. Conclui-se que existe uma baixa incidência de anticorpos anti-Yersinia enterocolitica entre os pacientes examinados

Período de infectividade de animais inoculados experimentalmente com Yersinia sp / Period of infectivity of animals challenged by Yersinia sp

Lotes de camundongos suiços convencionais foram inoculados tanto por via intragástrica (IG) quanto por via intravenosa (IV) com Yersinia enterocolitica dos sorotipos 0:3, 0:8 e 0:9 e com amostras de yersinias atípicas. Foi mantido um lote de animais näo inoculados como controle. Verificou-se qual o período de permanência dessas bactérias no intestino dos animais inoculados. Yesinia enterocolitica dos sorotipos 0:3, 0:8 e 0:9, considerados adaptados ao homem, permaneceram no intestino dos animais inoculados por um período muito maior do que as amostras de Yersinia näo adaptadas, quer inoculadas por via intragástrica, quer por via intravenosa

Estudo da cinética de produçäo de anticorpos aglutinantes em camundongos infectados experimentalmente com Yersinia sp / Kinetics of production of agglutinating antibodies in experimentally infected mice with Yersinia sp

Lotes de camundongos suiços convencionais foram inoculados por via intragástrica (I.G.) e por via intravenosa (I.V.) com amostras de Yersinia enterocolitica de diferentes sorotipos (0:3, 0:5,0:8 e 0:9) e com amostras de Yersinias atípicas, mantendo-se um lote controle, näo inoculado. Grupos de 5 animais de cada lote foram sangrados semanalmente, perfazendo um total de 10 semanas. Os soros foram separados e submetidos a testes de aglutinaçäo em lâmina e tubo. anticorpos aglutinantes-Yersinia foram detectados apenas nos soros de camundongos inoculados por via I.V. com os sorotipos 0:3 e 0:9, sendo que o título máximo ocorreu entre a 4ª e a 6ª semana após inoculaçäo. Conclui-se pela pouca sensibilidade do sistema utilizado na detecçäo de anticorpos anti-Yersinia

Estudos sobre proteínas plasmáticas do macaco cebus sp: I. Produçäo de anticorpos específicos para IgG e alfa 2-macroglobulina / Plasma proteins of the cebus sp. monkey: I. Specific antibody production for IgG and alfa 2-macroglobulin

As globulinas do soro de macaco Cebus com coeficiente de sedimentaçäo de 7S e 19S foram isoladas a partir de soro normal através de precipitaçäo com sulfato de amônio a 50%, seguida por cromatografia em Sephadex G-200 e eletroforese preparativa em bloco de amido. Em seguida, coelhos foram imunizados com as fraçöes 7S e 19S purificadas. Os soros imunes obtidos destes animais (soro anti-7S e soro anti-19S) foram analisados à sua especificidade e reatividade cruzada com humano e soro de macaco rhesus, através de experimentos de imunodifusäo e imunoeletroforese unidimensional, cruzada e linear. O soro anti 7S reagiu com IgG de macaco Cebus e com IgG humana e de macaco rhesus. A reaçäo cruzada com IgG humana deve-se provavelmente a similaridades nas cadeias pesadas dessas imunoglobinas. O soro anti-19S reagiu com um componente dos soros de macaco Cebus, humano e de macaco rhesus. Utilizando as reaçöes cruzadas entre as proteínas plasmáticas humanas e de macaco Cebus foi possível demonstrar que este soro era específico para alfa2-macroglobulina