Catharanthus roseus (Apocynaceae) naturally infected with diverse phytoplasmas in Costa Rica / Catharanthus roseus (Apocynaceae) naturalmente infectada con diversos fitoplasmas en Costa Rica

Abstract Phytoplasmas (class Mollicutes) are causal agents of plant diseases with an economic impact on crops or threatening local biodiversity. A survey was conducted from 2012 to 2016 on infected Catharanthus roseus plants that exhibited symptoms reminiscent of phytoplasma infection throughout Costa Rica. A total of 73 plants were collected exhibiting symptoms such as virescence, phyllody, axillary proliferation, little leaf, leaf malformation, chlorosis, or yellowing. All samples were tested by nested PCR using phytoplasma universal and specific primer pairs. Phytoplasma infection was detected in 52 (71.2 %) of the plants collected. Phytoplasmas of six subgroups belonging to 16Sr groups I, III, IX, XIII and XV were identified based on sequencing and in silico RFLP analyses. 'Candidatus Phytoplasma asteris' (16SrI) was the predominant group among the positive samples (n = 30) showing variety of symptoms and wide distribution from sea level to ca. 1 400 m.a.s.l. in six of the seven Costa Rican provinces. Group 16SrIII was the second most abundant (14 samples); and the remaining three groups were seldom found in C. roseus (8 samples). Moreover, group 16SrXIII phytoplasma was detected for the first time in the country. To the best of our knowledge, this is the first report of natural infection of C. roseus with phytoplasma subgroups 16SrI-B, 16SrI-P, 16SrIII-F, 16SrIX-F, 16SrXIII-A, and 16SrXV-B in Costa Rica and Central America.

Resumen Los fitoplasmas (clase Mollicutes) son agentes causales de enfermedades de plantas que provocan pérdidas económicas o amenazan la biodiversidad local. Una recolecta de plantas de Catharanthus roseus que mostraban síntomas de posible infección con fitoplasmas se realizó en diferentes lugares de Costa Rica desde 2012 a 2016. Un total de 73 plantas fueron recolectadas con síntomas tales como viriscencia, filodia, brotación axilar múltiple, reducción foliar, deformación foliar, clorosis, y amarillamiento. Todas las muestras fueron evaluadas mediante PCR anidado usando los pares de imprimadores universales y específicos para fitoplasmas. Infección por fitoplasmas se detectó en 52 (71.2 %) de las muestras. Fitoplasmas de seis subgrupos dentro de los grupos 16Sr I, III, IX, XIII y XV fueron identificados basados en secuenciación del ADN y análisis de polimorfismos de restricción (RFLP) in silico. El grupo predominante encontrado en las muestras positivas (n = 30) fue el 16SrI ('CandidatusPhytoplasma asteris'), éste mostró variedad de síntomas y amplia distribución desde el nivel del mar hasta casi los 1 400 m.s.n.m. en seis de las siete provincias de Costa Rica. El grupo 16SrIII fue el segundo más abundante (14 muestras); y los restantes tres grupos se encontraron en pocas muestras de C. roseus (8 muestras). Además, fitoplasmas del grupo 16SrXIII se detectaron por primera vez en el país. De acuerdo a nuestro conocimiento, este es el primer informe de infección natural de C. roseus con fitoplasmas de los subgrupos 16SrI-B, 16SrI-P, 16SrIII-F, 16SrIX-F, 16SrXIII-A y 16SrXV-B en Costa Rica y Centroamérica.

Organización y manejo de la colección de cepas de referencia del Instituto Finlay / Organization and management of the collection of the reference strains of Finlay Institute

La Colección de Cultivos Microbianos del Instituto Finlay está constituida por cepas para la producción, la investigación y desarrollo de vacunas, así como de referencia para el control de la calidad de medios de cultivo, desinfectantes e higienizantes, entre otros. Mientras que la metodología para el manejo de los lotes de siembra de referencia de las cepas vacunales se encuentra adecuadamente establecida, en el caso de las cepas de referencia, la colección no se encontraba en óptimas condiciones. Por este motivo se elaboraron nuevos lotes de referencia a partir de cepas obtenidas de colecciones reconocidas y se estableció la documentación adecuada que incluye: expedientes de cada lote, los procedimientos normalizados de operación, los registros de elaboración y control de los lotes, las especificaciones de calidad y los certificados de ensayoAU)

The collection of microbial cultures of Finlay Institute consists of strains for the production, research and development of vaccines and reference strains for the quality control of culture media, and disinfectants and hygienizing products. The methodology for the management of the reference seed lots is adequately established, however the collection of reference strains was not in the same conditions. Considering this, new reference lots were established from well-known collections and the new documentation was established, which include lot files, standard operational procedures, registries of lot control quality specifications and assay certificates(AU)

