Determinación de clorhidrato de clembuterol en orina de bovinos en tres rastros municipales del estado de México / Determination of Clenbuterol Hydrochloride in Bovine Urine in Three Municipal Slaughterhouses of the State of Mexico / Determinação de cloridrato de clenbuterol em urina de bovinos em três trilhas municipais do estado do México

Resumen El objetivo del presente trabajo fue determinar el porcentaje de bovinos para abasto positivos a clorhidrato de clembuterol (CCL), con base en muestras de orina de bovinos sacrificados en 3 rastros del estado de México. Para esto se colectaron muestras en los rastros municipales de Toluca (59), Ixtlahuaca (52) y Atlacomulco (40), y se obtuvo un total de 151 muestras. El análisis de las muestras se realizó a través de la prueba de ELISA y para el reporte de resultados se utilizó estadística descriptiva. De las muestras analizadas 105 fueron positivas (69,53 %), por rastro la positividad, fue de 48, 30 y 27 respectivamente. Al establecer diferentes rangos de concentración a CCL, en el rango de 200 a 1999 pg g-1 se ubicaron 46 muestras; 6 muestras, en el rango de 2000 a 3525 pg g-1; 3, en el rango de 3526 a 5050 pg g-1; 1 muestra, entre 5051 y 6575 pg g-1, y 95 se ubicaron entre 6575 y >8100 pg g-1. El rastro con mayor porcentaje de positividad fue el de Toluca, con base en los rangos establecidos, y las concentraciones más elevadas también se observaron en el mismo rastro. El límite mínimo de detección de CCL de 2000 pg g-1 permite considerar que, con base tanto en la concentración como en su cinética, las cantidades detectadas en el estudio sirven como un indicador importante de residualidad a través de este tipo de muestra.

Abstract The present work aimed to determine the percentage of bovines that tested positive for clenbuterol hydrochloride (CCL), based on urine samples of cattle slaughtered in 3 slaughterhouses of the State of Mexico. To the effect, samples were collected in the municipal slaughterhouses of Toluca (59), Ixtlahuaca (52), and Atlacomulco (40), resulting in a total of 151 samples. Sample analysis was carried out using the ELISA test, and descriptive statistics were used to report the results. 105 of the analyzed samples were positive (69.53%); by slaughterhouse, positivity was 48, 30, and 27, respectively. When establishing different ranges of CCL concentration, 46 samples were in the range of 200 to 1999 pg g-1; 6 samples were in the range of 2000 to 3525 pg g-1; 3 were in the range of 3526 to 5050 pg g-1; 1 sample was between 5051 and 6575 pg g-1, and 95 samples were between 6575 and >8100 pg g-1. The slaughterhouse with the highest percentage of positivity was that of Toluca, based on the established ranges, and the highest concentrations were also observed there. The minimum limit for the detection of CCL (2000 pg g-1) allows considering that, based on both concentration and kinetics, the quantities detected in the study serve as an important indicator of residuality in this type of sample.

Resumo O objetivo do presente trabalho foi determinar a porcentagem de bovinos para fornecimento, positivos ao cloridrato de Clenbuterol (CCL), baseados em amostras de urina de bovinos abatidos em três trilhas do estado de México. Para isso, foram coletadas amostras nas trilhas municipais de Toluca (59), Ixtlahuaca (52) e Atlacomulco (40), e obtivera-se um total de 151 amostras. A análise das amostras realizou-se através do teste de ELISA e para o relatório de resultados foi usada estatística descritiva. Das amostras analisadas 105 foram positivas (69,53 %), pelo traço a positividade foi de 48, 30 e 27 respetivamente. Ao estabelecer diferentes faixas de concentração a CCL, 46 amostras foram colocadas na faixa de 200 a 1999 pg g-1; 6 amostras na faixa de 2000 a 3525 pg g-1; 3 na faixa de 3526 a 5050 pg g-1; 1 amostra entre 5051 e 6575 pg g-1, e 95 entre 6575 e >8100 pg g-1. A trilha com maior porcentagem de positividade foi a de Toluca, baseada nas faixas estabelecidas e as concentrações mais altas observaram-se na mesma trilha. O limite mínimo de detecção de CCL de 2000 pg g-1 permite considerar que, baseado na concentração e na cinética, as quantidades detectadas no estudo servem como indicador importante de residualidade através deste tipo de amostra.

