Gestation length, birth weight and offspring gender ratio of in vitro-produced Gyr (Bos indicus) cattle embryos.

In vitro embryo production (IVP) has been suggested to result in a greater proportion of male calves, longer gestation and heavier offspring than artificial insemination in Bos taurus cattle. Despite the increasing use of IVP in tropical countries, its effects upon these traits in Bos indicus have not been conclusively investigated. Gyr is a B. indicus dairy breed with known physiological differences from B. taurus, such as a longer gestation period and lighter offspring. The aim of this study was to evaluate the effect of IVP on gestation length, birth weight and gender ratio in Gyr offspring. Oocytes were recovered from Gyr cows by ovum pick-up and were matured and fertilized with thawed Gyr semen in vitro. Embryos were cultured in CR2aa medium with cumulus cells and 10% fetal calf serum under 5% CO(2) at 38.5 degrees C in air. Seven- to eight-day blastocysts were transferred to synchronized recipients. Data on gestation length and birth weight of calves from in vitro-produced embryos were compared to data obtained from Gyr calves produced by artificial insemination (AI) and natural breeding (NB) during the same period using analysis of variance, and the gender ratio was compared to the expected 1:1 ratio using a chi-square test. IVP increased (P<0.01) the percentage of male offspring (76.9%) compared to the expected 1:1 ratio, while no difference (P>0.05) was observed in the AI and NB groups. Gestation length was similar (P>0.05) between the IVP and AI groups, but IVP-derived offspring were heavier (P<0.05) than AI- and NB-derived ones, mainly for male calves (P<0.05). These data show that in vitro production affects the subsequent development of Gyr embryos, resulting in a skewed sex ratio and increased birth weight.

Criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro

Avaliou-se o processo de congelamento lento utilizando etilenoglicol 1,8 M, quanto à taxa de eclosão de blastocistos, rompimentode zona pelúcida e extrusão celular. Blastocistos de sete dias classificados como de graus I e II foram distribuídos emdois tratamentos: T1(embriões a fresco ) e T2 (congelamento lento com etilenoglicol 1,8 M). Realizou-se o congelamento emaparelho automático com curva de -6 a -35C e queda de 0,5C/min. Os embriões congelados foram estocados em nitrogêniolíquido. Imediatamente após o descongelamento os blastocistos foram cultivados individualmente em gotas de 100 ml domeio Glasgow BHK 21, onde permaneceram por 72 horas. Os embriões do T1 também foram submetidos a essas condições.A taxa de eclosão foi maior no T1 (P 0,01), assim como as de rompimento de zona pelúcida e extrusão celular foram maioresno T2 (P 0,01). Concluiu-se que a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro, em etilenoglicol 1,8M, resultou emtaxas de eclosão satisfatórias, mesmo provocando danos como lesão de zona pelúcida e extrusão celular.

Criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro

Avaliou-se o processo de congelamento lento utilizando etilenoglicol 1,8 M, quanto à taxa de eclosão de blastocistos, rompimentode zona pelúcida e extrusão celular. Blastocistos de sete dias classificados como de graus I e II foram distribuídos emdois tratamentos: T1(embriões a fresco ) e T2 (congelamento lento com etilenoglicol 1,8 M). Realizou-se o congelamento emaparelho automático com curva de -6 a -35C e queda de 0,5C/min. Os embriões congelados foram estocados em nitrogêniolíquido. Imediatamente após o descongelamento os blastocistos foram cultivados individualmente em gotas de 100 ml domeio Glasgow BHK 21, onde permaneceram por 72 horas. Os embriões do T1 também foram submetidos a essas condições.A taxa de eclosão foi maior no T1 (P 0,01), assim como as de rompimento de zona pelúcida e extrusão celular foram maioresno T2 (P 0,01). Concluiu-se que a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro, em etilenoglicol 1,8M, resultou emtaxas de eclosão satisfatórias, mesmo provocando danos como lesão de zona pelúcida e extrusão celular.

Short intervals between ultrasonographically guided follicle aspiration improve oocyte quality but do not prevent establishment of dominant follicles in the Gir breed (Bos indicus) of cattle.

