Genetic profiles of Mycobacterium bovis from a cattle herd in southernmost Brazil / Perfis genéticos de Mycobacterium bovis em um rebanho bovino no extremo sul do Brasil

Mycobacterium bovis is the agent of bovine tuberculosis, a disease endemic to all Brazilian states. Molecular typing techniques help to stratify and refine data, providing information that facilitates epidemiological research. In this study, MIRU-VNTR, targeting 24 loci, was employed to identify and characterize the genetic groups of M. bovis isolates obtained from an outbreak of bovine tuberculosis. Eighteen acid-fast bacilli isolates, obtained from bovine tissue samples, and reactive to the comparative cervical tuberculin test, were identified as species of the M. tuberculosis complex, and were genotyped by MIRU-VNTR with 24 primer pairs. Genotyping revealed three genetic profiles comprising one with 15 isolates (83.3%), one with two isolates (11.1%), and one profile with one unique isolate (5.6%). This distinction was achieved with the MIRU 31 primer, which resulted in clustering of two isolates into the same profile, and ETR A, B, and C, which discriminated the isolate with a unique profile. The occurrence of clustered isolates is indicative of recent transmission, whereas isolates with a unique profile suggest reactivation of latent infection. The presence of different M. bovis genotypes in the same herd suggests movement of infected animals or different sources of intra-herd infection. Use of the MIRU-VNTR molecular epidemiology technique in M. bovis isolates obtained from an outbreak of bovine tuberculosis in Rio Grande do Sul state demonstrated the genetic diversity of circulating strains, despite the presence of a predominant group.(AU)

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, enfermidade endêmica diagnosticada em todos os estados brasileiros. As técnicas de tipagem molecular auxiliam a estratificar e refinar dados, fornecendo informações que facilitam as atividades epidemiológicas. Neste estudo aplicou-se a técnica MIRU-VNTR com 24 loci para caracterizar e identificar os agrupamentos genéticos de isolados de M. bovis oriundos de um foco de tuberculose bovina. Dezoito isolados de bacilos álcool-ácido resistentes, obtidos de amostras de tecido de bovinos reagentes ao teste cervical comparativo e identificados como espécies do complexo M. tuberculosis, foram genotipados por meio de MIRU-VNTR com 24 pares de iniciadores. A genotipagem revelou três perfis genéticos distintos: um para 15 isolados (83,3%); um para dois isolados (11,1%) e, por fim, um isolado com perfil único (5,6%). Os iniciadores responsáveis por essa distinção foram MIRU 31, que agrupou dois isolados em um perfil, e ETR A, B e C, que discriminaram o isolado de perfil único. A ocorrência de agrupamentos de isolados é indicativa de transmissão recente, ao passo que isolados de perfil único sugerem reativação de infecção latente. A presença de diferentes genótipos de M. bovis no mesmo rebanho sugere haver circulação de animais doentes ou existirem diferentes fontes de infecção intrarrebanho. A aplicação da técnica de epidemiologia molecular MIRU-VNTR a isolados de M. bovis obtidos a partir de um foco de tuberculose bovina no Rio Grande do Sul demonstrou haver diversidade genética entre as estirpes em circulação, embora exista um agrupamento predominante.(AU)

Genetic profiles of Mycobacterium bovis from a cattle herd in southernmost Brazil / Perfis genéticos de Mycobacterium bovis em um rebanho bovino no extremo sul do Brasil

Mycobacterium bovis is the agent of bovine tuberculosis, a disease endemic to all Brazilian states. Molecular typing techniques help to stratify and refine data, providing information that facilitates epidemiological research. In this study, MIRU-VNTR, targeting 24 loci, was employed to identify and characterize the genetic groups of M. bovis isolates obtained from an outbreak of bovine tuberculosis. Eighteen acid-fast bacilli isolates, obtained from bovine tissue samples, and reactive to the comparative cervical tuberculin test, were identified as species of the M. tuberculosis complex, and were genotyped by MIRU-VNTR with 24 primer pairs. Genotyping revealed three genetic profiles comprising one with 15 isolates (83.3%), one with two isolates (11.1%), and one profile with one unique isolate (5.6%). This distinction was achieved with the MIRU 31 primer, which resulted in clustering of two isolates into the same profile, and ETR A, B, and C, which discriminated the isolate with a unique profile. The occurrence of clustered isolates is indicative of recent transmission, whereas isolates with a unique profile suggest reactivation of latent infection. The presence of different M. bovis genotypes in the same herd suggests movement of infected animals or different sources of intra-herd infection. Use of the MIRU-VNTR molecular epidemiology technique in M. bovis isolates obtained from an outbreak of bovine tuberculosis in Rio Grande do Sul state demonstrated the genetic diversity of circulating strains, despite the presence of a predominant group.