Efecto del clorhidrato de clembuterol en la ganancia de peso y lesiones histológicas en ratones / Effect of clenbuterol hydrochloride on weight gain and histological lesions in mice / Efeito do cloridrato de clembuterol no aumento de peso e lesões histológicas em ratos

Resumen El clorhidrato de clembuterol (CCL) es un p-agonista promotor del crecimiento en animales para abasto, pero su uso ilícito ha generado repercusiones en salud pública. Se realizó un modelo biológico con ratones, con el objeto de evaluar el efecto del CCL sobre la ganancia de peso y las lesiones histológicas que ocasiona. Los ratones fueron alimentados con carne de conejo, que previamente fue suplementada con CCL. Treinta y cinco días posexposición se registró el peso corporal; se obtuvo la concentración muscular y sérica de CCL a través de la prueba de ELISA, y se colectaron tejidos (hígado y corazón) para análisis histopatológico. Los valores obtenidos de los animales experimentales (G1 y G2) se analizaron mediante un diseño experimental completamente al azar con dos tratamientos (n = 10), sometidos a un análisis de varianza y comparación de medias con la prueba de Tukey (p < 0,05). Se registró un incremento de peso corporal de 7 g en el G1, contra 4,0 g del G2. El peso del hígado fue de 2,58 g y 1,79, respectivamente (p < 0,05). En el G1 la concentración muscular de CCL fue 5324 pg g-1 y en suero sanguíneo de 4378 pg g-1. Solo se observaron cambios histológicos en tejidos de los ratones del G1. El hígado mostró tumefacción celular, mitosis moderada, picnosis y degeneración hidrópica; en corazón, engrosamiento de fibras, pleomorfismo e hileración nuclear. El CCL favoreció el incremento de peso en los ratones expuestos, y provocó alteraciones estructurales en hígado y corazón.

Abstract Clenbuterol hydrochloride (CLB) is a growth-promoting p-agonist in animals for supply, but its illicit use has generated repercussions on public health. A biological model with mice was developed to evaluate the effect of CLB on weight gain and histological lesions. Mice were fed rabbit meat, which was previously supplemented with CLB. Body weight was recorded 35 days post-exposure; muscular and serum concentration of CLB was obtained through the ELISA test, and tissues were collected from liver and heart for histopathological analysis. Values obtained from the experimental animals (G1 and G2) were analyzed by a completely randomized experimental design with two treatments (n = 10), subjected to an analysis of variance and comparison of means with the Tukey test (p<0.05). There was an increase of 7 g in body weight in G1, compared to 4.0 g in G2. Liver weight was 2.58 g and 1.79, respectively (p<0.05). In G1, CLB concentration in muscle was 5324 pg.g-1, and 4378 pg.g-1 in blood serum. Only histological changes were observed in the tissues of Gl mice. Liver showed cellular swelling, moderate mitosis, pyknosis and hydropic degeneration; in addition, fiber thickening, pleomorphism and nuclear atypia were observed in the heart. CLB contributed to weight gain in exposed mice and caused structural alterations in liver and heart.