The aim of the present study was to evaluate oocyte recovery and embryo yield using two different ovarian follicular aspiration schedules in donor cows of the Gir breed. Pluriparous, non-lactating Gir cows (n = 14) were randomly allocated to one of two groups, one of which had aspirations of ovarian follicular contents conducted once a week (TVFA-1x) and the other twice weekly (TVFA-2x), for nine consecutive weeks. Before follicle aspiration, follicular population was recorded in three classes according to size (> 6 mm, 6-9 mm and > 9 mm). The cumulus-oocyte complexes (COCs) recovered were identified, morphologically classified and in vitro matured, fertilized with Gir sperm and cultured in CR2 medium for 7 days. There was no difference (P > 0.05) in the size of the largest follicle, number of follicles identified or follicular content aspirations between TVFA-1x and TVFA-2x groups. Large follicles (> 9 mm) were observed for all the aspiration intervals considered (3, 4 or 7 days). More oocytes were recovered per session in TVFA-1x as compared with TVFA-2x (8.9 +/- 0.8 versus 7.0 +/- 0.7, P < 0.01), resulting in a greater recovery rate in this group (74.3% versus 58.7%, P < 0.01). More COCs of Grade I were recovered from TVFA-2x (22.6% versus 13.3%, P < 0.01). There was no difference in cleavage rate between groups, but the percentage of embryos that reached the blastocyst stage was greater in TVFA-2x as compared with the TVFA-1x (31.8% versus 21.6%, P < 0.01). The greater in vitro performance qualities of TVFA-2x oocytes compensates for the greater oocyte recovery rate in TVFA-1x, demonstrating a greater embryo production potential. Despite showing uncommon follicular dynamics characteristics when subjected to follicular aspiration, Gir cows can be successfully used as oocyte donors for in vitro embryo production.

Avaliação da capacitação espermática in vitro pela viabilidade e reação acrossômica

Avaliou-se a capacitação espermática in vitro de touros por meio da viabilidade espermática e indução da reação acrossômica.Utilizou-se sêmen congelado de touros da raça Gir, que após descongelado foi incubado in vitro com O ou 1 O J.tg/ml de heparinapor quatro horas, para a capacitação, adicionando-se em seguida lisofosfatidilcolina por 15 minutos, para indução da reação. acrossômica. Foram feitas lâminas para análise da viabilidade espermática (coradas com eosina/nigrosina) e reaçãoacrossômica (coradas com naftol amarelo), antes e após o período de incubação. O tratamento com heparina proporcionoumaior taxa de espermatozóides com reação acrossômica (P 0,05), sem afetar a viabilidade espermática. Observou-se diferençaentre touros quanto à viabilidade espermática e reação acrossômica antes e após a incubação com heparina +lisofosfatidilcolina (P 0,05). O touro com maior reação acrossômica apresentou menor viabilidade espermática. Conclui-se,pelos resultados, que o sêmen antes de ser usado na fecundação in vitro, ou mesmo na monta natural ou inseminação, devater avaliada a capacitação espermática in vitro por meio da análise da taxa de viabilidade espermática e da taxa de reaçãoacrossômica, por ambas apresentarem diferenças entre indivíduos.

Avaliação da capacitação espermática in vitro pela viabilidade e reação acrossômica

Avaliou-se a capacitação espermática in vitro de touros por meio da viabilidade espermática e indução da reação acrossômica.Utilizou-se sêmen congelado de touros da raça Gir, que após descongelado foi incubado in vitro com O ou 1 O J.tg/ml de heparinapor quatro horas, para a capacitação, adicionando-se em seguida lisofosfatidilcolina por 15 minutos, para indução da reação. acrossômica. Foram feitas lâminas para análise da viabilidade espermática (coradas com eosina/nigrosina) e reaçãoacrossômica (coradas com naftol amarelo), antes e após o período de incubação. O tratamento com heparina proporcionoumaior taxa de espermatozóides com reação acrossômica (P 0,05), sem afetar a viabilidade espermática. Observou-se diferençaentre touros quanto à viabilidade espermática e reação acrossômica antes e após a incubação com heparina +lisofosfatidilcolina (P 0,05). O touro com maior reação acrossômica apresentou menor viabilidade espermática. Conclui-se,pelos resultados, que o sêmen antes de ser usado na fecundação in vitro, ou mesmo na monta natural ou inseminação, devater avaliada a capacitação espermática in vitro por meio da análise da taxa de viabilidade espermática e da taxa de reaçãoacrossômica, por ambas apresentarem diferenças entre indivíduos.