Subchronic and acute preclinic toxicity and some pharmacological effects of the water extract from leaves of Petiveria alliacea (Phytolaccaceae)

We tested the effects of the aqueous extract of Petiveria alliacea leaves on acute and sub-chronic toxicity, hematocrit and blood glucose level and intestinal motility of male albino NGP mice of 20 to 25 g mean weight. Treatments were in all cases doses of 1,000 and 2,000 mg/kg animal weight and a control treatment with 0.5 ml distilled water, using 10 animals per treatment and administered orally every day (5 days per week). Experimental periods were 18 and 70 days for acute and sub chronic toxicity, respectively. No mortality nor any toxicity signs could be observed. A slight but significant increase in the glucose levels during the first three weeks was observed with the 1,000 mg/kg dose but not for the higher 2,000 mg/kg dose. After administering the doses once after a starving period of six hours, no significant differences in intestinal motility could be found.

Se evaluaron los efectos del estracto acuoso de las hojas de Petiveria alliacea, en la toxicidad aguda y toxicidad subcrónica, hematocritos, niveles de glucosa en la sangre y motilidad intestinal del ratón macho albino NGP, con un peso promedio de 20 a 25g. En todos los casos los tratamientos fueron dosis de 1 000 y 2 000 mg/kg de peso del animal y un tratamiento control con 0.5 ml de agua destilada, usando 10 animales por tratamiento y administrado oralmente cinco días por semana. Los períodos experimentales fueron de 18 y 70 días para toxicidad aguda y toxicidad subcrónica, respectivamente. No se observaron signos de mortalidad ni de toxidad en ambas pruebas. Con la dosis de 1 000 mg/kg hubo un leve pero significativo incremento en los niveles de glucosa durante las primeras tres semanas, pero no con la dosis más alta de 2 000 mg/ kg. Después de administrar las dosis luego de un período de hambre de seis horas, no se encontraron diferencias significativas en la motilidad intestinal.

Subchronic and acute preclinic toxicity and some pharmacological effects of the water extract from leaves of Petiveria alliacea (Phytolaccaceae).

We tested the effects of the aqueous extract of Petiveria alliacea leaves on acute and sub-chronic toxicity, hematocrit and blood glucose level and intestinal motility of male albino NGP mice of 20 to 25 g mean weight. Treatments were in all cases doses of 1,000 and 2,000 mg/kg animal weight and a control treatment with 0.5 ml distilled water, using 10 animals per treatment and administered orally every day (5 days per week). Experimental periods were 18 and 70 days for acute and sub chronic toxicity, respectively. No mortality nor any toxicity signs could be observed. A slight but significant increase in the glucose levels during the first three weeks was observed with the 1,000 mg/kg dose but not for the higher 2,000 mg/kg dose. After administering the doses once after a starving period of six hours, no significant differences in intestinal motility could be found.

Analysis of bacterial diversity in acidic pond water and compost after treatment of artificial acid mine drainage for metal removal.

The microbial population of a sludge amended leaf compost material utilized for treatment of artificial acid mine drainage was studied by culture-independent molecular methods. Iron-rich and sulfurous wastewater (artificial acid mine drainage) was circulated through a column bioreactor for 16 months. After 12 months the column was inoculated with a mixed culture from an acidic pond receiving acid mine drainage from a tailings impoundment at a decommissioned site in Kristineberg, North Sweden. Hydrogen sulfide odor and the formation of black precipitates indicated that sulfate-reduction occurred in the column. 16S rDNA gene analysis by denaturing gradient gel electrophoresis, cloning, and sequencing as well as fluorescent in situ hybridization confirmed the presence of microorganisms closely related to sulfate-reducing bacteria and microorganisms from the genera Pseudoxanthmonas, Dechlorosoma, Desulfovibrio, Agrobacterium, Methylocapsa, Rhodococcus, Sulfobacillus, and some unidentified bacteria. Sulfate-reducing bacteria were found in the column bioreactor 2 weeks after inoculation, but not thereafter. This suggests they were in low abundance, even though sulfate remediation rates were significant. Instead, the population contained species similar to those previously found to utilize humic substances released from the compost material.