Mycobacterium bovis é o agente da tuberculose bovina, enfermidade endêmica diagnosticada em todos os estados brasileiros. As técnicas de tipagem molecular auxiliam a estratificar e refinar dados, fornecendo informações que facilitam as atividades epidemiológicas. Neste estudo aplicou-se a técnica MIRU-VNTR com 24 loci para caracterizar e identificar os agrupamentos genéticos de isolados de M. bovis oriundos de um foco de tuberculose bovina. Dezoito isolados de bacilos álcool-ácido resistentes, obtidos de amostras de tecido de bovinos reagentes ao teste cervical comparativo e identificados como espécies do complexo M. tuberculosis, foram genotipados por meio de MIRU-VNTR com 24 pares de iniciadores. A genotipagem revelou três perfis genéticos distintos: um para 15 isolados (83,3%); um para dois isolados (11,1%) e, por fim, um isolado com perfil único (5,6%). Os iniciadores responsáveis por essa distinção foram MIRU 31, que agrupou dois isolados em um perfil, e ETR A, B e C, que discriminaram o isolado de perfil único. A ocorrência de agrupamentos de isolados é indicativa de transmissão recente, ao passo que isolados de perfil único sugerem reativação de infecção latente. A presença de diferentes genótipos de M. bovis no mesmo rebanho sugere haver circulação de animais doentes ou existirem diferentes fontes de infecção intrarrebanho. A aplicação da técnica de epidemiologia molecular MIRU-VNTR a isolados de M. bovis obtidos a partir de um foco de tuberculose bovina no Rio Grande do Sul demonstrou haver diversidade genética entre as estirpes em circulação, embora exista um agrupamento predominante.

Sensibilidade da técnica de aspiração a vácuo para cultivo de medula óssea em cães sorologicamente positivos para leishmaniose / Sensitiviy of vacuum aspiratory culture technique for diagnosis of canine leshamniasis

As leishmanioses são enfermidades de seres humanos e animais produzidas por parasitos do gêneroLeishmania. A punção aspirativa para isolamento em cultura tem sido largamente reportada como umefetivo método para o diagnóstico das leishmanioses. Entretanto, o sucesso no isolamento tem sidomuito variável, em função de contaminações. Propomos neste estudo comparar o grau de recuperaçãode promastigotas em cultura a partir de diferentes métodos de obtenção do aspirado medular. Forampesquisados 194 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Campo Grande,selecionados a partir de inquérito epidemiológico realizado pelo serviço de controle da leishmaniosevisceral canina (LVC). Estes animais foram divididos em dois grupos, dos quais foram coletadasamostras de medula óssea do esterno. No grupo A, realizou-se a punção aspirativa na região esternalpor meio de seringa de 20 mL e agulha 40x16 descartáveis (sistema aberto). No grupo B, as coletasforam realizadas em sistema fechado, utilizando tubos vacuteiner heparinizados® e agulha múltiplapara coleta de sangue a vácuo, 18G (38x1,25 mm). Observou-se maior positividade e menor índice decontaminação naquele grupo colhido em sistema fechado a vácuo. O grau de recuperação de promastigotasem cultura é maior quando a coleta de medula óssea é realizada em sistema fechado a vácuo,assim como a contaminação é menor(AU)

The leishmaniasis are illnesses of humans and animals produced by parasites of the genus Leishmania.The aspirate puncture for isolation in culture has been widely reported as an effective approachfor the diagnosis of the leishmaniasis. However, the success of isolation has been variable, due tocontaminations. In this study, we propose to compare the recuperation rank of promastigotes inculture from bone marrow aspirate using different approaches. We researched 194 dogs from theControl Center of Zoonoses (CCZ) of Campo Grande, selected from epidemiological inquiry carriedout by the canine visceral leishmaniasis service control (CVL). These animals were divided into twogroups, of which were collected samples of breastbone bone marrow. We collected from the group Athe aspirate puncture from the breastbone region using a 20mL syringe and a 40x16 disposable needleby open system. From the group B, the collections were realized under a closed system, using vacuteiner® heparine tubes and multiple 18G (38x1.25 mm) needles for blood collection by vacuum. It was observedbetter results, more positivity and less contamination index on the group B, which was realized in closed system.The recuperation rank of promastigotes in culture was bigger when the collection of bone marrow was carried outunder closed system as well as we could observe less contamination(AU)

