Application of a digital PCR method for WT1 to myeloid neoplasms in CR and deep ELN WT1 molecular response (< 10 copies).

Bone marrow WT1 mRNA levels assessed by the ELN method are useful to establish prognostic correlations in myeloid malignancies treated with chemotherapy or hematopoietic stem cell transplantation (HCT). Those patients with WT1 levels below ten copies have a good outcome. However, some of these patients relapse. To further characterize this group of cases, we applied a new and sensitive digital (ddPCR) WT1 method. A consecutive series of 49 patients with treated myeloid malignancies and with an ELN WT1 quantitation of < 10 copies were included in the study. All cases (47 AML and 2 MDS) have received intensive chemotherapy or HCT. One to four micrograms of total RNA were retrotranscribed to obtain ≥ 10,000 ABL1 copies using the ELN protocol. Only those cases with a good quality cDNA were used in the ddPCR WT1 test. The ddPCR Gene Expression WT1 Assay of Bio-Rad© was used to perform the PCR amplification, and the microdroplets were quantified in the Bio-Rad's QX200 droplet reader. Eighteen patients showed a negative WT1 ddPCR assay (0 copies/µl), whereas 31 cases were positive (results ranged from 1 to 15.2 copies/µl). Survival analysis showed statistically significant differences in terms of OS between both groups, 83 ± 8% vs. 46 ± 9% (p = 0.024). A statistically significant correlation was also found between ddPCRWT1 results and CD123+ cell number detected by flow cytometry (p = 0.024). Larger series of patients tested with the current ddPCRWT1 method will solve whether it could be used to stratify patients with myeloid malignancies achieving deep WT1 molecular response (< 10 copies).

Determinación del valor predictivo de marcadores moleculares en el grado de avance del cáncer de mama / Determination of the predictive value of molecular markers in the degree of advancement of breast cancer

INTRODUCCIÓN Dada la importancia del cáncer de mama para la salud pública, es crucial identificar nuevos biomarcadores con el potencial de intensificar el diagnóstico temprano y/o predecir la prognosis del paciente. Los receptores tirosina-quinasa ErbB tienen un papel esencial en la progresión del cáncer de mama. La hiperactivación y sobreexpresión de ligandos de ErbB juegan roles fundamentales en la etiología del cáncer. Los ligandos ErbB3 promueven una fuerte activación de Rac1 en células de cáncer de mama. Rac1 es una Rho GTPasa implicada en motilidad celular, mitogénesis, transformación y metástasis. Esta proteína es activada por factores intercambiadores de nucleótidos de guanina. OBJETIVOS A nivel general, determinar el valor predictivo de P-Rex1 y sus moléculas asociadas en la progresión del cáncer de mama. De manera específica, determinar la asociación de P-Rex1 con el grado de avance de la enfermedad y el tipo celular asociado, analizar la correlación entre P-Rex1 y el receptor de estrógeno y los receptores ErbB, y ampliar el análisis de asociación hacia otras moléculas relacionadas con P-Rex1 MÉTODOS Se determinaron niveles proteicos de P-Rex1 en muestras de tumores y biopsias provenientes de pacientes argentinas del Hospital Curie, por ensayos de Western Blot con anticuerpos específicos. RESULTADOS Se observó que los tumores positivos para el receptor de estrógeno y los HER2+ expresan P-Rex1, y los tumores de tipo triple negativo no lo expresan. La medición de los niveles de expresión de un set de genes regulados por P-Rex1 podría ser complementaria y mejorar su capacidad predictiva en un modelo de multimarcadores. DISCUSION El número de muestras analizadas no es suficiente para determinar la significancia de los resultados obtenidos, que indicarían que la expresión de P-Rex1 en pacientes argentinas tiene una distribución similar a pacientes de Estados Unidos y Holanda. Debe ampliarse el análisis de asociación hacia otras moléculas relacionadas con P-Rex1 como potenciales marcadores de progresión complementarios.

Cuantificacion de haptoglobinas sericas por un metodo modificado de peroxidacion. / Serum haptoglobins quantification by modified peroxidation method

Con el deseo de preconizar un metodo sencillo y de bajo costo para cuantificar haptoglobinas sericas, se tomo de referencia el de la peroxidacion de Owen et al, estableciendo una serie de experimentos que lo hacen mas practica para su uso rutinario en cualquier laboratorio. Dentro de las principales modificaciones introducidas se encuentran la mayor estabilidad de los reactivos, el uso de un estandar primario de CNMHb, la correccion de los valores encontrados cuando se procesan muestras con clara evidencia de hemolisis espuria, el caracter de micrometodo y una estandarizacion sencilla que permite el uso de la curva de calibracion hasta por un mes luego de establecida