Sistema de Lotes de Siembra de la cepa vacunal Vibrio cholerae 638

En la producción de biológicos, especialmente en aquellos obtenidos a partir de microorganismos, resulta imprescindible contar con un suministro de células caracterizado y estable, como punto de partida para la producción. El concepto de Sistema de Lotes de Siembra en dos niveles, en el cual el Lote de Siembra de Referencia es usado para generar el Lote de Siembra de Trabajo, es considerado el enfoque más práctico para lograr este propósito. En este trabajo se elaboraron los Lotes de Siembra de Referencia y de Trabajo de la cepa vacunal Vibrio cholerae 638, primera etapa de la fabricación de una vacuna contra el cólera, cumpliendo con los requerimientos de Buenas Prácticas de Producción (BPP), lo que constituye una exigencia de las autoridadesregulatorias nacionales e internacionales. La caracterización de los lotes demostró que se lograron adecuados niveles de viabilidad y se conservaron inalterables las características de la cepa original en cuanto a identidad, pureza, atenuación de su virulencia, capacidad de colonizar el intestino delgado de ratones lactantes y de inducir una respuesta inmune(AU)

Toxicidad sub-crónica y prueba de irritabilidad ocular del extracto acuoso de las hojas de Plantago major (Plantaginaceae) / Sub-chronic toxicity and test of eye irritability of leaf aqueous extract from Plantago major (plantaginaceae)

For the sub-chronic toxicity an aqueous preparation of Plantago major leaves was tested in 20 male NGP mice, with an average weight of 20.15 g and separated in two groups of ten individuals each. The dose used was 2000 mg/kg and the control group received 0.5 ml of distilled water. The extract administration was done daily during five days at week for a total period of 40 days. Signs of sub-chronic toxicity were observed in the days two and 12 of treatment. No significant change in corporal weight was observed. The ocular irritation was tested in five New Zeland male rabbits, with an average weight of 3.640 kg. The dose used was a 200 microliters the preparation (100 mg/ml) of Plantago major leaves, instill into the right eye and the control was used the left eye instill 200 microliters of distilled water. The administration was done daily during five days. The extract shows no significant irritation during the observation period.

[Sub-chronic toxicity and test of eye irritability of leaf aqueous extract from Plantago major (plantaginaceae)]. / Toxicidad sub-crónica y prueba de irritabilidad ocular del extracto acuoso de las hojas de Plantago major (Plantaginaceae).

For the sub-chronic toxicity an aqueous preparation of Plantago major leaves was tested in 20 male NGP mice, with an average weight of 20.15 g and separated in two groups of ten individuals each. The dose used was 2000 mg/kg and the control group received 0.5 ml of distilled water. The extract administration was done daily during five days at week for a total period of 40 days. Signs of sub-chronic toxicity were observed in the days two and 12 of treatment. No significant change in corporal weight was observed. The ocular irritation was tested in five New Zeland male rabbits, with an average weight of 3.640 kg. The dose used was a 200 microliters the preparation (100 mg/ml) of Plantago major leaves, instill into the right eye and the control was used the left eye instill 200 microliters of distilled water. The administration was done daily during five days. The extract shows no significant irritation during the observation period.

Toxicidad subcrónica del extracto acuoso de las hojas y los brotes florales de Stachytarpheta jamaicensis (L.) Vahl. (Verbenaceae) / Subchronic toxicity of the aqueous extract from the leaves and floral buds of Stachytarpheta jamaicensis (L.) Vahl. (Verbenaceae)

Se determinó la toxicidad de las hojas y los brotes florales de la especie botánica medicinal Stachytarpheta jamaicensis (L.) Vahl. El material botánico (hojas y brotes florales) fue recolectado en febrero de 1996 por el señor Víctor Rojas del Instituto Nacional de Biodiversidad (número de testigo 400 VR) en Santa Rosa, Guanacaste en las siguientes coordenadas: 10°50´20´´N-85°37´30´´W y una altitud de 290 msnm. Los extractos acuosos, preparados por decocción, de las hojas y los brotes florales de Stachytarpheta jamaicensis, se administraron por vía oral a ratones NGP machos y hembras. El extracto de las hojas se administró durante 90 d y el de los brotes florales durante 60 d. Ambos extractos fueron administrados durante 5 d consecutivos por semana. Los grupos control recibieron 0,5 mL de agua destilada por animal. El extracto acuoso de las hojas causó 40 (por ciento) de mortalidad tanto en machos como en hembras. Se evidenciaron signos de toxicidad con la administración del extracto de los brotes florales sin producir mortalidad. Todos los signos registrados sugieren un efecto general depresor sobre el sistema nervioso central, por lo que se plantea la necesidad de realizar pruebas biológicas dirigidas a la validación de un posible efecto sedante-tranquilizante de esta planta y la realización de curvas dosis-efecto de la toxicidad de esta especie

Toxicidad subcrónica del extracto acuoso de las hojas y los brotes florales de Stachytarpheta jamaicensis (L.) Vahl. (Verbenaceae) / Subchronic toxicity of the aqueous extract from the leaves and floral buds of Stachytarpheta jamaicensis (L.) Vahl. (Verbenaceae)

