Involvement of glutathione and glutathione metabolizing enzymes in Pistia stratiotes tolerance to arsenite.

Glutathione is essential for plant tolerance to arsenic but few studies have focused on the coordination between the enzymes involved in its metabolism. We exposed Pistia stratiotes to four treatments (control, 5, 10 and 20 µM AsIII) for 24 h to evaluate the role of glutathione metabolism in arsenic response and determined the arsenic uptake, growth, membrane integrity, glutathione concentration and enzyme activities (γ-glutamyl-cysteine synthetase, glutathione reductase, glutathione peroxidase, and glutathione-S-transferase). Despite absorbing high concentrations of AsIII, plants maintained growth and cell membrane integrity when exposed to concentrations of up to 10 µM AsIII. The maintenance of these parameters involved glutathione concentration increase due to an increase in its biosynthetic pathway (higher γ-glutamyl-cysteine synthetase). In addition, an increase in the activity of glutathione reductase, glutathione peroxidase and glutathione-S-transferase also contributed to the conserve the cellular homeostasis. However, at the concentration of 20 µM AsIII, the high toxicity of AsIII affected glutathione concentration and glutathione metabolizing enzymes activities, which resulted in drastic decrease in growth and damage to cell membranes. These results showed that not only the glutathione concentration but also the coordination of the enzymes involved in the synthesis, oxidation and reduction pathways of glutathione is essential for AsIII tolerance.

Avaliação da sensibilidade do método rápido de Scharer, visual e espectrofotométrico para determinação da atividade da fosfatase alcalina residual em manteiga / Evaluation of the sensitivity of visual and spectrophotometric Scharer rapid test for determining residual alkaline phosphatase activity in butter

A determinação da fosfatase alcalina (ALP) residual é usada na indústria de laticínios há mais de 60 anos para verificar a eficiência da pasteurização. Estudos sobre a atividade dessa enzima em manteiga são escassos no Brasil, cuja avaliação é obrigatória somente para leite pasteurizado. Avaliou-se a sensibilidade do teste rápido de Scharer, modalidades visual e espectrofotométrica, para efetuar a análise da atividade da ALP em manteiga em comparação com a técnica fluorimétrica, cujo limite estabelecido pela Food and Drugs Administration (FDA) é de 350,0 mU/kg de produto. As amostras de manteigas foram preparadas com creme pasteurizado e adicionando-se quantidades de 0,000%; 0,010%; 0,015%; 0,025%; 0,050% e 0,100% (v/v) de creme cru. Pelo teste rápido de Scharer visual foi possível detectar a atividade residual da enzima a partir de concentrações de 0,050% de creme cru. Sua sensibilidade não foi condizente com a do método fluorimétrico, que detectou valores médios de 348,9 mU/kg no produto fabricado com 0,015% de creme cru. A técnica espectrofotométrica demonstrou maior sensibilidade, com detecção de creme cru na concentração de 0,015%, correspondente ao limite estabelecido pela FDA. Modificações técnicas no teste rápido de Scharer são necessárias para melhorar a sensibilidade analítica do ensaio.