Resumo O cloridrato de clembuterol (CCL) é um b-agonista promotor do crescimento em animais para abate, porém o seu uso ilícito tem gerado repercussões em saúde pública. Fezse um modelo biológico com ratos, com o objeto de avaliar o efeito do CCL sobre o ganho de peso e as lesões histológicas que ocasiona. Os ratos foram alimentados com carne de coelho, que previamente foi suplementada com CCL. Trinta e cinco dias pós-exposição se registrou o peso corporal; obteve-se a concentração muscular e sérica de CCL através da prova de ELISA, e foram coletados tecidos (fígado e coração) para análise histopatológica. Os valores obtidos dos animais experimentais (Gl e G2) foram analisados mediante um desenho experimental completamente ao acaso com dois tratamentos (n = 10), submetidos a uma análise de variações e comparação de médias com a prova de Tukey (p < 0,05). Registrou-se um aumento de peso corporal de 7 g no G1, contra 4,0 g do G2. O peso do fígado foi de 2,58 g e 1,79, respectivamente (p < 0,05). No G1 a concentração muscular de CCL foi 5324 pg g-1 e em soro sanguíneo de 4378 pg g-1. Somente foram observadas mudanças histológicas em tecidos dos ratos do G1. O fígado apresentou inchaço celular, mitose moderada, picnose e degeneração hidrópica; no coração, engrossamento de fibras, pleomorfismo e filamento nuclear. O CCL favoreceu o aumento de peso nos ratos expostos, e provocou alterações estruturais em fígado e coração.

Pathogenicity of Mexican isolates of Aeromonas sp. in immersion experimentally-infected rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum 1792).

Ten species of Aeromonas have been previously identified in farmed rainbow trout from Mexico. The aim of the current study was to investigate the pathogenicity of 10 Aeromonas isolates belonging to 10 different Aeromonas species in immersion experimentally-infected rainbow trout fry. Isolates of A. bestiarum, A. hydrophila, A. salmonicida, and A. veronii produced significant mortality (8.8%, 12.2%, 18.8%, and 8.8%, respectively). Isolates of A. caviae and A. sobria produced no significantly mortality (3.3% and 1.1%, respectively). No mortality was recorded in fish infected with A. allosaccharophila, A. lusitana, A. media, or A. popoffii. Microscopic lesions and bacterial reisolation were registered in liver of fish infected with the ten different Aeromonas isolates. Our results suggest that all Aeromonas species included in the study have the ability to colonize the liver. The results have confirmed that species A. bestiarum, A. hydrophila, A. salmonicida, and A. veronii affected fish as elsewhere reported. In conclusion, the variation in pathogenicity of Aeromonas isolates included in the study, emphasizes the importance of active, on-going monitoring of Aeromonas in the Mexican rainbow trout farming.

Riesgos a la salud por el uso de clorhidrato de clembuterol: una revisión / Health Risks Due to the Use of Clenbuterol Hydrochloride: a Review / Riscos à saúde pelo uso de cloridrato de clembuterol: uma revisão

En este trabajo se analiza y valora la información sobre las características y riesgos del uso de clorhidrato de clembuterol (CCL) por su potencial efecto tóxico, debido a su inclusión en la alimentación animal (bovinos, cerdos, ovinos y aves) con la finalidad de mejorar parámetros productivos-reproductivos, pero que descuidan la inocuidad alimenticia. Por eso es necesario revalorar los peligros potenciales que puede ocasionar al emplearse tanto en medicina humana como en veterinaria. El CCL es un (β-adrenérgico sintético, polvo blanco, anhidro, muy soluble en agua y altamente estable a temperatura ambiente. Es utilizado en forma clandestina en animales de engorde destinados al consumo humano. Terapéuticamente, se utiliza como un medicamento broncodilatador (pacientes con asma); en competencias deportivas se ha detectado su uso ilegal (dopaje), y en fisicoculturismo es utilizado por su efecto anabólico. Su administración en el ganado para abasto modifica e incrementa el crecimiento de masas musculares, y disminuye la acumulación de grasa; se acumula en diferentes órganos. En personas con antecedente del consumo de hígado de bovino contaminado con CCL se ha registrado temblor, dolor muscular, mareos, cefalea y taquicardia. En México, de manera ilegal y clandestina, hay distribución, comercialización y uso de CCL; sin embargo, el trabajo de las organizaciones ganaderas para el registro de unidades de producción libres de esta sustancia garantizará el consumo de los productos cárnicos. Proponer el uso de otras sustancias de las cuales hasta el momento no se tiene indicios de toxicidad propiciará una productividad sustentable, segura e inocua en las unidades de producción pecuaria.