Se determinó la toxicidad de las hojas y los brotes florales de la especie botánica medicinal Stachytarpheta jamaicensis (L.) Vahl. El material botánico (hojas y brotes florales) fue recolectado en febrero de 1996 por el señor Víctor Rojas del Instituto Nacional de Biodiversidad (número de testigo 400 VR) en Santa Rosa, Guanacaste en las siguientes coordenadas: 10°50´20´´N-85°37´30´´W y una altitud de 290 msnm. Los extractos acuosos, preparados por decocción, de las hojas y los brotes florales de Stachytarpheta jamaicensis, se administraron por vía oral a ratones NGP machos y hembras. El extracto de las hojas se administró durante 90 d y el de los brotes florales durante 60 d. Ambos extractos fueron administrados durante 5 d consecutivos por semana. Los grupos control recibieron 0,5 mL de agua destilada por animal. El extracto acuoso de las hojas causó 40 (por ciento) de mortalidad tanto en machos como en hembras. Se evidenciaron signos de toxicidad con la administración del extracto de los brotes florales sin producir mortalidad. Todos los signos registrados sugieren un efecto general depresor sobre el sistema nervioso central, por lo que se plantea la necesidad de realizar pruebas biológicas dirigidas a la validación de un posible efecto sedante-tranquilizante de esta planta y la realización de curvas dosis-efecto de la toxicidad de esta especie(AU)

Conservación por congelación de Bordetella pertussis / y Corynebacterium diphtheriae, empleados en la / producción de vacunas para uso humano / Preservation by freezing of Bordetella pertussis and Corynebacterium diphtheriae used in the production of human vaccines

En el presente estudio se evaluó el método de congelación a -70ºC para la preservación de Bordetella pertussis y Corynebacterium diphtheriae. Para verificar el sustento de los cultivos se realizó un adecuado control de calidad, que incluyó comprobación de pureza, viabilidad y estabilidad de las propiedades de interés.En este trabajo se probaron diferentes formulaciones. Se seleccionó la que arrojó los mejores resultados y se realizó un estudio de mantenimiento de las características evaluadas durante el tiempo. Para medir determinados parámetros se realizaron procesos a escala industrial, empleándose para esto un biorreactor Chemap de 35 L. Se tomaron como referencia los valores obtenidos por las cepas conservadas por liofilización.De esta forma se buscaron alternativas y soluciones a problemas presentados en su conservación. Los resultados obtenidos sugieren la posible inclusión en el Programa de Mantenimiento establecido(AU)

Comparación de la producción del factor inhibidor de la migración de los leucocitos en recién nacidos y adultos / Comparison of production of leucocyte migration inhibition factor in newborns and adults

Para evaluar la madurez del sistema inmune en recién nacidos que por motivos diagnósticos lo requieren, es imprescindibles conocer los parámetros normales. Conociendo la importancia del factor inhibidor de de la migración de los leucocitos(FIML) y al no tener referencias en cuanto a la producción de esta linfoquina en la etapa neonatal, se decidió comparar la capacidad que tienen los linfocitos T de producir FIML, cuando han sido estimulados con antígenos y con el mitógeno fitohemaglutinina en individuos adultos sanos y niños recién nacidos por parto normal, y en estos últimos se explora la inhibión de la migración de los leucocitos de sangre de cordón umbilical incubados con FIMI, específico para un antígeno. Se concluyó que los recién nacidos no responden a los antígenos de memoria y sí lo hacen a la fitohemaglutinina y al FIML, específico para un antígeno

Comparación de la producción del factor inhibidor de la migración de los leucocitos en recién nacidos y adultos / Comparison of production of leucocyte migration inhibition factor in newborns and adults

Para evaluar la madurez del sistema inmune en recién nacidos que por motivos diagnósticos lo requieren, es imprescindibles conocer los parámetros normales. Conociendo la importancia del factor inhibidor de de la migración de los leucocitos(FIML) y al no tener referencias en cuanto a la producción de esta linfoquina en la etapa neonatal, se decidió comparar la capacidad que tienen los linfocitos T de producir FIML, cuando han sido estimulados con antígenos y con el mitógeno fitohemaglutinina en individuos adultos sanos y niños recién nacidos por parto normal, y en estos últimos se explora la inhibión de la migración de los leucocitos de sangre de cordón umbilical incubados con FIMI, específico para un antígeno. Se concluyó que los recién nacidos no responden a los antígenos de memoria y sí lo hacen a la fitohemaglutinina y al FIML, específico para un antígeno