Efeito da aplicação de um análogo de GnRH (Buserelina) na concentração sérica de progesterona e na taxa de gestação em receptoras de embriões bovinos

O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação de um análogo de GnRH (Buserelina), aplicado no dia da inovulação de embriões;nos níveis plasmáticos de progesterona e, conseqüentemente, na taxa de gestação de receptoras mestiças Holandês vsZebu. Foram realizadas cinco coletas de sangue a partir do dia da inovulação e intervaladas de 48 horas, para avaliar aconcentração de progesterona. Após 50 dias da inovulação, através do exame transretal, foi observado que 60% (12/20) dosanimais do grupo tratado ficaram gestantes e no grupo controle foi obtida uma taxa de gestação de 50% (10/20). Essesrestlttados não foram significativos pelo teste de Qui-quadrado. No entanto, os níveis séricos de progesterona dos animais dogrupo tratado foram maiores (p 0,05) que do grupo controle. Através dos resultados obtidos conclui-se que a aplicação de1 Omg de buserelina no dia da inovulação do embrião causou um incremento na concentração de progesterona dos animaistratados, sem contudo resultar em aumento na taxa de· gestação.

Efeito da aplicação de um análogo de GnRH (Buserelina) na concentração sérica de progesterona e na taxa de gestação em receptoras de embriões bovinos

O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação de um análogo de GnRH (Buserelina), aplicado no dia da inovulação de embriões;nos níveis plasmáticos de progesterona e, conseqüentemente, na taxa de gestação de receptoras mestiças Holandês vsZebu. Foram realizadas cinco coletas de sangue a partir do dia da inovulação e intervaladas de 48 horas, para avaliar aconcentração de progesterona. Após 50 dias da inovulação, através do exame transretal, foi observado que 60% (12/20) dosanimais do grupo tratado ficaram gestantes e no grupo controle foi obtida uma taxa de gestação de 50% (10/20). Essesrestlttados não foram significativos pelo teste de Qui-quadrado. No entanto, os níveis séricos de progesterona dos animais dogrupo tratado foram maiores (p 0,05) que do grupo controle. Através dos resultados obtidos conclui-se que a aplicação de1 Omg de buserelina no dia da inovulação do embrião causou um incremento na concentração de progesterona dos animaistratados, sem contudo resultar em aumento na taxa de· gestação.

Corpo lúteo persistente associado a infecções uterinas em rebanhos leiteiros da Zona da Mata-MG

O exame ginecológico de 3408 fêmeas bovinas, em 50 rebanhos leiteiros da Zona da Mata de Minas Gerais, revelou 384(11 ,3%) casos de infecção uterina, das quais 186 (5,5%) de primeiro grau ou catarral, 162 (4,8%) do segundo grau oumucopurulenta e 36 (1, 1 %) do terceiro grau ou purulenta. Destas, 12 animais encontravam-se no período puerperal (até 90dias pós-parto), com 1 O em anestro, dos quais três por corpo lúteo (CL) persistente. Nos 24 casos restantes os animaisencontravam-se no período pós-puerperal (acima de 90 dias pós-parto), com 14 em anestro, dos quais seis por CL persistente,incluídos quatro fetos macerados. Não se verificou nenhum caso de infecção uterina do primeiro e segundo grau induzindopersistência de CL. Esta foi confirmada por palpação transretal (presença de CL no mesmo ovário e mesma posição em doisexames com intervalo de 1 O a 12 dias), por dosagem de progesterona no sangue a cada sete dias, por observação visual do estro e pelo retorno do estro após aplicação de Prostaglandina F2a. Os nove casos de infecção uterina do terceiro grau queprovocaram anestro por persistência do CL correspondem a 0,3% do total de 3.408 vacas examinadas ou 25% dos 36 casosde infecção uterina do terceiro grau. Os resultados revelam baixa prevalência de CL persistente provocado por alteração domecanismo luteolítico devido à infecção uterina, não representando importante causa de i

