ABSTRACT
Phenylketonuria (PKU) is an autosomal recessive disorder due to phenylalanine hydroxylase (PAH) deficiency. The PAH gene, located at 12q22-q24.1, includes about 90kb and contains 13 exons. To date, more than 420 different alterations have been identified in the PAH gene. To determine the nature and frequency of PAH mutations in PKU patients from South Brazil, mutation analysis was performed on genomic DNA from 23 unrelated PKU patients. The 13 exons and flanking regions of the PAH gene were amplified by PCR and the amplicons were analyzed by single strand conformation polymorphism (SSCP). Amplicons that showed abnormal migration patterns were analyzed by restriction endonuclease digestion and/or sequencing. Twenty-two previously reported mutations were identified including R261X, R408W, IVS2nt5g-->c, R261Q, and V388M. Polymorphisms were observed in 48.8% of the PKU patients, the most frequent being IVS2nt19t-->c, V245V, and IVS12nt-35c-->t. In addition, two novel sequence variants were identified: 1378g-->t in the 3(')-untranslated region in exon 13 which may be disease-causing and an intron 12 polymorphism, IVS12nt-15t-->c. The mutation spectrum in the patients from Southern Brazil differed from that observed in patients from other Latin American countries and further defined the molecular heterogeneity of this disease.
Subject(s)
Mutation , Phenylketonurias/genetics , Polymorphism, Genetic , Brazil/epidemiology , DNA Mutational Analysis , Genotype , Haplotypes , Humans , Phenotype , Phenylalanine Hydroxylase/deficiency , Phenylketonurias/enzymology , Phenylketonurias/ethnology , Polymerase Chain Reaction , Polymorphism, Single-Stranded Conformational , Restriction MappingABSTRACT
Os reticulócitos são células de origem eritróide com resíduos de RNA, sendo esses evidenciados com a utilização de colorações supravitais. O número de reticulócitos no sangue periférico reflete a atividade eritropoética da medula óssea. Considerando a importância da implantação de uma contagem de reticulócitos mais rápida e precisa, este trabalho tem por objetivo avaliar a correlação entre as técnicas manual e automatizada (ADVIA TM 120, Bayer Diagnostics) para contagem de reticulócitos. O equipamento ADVIA TM 120 utiliza uma reação citoquímica para a diferenciação e contagem de reticulócitos. Foram utilizadas nesse estudo 64 amostras de sangue obtidas de diferentes pacientes. As contagens foram realizadas pelas técnicas manual e automatizada, sendo que elas variaram de 0,6 a 10 porcento. Ao analisar os resultados obtidos pelas duas técnicas, foi possível observar uma forte correlação (r=0,9778, p<0,001) entre ambas. A implantação da técnica automatizada tem contribuído com a rotina do Laboratório Central de Análises Clínicas - ISCMPA, fornecendo resultados mais precisos em um menor tempo. A contagem de reticulócitos realizada no ADVIA tm 120 apresentou excelente correlação com a contagem manual, sendo bem mais prática, rápida e precisa.