This paper analyzes and evaluates information about the characteristics and risks of using Clenbuterol hydrochloride (CCL) for their potential toxic effects, due to its inclusion in animal food (cattle, pigs, sheep and poultry) to improve productive-reproductive parameters, but neglecting food safety. Therefore, it is necessary to reassess the potential dangers that may result when used in both human and veterinary medicine. The (β-adrenergic synthetic CCL, white powder, anhydrous, highly water soluble and highly stable at room temperature is used in a clandestine manner to fatten animals for human consumption. Therapeutically, it is used as a bronchodilator drug (asthma patients); its illegal use (doping) has been detected in sports competitions, and it is used for bodybuilding due to its anabolic effect. Its use in cattle for slaughter modifies and increases the growth of muscle mass and reduces fat accumulation, which accumulates in different organs. In people with a history of bovine liver consumption contaminated with CCL, there has been registration of: tremor, muscle pain, dizziness, headache, and tachycardia. In Mexico, in an illegal and clandestine manner, there is distribution, marketing and use of CCL; however, the work of livestock organizations in registering production units free of this substance will ensure the consumption of meat products. Moreover, to propose the use of other substances which so far have no signs of toxicity will lead to a sustainable, secure and safe productivity in livestock units.

Neste trabalho se analisa e avalia a informação sobre as características e riscos do uso de cloridrato de clembuterol (CCL) pelo seu potencial efeito tóxico, devido à sua inclusão na alimentação animal (bovinos, cerdos, ovinos e aves) com a finalidade de melhorar parâmetros produtivo-reprodutivos, mas que descuidam a inocuidade alimentícia. Por isso é necessário reavaliar os perigos potenciais que pode ocasionar ao empregar-se tanto em medicina humana como veterinária. O CCL β-adrenérgico sintético, pó branco, anidro, muito solúvel em água e altamente estável a temperatura ambiente. É utilizado em forma clandestina em animais de corte destinados ao consumo humano. Terapeuticamente, se utiliza como um medicamento bronco dilatador (pacientes com asma); em competências esportivas tem sido detectado o seu uso ilegal (dopagem), e em físico culturismo é utilizado por seu efeito anabólico. Sua administração no gado para abasto modifica e incrementa o crescimento de massas musculares, e diminui a acumulação de gordura; acumulando-se em diferentes órgãos. Em pessoas com antecedente do consumo de fígado de bovino contaminado com CCL tem se registrado: tremor, dor muscular, tonturas, cefaleia e taquicardia. No México, de maneira ilegal e clandestina, há distribuição, comercialização e uso de CCL; contudo, o trabalho das organizações pecuaristas para o registro de unidades de produção livres desta substância garantirá o consumo dos produtos de carne. Assim como também, propor o uso de outras substâncias das quais até o momento não se tem indícios de toxicidade propiciará uma produtividade sustentável, segura e inócua nas unidades de produção pecuária.

Effect of temperature on the expression of IFN-1 (α), STAT-1 and Mx-1 genes in Oncorhynchus mykiss (Salmoniformes: Salmonidae) exposed with the virus of the infectious pancreatic necrosis (IPNV) / Efecto de la temperatura sobre la expresión de genes IFN-1(α), STAT-1 y Mx-1 en alevines de trucha arcoíris Oncorhynchus mykiss (Salmoniformes: Salmonidae) expuestos al el virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV)