Corpo lúteo persistente associado a infecções uterinas em rebanhos leiteiros da Zona da Mata-MG

O exame ginecológico de 3408 fêmeas bovinas, em 50 rebanhos leiteiros da Zona da Mata de Minas Gerais, revelou 384(11 ,3%) casos de infecção uterina, das quais 186 (5,5%) de primeiro grau ou catarral, 162 (4,8%) do segundo grau oumucopurulenta e 36 (1, 1 %) do terceiro grau ou purulenta. Destas, 12 animais encontravam-se no período puerperal (até 90dias pós-parto), com 1 O em anestro, dos quais três por corpo lúteo (CL) persistente. Nos 24 casos restantes os animaisencontravam-se no período pós-puerperal (acima de 90 dias pós-parto), com 14 em anestro, dos quais seis por CL persistente,incluídos quatro fetos macerados. Não se verificou nenhum caso de infecção uterina do primeiro e segundo grau induzindopersistência de CL. Esta foi confirmada por palpação transretal (presença de CL no mesmo ovário e mesma posição em doisexames com intervalo de 1 O a 12 dias), por dosagem de progesterona no sangue a cada sete dias, por observação visual do estro e pelo retorno do estro após aplicação de Prostaglandina F2a. Os nove casos de infecção uterina do terceiro grau queprovocaram anestro por persistência do CL correspondem a 0,3% do total de 3.408 vacas examinadas ou 25% dos 36 casosde infecção uterina do terceiro grau. Os resultados revelam baixa prevalência de CL persistente provocado por alteração domecanismo luteolítico devido à infecção uterina, não representando importante causa de i

Estimativa do desempenho reprodutivo na estação de monta com base em prévia avaliação da atividade ovariana por palpação retal

Objetivou-se avaliar o uso dos resultados de exame ginecológico por palpação retal na estimativa do desempenhoreprodutivo de um rebanho, o que pode ser de grande.auxílio no manejo de uma estação de monta. Foram utilizadasvacas e novilhas guzerá e mestiças guzerá x chianina, com condição corporal e período pós-parto variados. Os animaisforam submetidos a exame ginecológico por palpação retal, duas semanas antes do início da estação de monta, eclassificados em três grupos: anestro, sinais de atividade ovariana (AO) e atividade luteal cíclica (ALC). O número deanimais apresentando cio durante os primeiros 45 dias da estação de monta foi menor (P 0,001) no grupo classificadoem anestro. Não houve diferença (p> 0,05} no número de animais em cio entre aqueles classificados em AO ou ALC.Não houve efeito da raça no número de animais em cio entre as classes predeterminadas. A elevada percentagem deanimais sem cio, observada no grupo de vacas consideradas em anestro, refletiu-se em menor taxa de gestação emrelação aos demais grupos. A caracterização da atividade luteal cíclica ovariana pela palpação retal, mesmo considerando-se a possível margem de erro da técnica, pode ser utilizada na estimativa do desempenho reprodutivo de umrebanho em estação de monta.

Estimativa do desempenho reprodutivo na estação de monta com base em prévia avaliação da atividade ovariana por palpação retal

Objetivou-se avaliar o uso dos resultados de exame ginecológico por palpação retal na estimativa do desempenhoreprodutivo de um rebanho, o que pode ser de grande.auxílio no manejo de uma estação de monta. Foram utilizadasvacas e novilhas guzerá e mestiças guzerá x chianina, com condição corporal e período pós-parto variados. Os animaisforam submetidos a exame ginecológico por palpação retal, duas semanas antes do início da estação de monta, eclassificados em três grupos: anestro, sinais de atividade ovariana (AO) e atividade luteal cíclica (ALC). O número deanimais apresentando cio durante os primeiros 45 dias da estação de monta foi menor (P 0,001) no grupo classificadoem anestro. Não houve diferença (p> 0,05} no número de animais em cio entre aqueles classificados em AO ou ALC.Não houve efeito da raça no número de animais em cio entre as classes predeterminadas. A elevada percentagem deanimais sem cio, observada no grupo de vacas consideradas em anestro, refletiu-se em menor taxa de gestação emrelação aos demais grupos. A caracterização da atividade luteal cíclica ovariana pela palpação retal, mesmo considerando-se a possível margem de erro da técnica, pode ser utilizada na estimativa do desempenho reprodutivo de umrebanho em estação de monta.

