BALB/c Mice resist infection with Bartonella bacilliformis.

BACKGROUND: Bartonellosis due to Bartonella bacilliformis is a highly lethal endemic and sometimes epidemic infectious disease in South America, and a serious public health concern in Perú. There is limited information on the immunologic response to B. bacilliformis infection. The objective of this research was to produce experimental infection of BALB/c mice to B. bacilliformis inoculation. FINDINGS: BALB/c mice were inoculated with 1.5, 3.0 or 4.5 x 108 live B. bacilliformis using different routes: intraperitoneal, intradermal, intranasal, and subcutaneous. Cultures of spleen, liver, and lymph nodes from one to 145 days yielded no cultivable organisms. No organs showed lesions at any time. Previously inoculated mice showed no changes in the reinoculation site. CONCLUSION: Parenteral inoculation of live B. bacilliformis via different infection routes produced no macroscopic or microscopic organ lesions in BALB/c mice. It was not possible to isolate B. bacilliformis using Columbia blood agar from 1 to 15 days after inoculation.

Report of an unusual case of persistent bacteremia by Bartonella bacilliformis in a splenectomized patient.

We report a case of a 56-year-old man with a history of splenectomy for idiopathic thrombocytopenic purpura who developed persistent bacteremia in the acute phase of human bartonellosis. This patient did not develop hemolytic anemia. Only after several courses of antibiotic treatment was the infection eradicated. This is an unusual case of overwhelming post-splenectomy infection by Bartonella bacilliformis, which provides clinical evidence that the spleen is a critical effector organ of clearance of this infection as well as the effector organ of bartonellosis-associated hemolytic anemia.

Identificación de Bartonella sp mediante reacción en cadena de la polimerasa y métodos microbiológicos / Identification of Bartonella sp by polymerase chain reaction and microbiological methods

En el Perú la Angiomatosis bacillar (AB) y la enfermedad de Arañazo de Gato (EAG) han sido reportados confirmando el diagnóstico en laboratorios de investigación o del extranjero, no contándose con métodos de rápido diagnóstico. Se captaron 23 pacientes y se estudiaron 8 muestras de tejidos con sospecha de EAG,AB o Verruga Peruana (VP). Se realizaron cultivos en condiciones requeridas. Extracción de DNA de sangre, cultivos y tejidos mediante buffers de digestión fueron estandarizados para cada caso. Se amplificó el DNA con primers 16S-ITRFf y 23S-ITRr ó CS-ITRf y CSITRr; en gel de agarosa 1 por ciento, y cuantificados con DNA -Hind III. Cultivos controles mostraron banda en B. bacilliformis de 948 pb, B. quintana 1310 pb, B henselae 1427 pb. M. tuberculosus 563 pb. Un paciente con diagnóstico confirmado de EAG por B. henselae, mostró banda concordante con control de B. henselae utilizando los primers 16S y 23S. Una muestra de VP mostró banda concordante con control de B. bacilliformis. una muestra confirmada por patología de AB mostró bandas concordantes a B. henselae utilizando el primer CS. Se confirmaron casos de EAG, AB y VP en base a muestras de aspirados de ganglio o biopsia mediante PCR. El PCR permitió el diagnóstico diferencial de adenomagalias por EAG y Micobacterias, y de AB en la Verruga Peruana.

A prospective study of cat-scratch disease in Lima-Peru

Cat-Scratch Disease (CSD) is a benign lymphadenitis that may progress to severe or recurrent forms, and it is occasionally associated with morbidity. Between January of 1998 and March of 1999, forty-three suspected CSD patients were assessed in the Hospital Cayetano Heredia and the Instituto de Salud del Niño, in Lima, Peru. Twelve patients had a confirmed diagnosis, 8 of whom were women, and the mean age was 10 years old. The majority (53 percent) of the cases were encountered in the summer. All patients reported having had contact with cats. Fever, malaise, lymphadenopathy and skin lesions were the most frequent clinical features. Twelve patients had indirect immunofluorescence antibody test titers of between 1/50 and 1/800 for Bartonella henselae and Bartonella clarridgeiae. Two lymph node biopsies were histologically compatible with CSD. No positive blood cultures could be obtained. This is the first Peruvian prospective study able to identify B. henselae and B. clarridgeiae in pediatric patients

Identificación de Bartonella bacilliformis por métodos moleculares / Bartonella bacilliformis diagnosis by molecular methods

Introducción: La técnica de PCR amplifica una secuencia de ADN con la enzima polimerasa; es muy sensible y especifica. Objetivo: Estandarizar una técnica de PCR para identificar Bartonella bacilliformis en sangre total de pacientes con bartonelosis aguda. Material y métodos: Se usó muestras de sangre total de seis pacientes con diagnóstico clínico y microbiológico de bartonelosis aguda. Se extrajo el ADN de sangre total usando el detergente guanidina DNAZOL BD. Se amplificó el ADN usando los cebadores de extensión "primers" 16S y 23S del espaciador de trascripción interna (ITS). Se hizo electroforesis de los productos de amplificación en gel de agarosa. Se compararon los pesos moleculares de las bandas observadas en la electroforesis con un marcador de 100 pares de bases. Resultados: Se determinó que la concentración de ADN extraído por DNAZOL BD corresponde alrededor de 6 ng de ADN. El producto amplificado de muestras de sangre total fue alrededor de 1000 pares de bases, idéntico al extraído de los hemocultivos de B. bacilliformis y claramente diferente del de otras especies. Las diluciones de las extracciones mejor detectadas por PCR fueron 1/5 y 1/10. Conclusiones: El ADN de B. bacilliformis extraído con DNAZOL BD de sangre total de pacientes con bartonelosis aguda es amplificado por PCR utilizando los primers 16S y 23S; es posible usar esta técnica para el diagnóstico etiológico rápido.