The infectious pancreatic necrosis (IPNV) is the causative agent of an acute illness well characterized in salmonids worldwide. Clinical signs and mortality rates are dependent on several factors such as the viral dose, the age of the fish, the water temperature, among others. An experimental study was conducted to measure the effect of temperature on the gene expression profile of IFN-1(α), STAT-1 and Mx-1 in rainbow trout fry, exposed to IPNV. Fry (n=198) were exposed at 8, 12 and 16°C, and samples were taken for 21 days to determine the virus titer and gene expression. In the first 11 days the greatest viral titer was recorded at 8°C compared with the values obtained at 12 and 16°C. At 8°C, there was a significant increase on day 4 of mRNA Mx-1 (t-test, p<0.05), time in which the viral titer began to decrease. Furthermore, as the viral titer increased, STAT-1 and Mx-1 (r=0.91) and (r=0.96) increased, respectively. The animals were able to recover from day 4 from some of the symptoms of IPN. Clinical disease was developed only in fish exposed to 12°C and all died between days 6 and 14, despite the highly significant increase shown in the average expression level of Mx-1, compared with the values recorded at 8°C and 16°C (Tukey, p<0.0001). Additionally, the expression profiles of IFN-1(α) and STAT-1 decreased completely (~0.016) and (~0.020 times) on day 7. The highest expression level of IFN-1(α), occurred at 16°C (Tukey, p<0.0005). Fry exposed at 16°C were normal during the experiment. IFN-1(α) possibly generated a protector effect from day 2 when they showed a significant expression increase compared with the results at 8°C and 12°C (t-student, p<0.0001); however, STAT-1 was not significantly affected by temperature, although the highest average expression value was recorded at 16°C. Our research supports the expression of relevant anti-viral response genes as IFN-1(α), STAT-1 and Mx-1 are physiologically modulated by the water temperature, directly influencing the development of the IPN disease in rainbow trout.

El virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNV) es el agente etiológico de una enfermedad aguda bien caracterizada en salmónidos alrededor del mundo. Los signos clínicos y la tasa de mortalidad dependen de varios factores tales como la dosis viral, la edad del pez y la temperatura del agua, entre otros. Un estudio experimental se llevó a cabo para medir el efecto de la temperatura sobre el perfil de expresión génica de IFN-1(α), STAT-1 y Mx-1 en alevines de trucha arcoíris expuestos con IPNV. Los alevines (n=198) fueron expuestos a 8, 12 y 16°C, y se tomaron muestras durante 21 días para determinar el título viral y la expresión génica. En los primeros 11 días el mayor titulo viral se registró a 8ºC en comparación con 12 y 16. A 8°C, existió un incremento significativo en el día 4 del ARNm de Mx-1 (t-test, p<0.05), momento en que el título viral empezó a disminuir. Además conforme el título viral aumentaba, también STAT-1 y Mx-1 aumentaron (r=0.91) y (r=0.96) respectivamente. Los animales fueron capaces de recuperarse desde el día 4 de algunos de los síntomas de IPN. La enfermedad clínica se desarrolló únicamente en peces expuestos a 12°C y todos murieron entre el día 6 y 14, a pesar del incremento altamente significativo mostrado en el nivel promedio de expresión de Mx-1 a 12°C, comparados con los valores registrados a 8 y 16°C (Tukey, p<0.0001). Además los perfiles de expresión de IFN-1(α) y STAT-1 decrecieron el día 7 completamente (~0.016) y (~0.020) veces, respectivamente. El nivel de expresión promedio más alto de IFN-1(α) se registró a 16°C (Tukey, p<0.0005). Los alevines expuestos a 16°C se mostraron normales durante el experimento. IFN-1(α) posiblemente generó un efecto protector desde el día 2 cuando mostró un aumento significativo en comparación con los resultados a 8 y 12°C (t-student, p<0.0001); sin embargo, STAT-1 no fue afectado de manera significativa por la temperatura, aunque el más alto valor de expresión promedio se registró a 16°C. Nuestra investigación confirma que la expresión de genes relevantes de respuesta antiviral como IFN-1(α), STAT-1 y Mx-1 son fisiológicamente modulados por la temperatura del agua, influyendo directamente en el desarrollo de la enfermedad de IPN en trucha arcoíris.