Cost-effective procedure for Streptococcus pyogenes immobilized DNA preparation and miniPFGE subtyping.

INTRODUCTION: Group A streptococci (GAS) is responsible of several human diseases ranging from mild infection to severe invasive toxin-mediated disease and post-infectious sequelae. Accordingly, a GAS surveillance program based on molecular techniques is advisable for its epidemiological control. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) is the gold standard for GAS molecular subtyping, but a major disadvantage is the length of the procedure, which takes 1-3 days of work, minimum. The aim of this study was to develop a rapid and cost-effective procedure for PFGE subtyping of GAS isolates. METHODOLOGY: Different incubation times of GAS, immobilized in agarose miniplugs, in solutions containing lysozyme and/or mutanolysine followed by solutions with urea instead of proteinase K, were assayed. DNA was restricted with SmaI and the fingerprints were obtained in clamped homogeneous electric field (CHEF) chambers and minichambers. The modified procedure was used to subtype 22 GAS isolates. RESULTS: Intact DNA molecules of GAS immobilized in agarose miniplugs were prepared incubating the cells, in situ, with a solution containing lysozyme for 4 hours, followed by the incubation in a non-enzymatic solution with urea for 2 hours. SmaIDNA macrorestriction fragments were well resolved in 5 hours and 14 minutes by electrophoresis in a CHEF minichamber at 10 V/cm. This procedure for GAS DNA preparation was useful for fingerprinting GAS strains in the format of CHEF Mapper (BioRad). CONCLUSIONS: The procedure took 13 hours for GAS strains subtyping. Both sample preparation and electrophoresis in CHEF minichamber represent an economic alternative for performing massive epidemiological studies of this human pathogen.

Detección de anticuerpos antiestreptococos, anti-enolasa y antineurales en sujetos con trastornos psiquiátricos de inicio temprano / Detection of anti-streptococcal, anti-enolase, and anti-neural antibodies in subjects with earlyonset psychiatric disorders

Introducción. La infección por Estreptococo del grupo A puede ocasionar secuelas post-infecciosas entre las que se han reportado un espectro de trastornos obsesivos-compulsivos y tics de aparición en la edad pediátrica y origen autoinmune (PANDAS). No ha sido diseñada una prueba inmunológica que permita diagnosticar inequívocamente estos trastornos. En este trabajo se evaluó la detección en suero de anticuerpos contra Enolasa cerebral humana (AE), tejido neural (AN) y Estreptococo (AS) como herramienta de laboratorio para el diagnóstico de trastornos psiquiátricos de inicio temprano. Metodología. Los anticuerpos séricos contra Enolasa cerebral humana, proteínas totales del Estreptococo y proteínas totales cerebrales fueron detectados mediante la metodología de ELISA en 37 individuos con diagnóstico presuntivo de PANDAS y en 12 sujetos sanos de México y Cuba. Resultados. Los títulos de anticuerpos contra AE y AS fueron más elevados en el grupo de pacientes vs controles (t-student, tAE=-2.17, P=0.035; tAS=-2.68, P=0.01, n=12 y 37/grupo, gl=47, nivel de significación de 0.05), mientras que los títulos de anticuerpos AN no difirieron entre ambos grupos (P(t)=0.05). La seropositividad (títulos > mediacontrol + IC95) simultánea a los tres anticuerpos fue mayor (51.4 %) en los individuos del grupo de los pacientes comparado con los controles (8.3%) (X2 =5.27, P=0.022, gl=1, n=49). Conclusiones. La detección simultánea de los tres anticuerpos séricos podría brindar información útil para el diagnóstico etiológico de los individuos con trastorno obsesivo compulsivo de inicio temprano asociados con la infección por Estreptococo y en consecuencia para indicar una terapéutica adecuada

Introduction. Infection with group A Streptococcus (Strep A) can cause post-infectious sequelae, including a spectrum of childhood-onset obsessive-compulsive (OCD) and tic disorders with autoimmune origin (PANDAS, Pediatric Autoimmune Neuropsychiatric Disorders Associated with Streptococcal Infections). Until now, no single immunological test has been designed that unequivocally diagnoses these disorders. In this study, we assessed the detection of serum antibodies against human brain enolase (AE), neural tissue (AN) and Streptococcus (AS) as a laboratory tool for the diagnosis of early-onset psychiatric disorders. Methodology. Serum antibodies against human brain enolase, total brain proteins, and total proteins from StrepA were detected by ELISA in 37 patients with a presumptive diagnosis of PANDAS and in 12 healthy subjects from Mexico and Cuba. Results. The antibody titers against human brain enolase (AE) and Streptococcal proteins (AS) were higher in patients than in control subjects (t-student, tAE=-2.17, P=0.035; tAS=-2.68, P=0.01, n=12 and 37/group, df=47, significance level 0.05), while the neural antibody titers did not differ between the two groups (P(t)=0.05). The number of subjects (titers> mean control + CI95) with simultaneous seropositivity to all three antibodies was higher in the patient group (51.4%) than in the control group (8.3%) group (X2 =5.27, P=0.022, df=1, n=49). Conclusions. The simultaneous detection of all three of these antibodies could provide valuable information for the etiologic diagnosis of individuals with early-onset obsessive compulsive disorders associated with streptococcal infection and, consequently, for prescribing suitable therapy

Detection of anti-streptococcal, antienolase, and anti-neural antibodies in subjects with early-onset psychiatric disorders.