Background: The PCR methodology amplifies a sequence of DNA with the Polimerase enzyme; the sensibility and specificity is very high. Objective: To develop a PCR methodology designed to work on extracts from whole blood samples rather than from isolated, cultured organisms. Methods. The whole blood of six patients with clinical and microbiologic diagnosis of acute bartonelosis by B. bacilliformis was used. The DNA was extracted with DNAZOL® BD (lysis solution with guanidine detergent), and the extract subjected to PCR using primers 16S and 23S for the Intergenic Transcribed Spacer (ITS). The amplified products were subjected to electrophoresis on 1 per cent agarose gels. Results: The concentration of the extracted product with DNAZOL® BD was around 6 ng. The amplified single sized product of 1000 base pairs was identical to that from authentic cultures of B. bacilliformis and clearly different from that of other species. The dilutions detected by PCR were 1/5 and 1/10. Conclusion: The amplification of the DNA of B. bacilliformis extracted with DNAZOL® BD from whole blood of patients with acute bartonelosis using the primers 16S and 23S is possible using this method for a fast etiologic diagnosis. ( Rev Med Hered 2002; 13: 58-63 ).

A prospective study of Cat-Scratch Disease in Lima-Peru.

Cat-Scratch Disease (CSD) is a benign lymphadenitis that may progress to severe or recurrent forms, and it is occasionally associated with morbidity. Between January of 1998 and March of 1999, forty-three suspected CSD patients were assessed in the Hospital Cayetano Heredia and the Instituto de Salud del Niño, in Lima, Peru. Twelve patients had a confirmed diagnosis, 8 of whom were women, and the mean age was 10 years old. The majority (53%) of the cases were encountered in the summer. All patients reported having had contact with cats. Fever, malaise, lymphadenopathy and skin lesions were the most frequent clinical features. Twelve patients had indirect immunofluorescence antibody test titers of between 1/50 and 1/800 for Bartonella henselae and Bartonella clarridgeiae. Two lymph node biopsies were histologically compatible with CSD. No positive blood cultures could be obtained. This is the first Peruvian prospective study able to identify B. henselae and B. clarridgeiae in pediatric patients.

Linfadenomegalia cervical por Mycobacterium kansasii en un paciente inmunocompetente / Cervical lymphademegaly by Mycobacterium kansasii in one inmunocompetent patient

Se describe un paciente de 1 año 3 meses, procedente de Lima, sin antecedente de viajes ni enfermedades previas de importancia, quien desarrolló en forma brusca malestar general y adenomegalias submaxilar, preauricular y cervical izquierdos, siendo el resto del examen no contributorio. Sus exámenes serológicos, a toxoplasmosis y CMV, y los hemocultivos fueron negativos; y, el PPD de o mm. El diagnóstico de Mycobacterium spp. Se realizó en base a un cultivo del aspirado ganglionar y PCR y se identificó M. kansasii mediante la prueba para Micobacterias INNO-LiPA. Se discute la presentación inusual de M. kansasii en un paciente pediátrico inmunocompetente, un análisis por PCR probado en la muestra del paciente y que permitiría la identificación rápida del agente etiológico como Mycobacterium spp. en casos similares, y el diagnóstico diferencial con Enfermedad por Arañazo de Gato.

Reporte de un caso inusual de bacteriema persistente por Bartonella bacilliformis en un paciente esplenectomizado y estudios de PCR y Western blot / Report of persistent an unusual case of bacteriemia by Bartonella bacilliformis in a splenectomized patient and studies of PCR and Western blot

Reportamos el caso de un varón de 56 años esplenectomizado que desarrolló bacteriemias persistentes por Bartonella bacilliformis adquirida durante un viaje a una zona endémica. Se confirmó el diagnóstico por métodos microbiológicos y moleculares. Discutimos a través de una revisión de la literatura las circunstancias de persistencia de bacteriemia en esta enfermedad.

Primer reporte de bartonella henselae y bartonella clarridgeiae en pacientes con enfermedad del arañazo de gato y angiomatosis bacilar en Lima / First report of bartonella henselae and bartonella clarridgeiae in patients with cat scratch disease and bacillary angiomatosis in Lima

La mayoría de las nuevas especies de bartonellas se describieron desde de esta década, sin embargo de poca información se dispone aún en nuestro país. El presente fue un estudio prospectivo y descriptivo transversal, realizado entre enero y diciembre de 1998 en el Hospital Nacional Cayetano Heredia, Instituto de Salud del Niño y algunos consultorios privados de Lima, captando pacientes con sospecha de enfermedades causadas por nuevas especies de bartonellas. Se incluyeron 30 individuos con sospecha clínica de enfermedad de arañazo del gato, detectando por IFI B. henselae en ocho pacientes a títulos entre 1/50 y 1/200, y en un paciente B. clarridgeiae y B. henselae en títulos de 1/800, dos pacientes mostraron histopatología compatible. Cinco pacientes fueron incluidos con sospecha clínica de angiomatosis bacilar, dos con confirmación patológica y uno con títulos de 1/50 en IFI a B. henselae. No se logró preservar colonias por cultivo utilizando condiciones especiales. Se demuestra así, la existencia de B. henselae y B. claridgeiae como agentes causales de enfermedad de arañazo del gato, por IFI e histopatología, entre pacientes de edad pediátrica; y B. henselae en angiomatosis bacilar, constituyendo diagnóstico diferencial de Sarcoma de Kaposi y Verruga Peruana, en nuestro país.