Sincronização do estro em bovinos de acordo com a fase do ciclo estral

Utilizaram-se 133 novilhas mestiças holandês-zebu,como receptoras, num programa de transferência deembrião. Esses animais tiveram o estro sincronizado com0,375 mg de cloprostenol sádico intravulvar em duas fasesdo ciclo estral. No grupo 1 (T1) foram feitas 79 aplicaçõesdo tratamento entre o 5º e 8º dia do ciclo estral e nogrupo 2 (T2) 128 aplicações entre o 9º e 17º dia. Os animaisforam mantidos em piquetes com rufiões e tiveram oestro observado três vezes ao dia (30 min. cada). A eficiênciade sincronização foi de 63,4% para T1 contra 80,2%para T2 (p 0,05). O tempo decorrido entre a aplicação eo início do estro foi de 57,44 ± 1 O, 13 h para T1 e 71 ,87 ±22,02 h para T2 (p 0,01 ). Concluiu-se que a fase do cicloestral, na qual se aplicou o tratamento, influenciou no intervaloaté o estro (maior em T2) e na eficiência da sincronização(maior em T2).

Avaliação da morfologia de oócitos imaturos de bovinos criopreservados em diferentes concentrações de 1 ,2 propanediol

O objetivo deste trabalho foi estudar a morfologia de oócitos imaturos de bovinos abatidos em matadouro, frente àcriopreservação clássica com dois gradientes de concentração diferentes de crioprotetor. No tratamento 1, utilizou-se1 ,6M de 1 ,2 propanediol, onde os oócitos foram desidratados em 3 etapas crescentes (0,53; 1 ,06 e 1 ,6M), à temperaturaambiente e congelados utilizando-se o método clássico. A descongelação foi realizada em banho Maria a 37C por30" e reidratação em três etapas decrescentes (1 ,6; 1,06 e 0,53M), acrescidos de 0,25M de sacarose cada. No tratamento2 foi utilizado 2,0M de 1,2 propanediol, de maneira semelhante ao tratamento 1, com desidratação contendo 0,7;1,4 e 2,0M e reidratação 2,0; 1,4 e 0,7M. Após a reidratação os oócitos foram lavados em meio TCM 199 e levados paramaturação in vitro. O grupo controle foi constituído de oócitos recém-colhidos, colocados para maturação por 24h emmeio TCM 199 com 10% de SVC e FSH em co-cultura, com 5% C02 no ar a 39C. Os resultados foram semelhantes(P>0.05) para as duas concentrações de propanediol utilizadas, após a descongelação e reidratação sendo que69,5% (n=308) dos oócitos apresentaram morfologia considerada normal, 5,2% (n=308) de desnudos e 25,3% (n=308)de degenerados. Entretanto, após maturação in vitro, 19,15 % (n=308) oócitos apresentaram rompimento da "zonapelúcida".

Desenvolvimento embrionário in vitro de embriões bovinos após a criopreservação pelo método one step, utilizando o etilenoglicol associado com a sacarose

Foram utilizadas oito novilhas mestiças Holandês x Zebu como doadoras de embriões, no intuito de avaliar a capa. cidade de desenvolvimento. embrionário após o procedimento de reidratação one step, utilizando o etilenoglicolassociado à sacarose como crioprotetores. Os embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia após o estro, foramavaliados morfologicamente, distribuídos aleatoriamente em dois tratamentos. Os embriões foram cultivados in vitroem monocamada de células da tuba uterina. Após 48 horas de cultivo in vitro, os embriões foram avaliados quantoao grau de desenvolvimento embrionário e número de células. Não foram observadas diferenças (p > 0,05} na taxade desenvolvimento embrionário e no número de células entre os tratamentos. Estes resultados sugerem que acongelação e descongelação pelo método one step utilizando o etilenoglicol associado à sacarose, conforme procedimentosdefinidos no experimento, é um método viável, e que poderia ser utilizado na rotina de tecnologia deembriões.