INTRODUCTION: Infection with group A Streptococcus (StrepA) can cause post-infectious sequelae, including a spectrum of childhood-onset obsessive-compulsive (OCD) and tic disorders with autoimmune origin (PANDAS, Pediatric Autoimmune Neuropsychiatric Disorders Associated with Streptococcal Infections). Until now, no single immunological test has been designed that unequivocally diagnoses these disorders. In this study, we assessed the detection of serum antibodies against human brain enolase (AE), neural tissue (AN) and Streptococcus (AS) as a laboratory tool for the diagnosis of early-onset psychiatric disorders. METHODOLOGY: Serum antibodies against human brain enolase, total brain proteins, and total proteins from StrepA were detected by ELISA in 37 patients with a presumptive diagnosis of PANDAS and in 12 healthy subjects from Mexico and Cuba. RESULTS: The antibody titers against human brain enolase (AE) and Streptococcal proteins (AS) were higher in patients than in control subjects (t-student, tAE=-2.17, P=0.035; tAS=-2.68, P=0.01, n=12 and 37/group, df=47, significance level 0.05), while the neural antibody titers did not differ between the two groups (P(t)=0.05). The number of subjects (titers> meancontrol + CI95) with simultaneous seropositivity to all three antibodies was higher in the patient group (51.4%) than in the control group (8.3%) group (X2=5.27, P=0.022, df=1, n=49). CONCLUSIONS: The simultaneous detection of all three of these antibodies could provide valuable information for the etiologic diagnosis of individuals with early-onset obsessive-compulsive disorders associated with streptococcal infection and, consequently, for prescribing suitable therapy.

Estimulación de los receptores de macrofagos en bajas concentraciones iónicas de Na+, K+, Ca++ y Mg++: potenciales de transmembrana / Stiulation of macrophages receptors in low ionic concentrations of Na+, K+, Ca++, Mg++: transmembrane potentials

Las células mononucleares fagocíticas obtenidas de la cavidad peritoneal de la rata, cambian las magnitudes de los potenciales de transmembranas de acuerdo con el estímulo fagocítico y en relación con el receptor estimulado. La incubación de estas células en medios iónicos, donde indistintamente se les bajó las concentraciones extracelulares de Na+, K+, Ca++ y Mg++ mostraron despolarizaciones de la membrana antes de inducir la fagocitosis que estimularon los receptores específicos Fc con latex cubierto con inmunoglobulinas IgG en los medios bajos Na+, Ca+, y Mg++, no se modificaron para los medios de K+. El estímulo fagocítico; provocó hiperpolarizaciones de la membrana; para todos los cambios iónicos pero fueron de menor magnitud para los decrementos de Na+, Ca+, y Mg++, respecto a lo registrado en las soluciones tyrode normales. Los tiempos en que ocurren estos cambios de PT también se modifican. Estos resultados muestran la importancia de las concentraciones iónicas extracelulares en la capacidad fagocítica de los macrófagos

Estimulación de los receptores de macrofagos en bajas concentraciones iónicas de Na+, K+, Ca++ y Mg++: potenciales de transmembrana / Stimulation of macrophages receptors in low ionic concentrations of Na+, K+, Ca++, Mg++: transmembrane potentials

Las células mononucleares fagocíticas obtenidas de la cavidad peritoneal de la rata, cambian las magnitudes de los potenciales de transmembranas de acuerdo con el estímulo fagocítico y en relación con el receptor estimulado. La incubación de estas células en medios iónicos, donde indistintamente se les bajó las concentraciones extracelulares de Na+, K+, Ca++ y Mg++ mostraron despolarizaciones de la membrana antes de inducir la fagocitosis que estimularon los receptores específicos Fc con latex cubierto con inmunoglobulinas IgG en los medios bajos Na+, Ca+, y Mg++, no se modificaron para los medios de K+. El estímulo fagocítico; provocó hiperpolarizaciones de la membrana; para todos los cambios iónicos pero fueron de menor magnitud para los decrementos de Na+, Ca+, y Mg++, respecto a lo registrado en las soluciones tyrode normales. Los tiempos en que ocurren estos cambios de PT también se modifican. Estos resultados muestran la importancia de las concentraciones iónicas extracelulares en la capacidad fagocítica de los macrófagos