ABSTRACT
Mediante la técnica del microanálisis de rayos X, se investigó la cantidad y distribución del azufre en la zona pelúcida de los ovocitos de ratón, hamster y conejo. La cantidad de azufre varía entre 2853 y 10178 mmol/Kg de peso seco. La cantidad más alta de azufre se encontró en los ovocitos de hamster y la más baja en los ovocitos de conejo; siendo la cantidad encontrada en los ovocitos de ratón, intermedia entre ambas. Se detectó una disminución gradual del azufre desde la región interna hacia la región externa de la zona pelúcida, en los ovocitos de ratón y conejo. Esto es coincidente con las asimetrías morfológica y/o bioquímica descritas para la zona pelúcida de estas especies. Aunque se han descrito asimetrías bioquímica y funcional en la zona pelúcida de los ovocitos de hamster, en el presente análisis no se detectó una distribución asimétrica del azufre. Sin embargo, resultó evidente una estratificación de este elemento en la zona pelúcida de los ovocitos de hamster
Subject(s)
Animals , Rabbits , Mice , Cricetinae , Oocytes/chemistry , Sulfur/analysis , Zona Pellucida/chemistry , Cricetinae/embryology , Mice/embryology , Rabbits/embryologyABSTRACT
We have developed a new, simple, and reproducible cytochemical method to specifically stain DNA at the electron microscopic level: the NAMA-Ur. It is based on the extraction of RNA and phosphate groups from phosphoproteins by a weak alkali hydrolysis (NA) which does not affect DNA, followed by blockage of the amino and carboxyl groups by methylation and acetylation (MA). Finally, sections are stained by uranyl (Ur), which can bind only to DNA. The efficiency of the pre-treatment (NA and MA) was demonstrated by X-ray microanalysis at the transmission electron microscopic level. The NAMA-Ur method has been successfully performed en bloc and on Lowicryl sections in mammalian and plant cells. A specific contrast is observed in the DNA-containing structures after this method, whose sensitivity allows visualization of electron-dense chromatin fibers of 10-12 nm composed of 3-nm DNA fibrils. This staining method has been combined with anti-DNA antibodies, providing complementary information to detect DNA in situ. We propose the NAMA-Ur as an easy method to investigate the chromatin organization in situ at the ultrastructural level.