Desenvolvimento embrionário in vitro de embriões bovinos após a criopreservação pelo método one step, utilizando o etilenoglicol associado com a sacarose

Foram utilizadas oito novilhas mestiças Holandês x Zebu como doadoras de embriões, no intuito de avaliar a capa. cidade de desenvolvimento. embrionário após o procedimento de reidratação one step, utilizando o etilenoglicolassociado à sacarose como crioprotetores. Os embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia após o estro, foramavaliados morfologicamente, distribuídos aleatoriamente em dois tratamentos. Os embriões foram cultivados in vitroem monocamada de células da tuba uterina. Após 48 horas de cultivo in vitro, os embriões foram avaliados quantoao grau de desenvolvimento embrionário e número de células. Não foram observadas diferenças (p > 0,05} na taxade desenvolvimento embrionário e no número de células entre os tratamentos. Estes resultados sugerem que acongelação e descongelação pelo método one step utilizando o etilenoglicol associado à sacarose, conforme procedimentosdefinidos no experimento, é um método viável, e que poderia ser utilizado na rotina de tecnologia deembriões.

Sincronização do estro em bovinos de acordo com a fase do ciclo estral

Utilizaram-se 133 novilhas mestiças holandês-zebu,como receptoras, num programa de transferência deembrião. Esses animais tiveram o estro sincronizado com0,375 mg de cloprostenol sádico intravulvar em duas fasesdo ciclo estral. No grupo 1 (T1) foram feitas 79 aplicaçõesdo tratamento entre o 5º e 8º dia do ciclo estral e nogrupo 2 (T2) 128 aplicações entre o 9º e 17º dia. Os animaisforam mantidos em piquetes com rufiões e tiveram oestro observado três vezes ao dia (30 min. cada). A eficiênciade sincronização foi de 63,4% para T1 contra 80,2%para T2 (p 0,05). O tempo decorrido entre a aplicação eo início do estro foi de 57,44 ± 1 O, 13 h para T1 e 71 ,87 ±22,02 h para T2 (p 0,01 ). Concluiu-se que a fase do cicloestral, na qual se aplicou o tratamento, influenciou no intervaloaté o estro (maior em T2) e na eficiência da sincronização(maior em T2).

Avaliação da morfologia de oócitos imaturos de bovinos criopreservados em diferentes concentrações de 1 ,2 propanediol

O objetivo deste trabalho foi estudar a morfologia de oócitos imaturos de bovinos abatidos em matadouro, frente àcriopreservação clássica com dois gradientes de concentração diferentes de crioprotetor. No tratamento 1, utilizou-se1 ,6M de 1 ,2 propanediol, onde os oócitos foram desidratados em 3 etapas crescentes (0,53; 1 ,06 e 1 ,6M), à temperaturaambiente e congelados utilizando-se o método clássico. A descongelação foi realizada em banho Maria a 37C por30" e reidratação em três etapas decrescentes (1 ,6; 1,06 e 0,53M), acrescidos de 0,25M de sacarose cada. No tratamento2 foi utilizado 2,0M de 1,2 propanediol, de maneira semelhante ao tratamento 1, com desidratação contendo 0,7;1,4 e 2,0M e reidratação 2,0; 1,4 e 0,7M. Após a reidratação os oócitos foram lavados em meio TCM 199 e levados paramaturação in vitro. O grupo controle foi constituído de oócitos recém-colhidos, colocados para maturação por 24h emmeio TCM 199 com 10% de SVC e FSH em co-cultura, com 5% C02 no ar a 39C. Os resultados foram semelhantes(P>0.05) para as duas concentrações de propanediol utilizadas, após a descongelação e reidratação sendo que69,5% (n=308) dos oócitos apresentaram morfologia considerada normal, 5,2% (n=308) de desnudos e 25,3% (n=308)de degenerados. Entretanto, após maturação in vitro, 19,15 % (n=308) oócitos apresentaram rompimento da "zonapelúcida".