Sensibilidade da técnica de aspiração a vácuo para cultivo de medula óssea em cães sorologicamente positivos para leishmaniose / Sensitiviy of vacuum aspiratory culture technique for diagnosis of canine leshamniasis

As leishmanioses são enfermidades de seres humanos e animais produzidas por parasitos do gêneroLeishmania. A punção aspirativa para isolamento em cultura tem sido largamente reportada como umefetivo método para o diagnóstico das leishmanioses. Entretanto, o sucesso no isolamento tem sidomuito variável, em função de contaminações. Propomos neste estudo comparar o grau de recuperaçãode promastigotas em cultura a partir de diferentes métodos de obtenção do aspirado medular. Forampesquisados 194 cães provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Campo Grande,selecionados a partir de inquérito epidemiológico realizado pelo serviço de controle da leishmaniosevisceral canina (LVC). Estes animais foram divididos em dois grupos, dos quais foram coletadasamostras de medula óssea do esterno. No grupo A, realizou-se a punção aspirativa na região esternalpor meio de seringa de 20 mL e agulha 40x16 descartáveis (sistema aberto). No grupo B, as coletasforam realizadas em sistema fechado, utilizando tubos vacuteiner heparinizados® e agulha múltiplapara coleta de sangue a vácuo, 18G (38x1,25 mm). Observou-se maior positividade e menor índice decontaminação naquele grupo colhido em sistema fechado a vácuo. O grau de recuperação de promastigotasem cultura é maior quando a coleta de medula óssea é realizada em sistema fechado a vácuo,assim como a contaminação é menor

The leishmaniasis are illnesses of humans and animals produced by parasites of the genus Leishmania.The aspirate puncture for isolation in culture has been widely reported as an effective approachfor the diagnosis of the leishmaniasis. However, the success of isolation has been variable, due tocontaminations. In this study, we propose to compare the recuperation rank of promastigotes inculture from bone marrow aspirate using different approaches. We researched 194 dogs from theControl Center of Zoonoses (CCZ) of Campo Grande, selected from epidemiological inquiry carriedout by the canine visceral leishmaniasis service control (CVL). These animals were divided into twogroups, of which were collected samples of breastbone bone marrow. We collected from the group Athe aspirate puncture from the breastbone region using a 20mL syringe and a 40x16 disposable needleby open system. From the group B, the collections were realized under a closed system, using vacuteiner® heparine tubes and multiple 18G (38x1.25 mm) needles for blood collection by vacuum. It was observedbetter results, more positivity and less contamination index on the group B, which was realized in closed system.The recuperation rank of promastigotes in culture was bigger when the collection of bone marrow was carried outunder closed system as well as we could observe less contamination

Aspectos clínicos e de diagnóstico parasitológico da leishmaniose visceral canina em Campo Grande MS / Clinical and parasitological diagnostic aspects of canine visceral leishmaniasis in Campo Grande MS

A leishmaniose visceral no Brasil tem como agente etiológico Leishmania (Leishmania infantum chagasi), sendo o cão considerado o principal reservatório doméstico. Os objetivos deste estudo foram verificar a associação entre métodos parasitológicos no diagnóstico da infecção por Leishmania em cães e identificar possíveis características clínicas regionais da leishmaniose visceral canina. Foram examinados 195 cães soropositivos de Centro de Controle de Zoonoses do município de Campo Grande MS, agrupados em sintomáticos, oligossintomáticos e assintomáticos. A confirmação parasitológica por meio do exame parasitológico direto em distensão medular e ou mielocultura ocorreu em 69,7% das amostras. Esses métodos apresentaram-se significativamente associados, com grau de concordância fraco (kappa 0,21 0,40). O quadro clínico de cães com leishmaniose visceral, em Campo Grande, MS, não refere de cães de outras regiões do país. Animais infectados apresentam um espectro de características clínicas que varia do aparente estado sadio a grave apresentação sintomática. A associação do exame parasitológico direto em distensão medular com a mielocultura, em cães soropositivos, aumenta as chances de diagnóstico preciso da LVC(AU)

Visceral leishmaniasis in Brazil is caused by Leishmania (Leishmania infantum chagasi), being the dog the main domestic reservoir, the objectives of this study were to verify the association between parasitologicals approaches on the diagnosis of the Leishmania infection and to identify possible regional clinical characteristics of the canine visceral leishmaniasis in dogs. It was examined 195 seropositive dogs from the Zoonosis Control Center in Campo Grande- MS, grouped in symptomatic, oligosymptomatic and asymptomatic. The parasitological confirmation by the direct parasitological exam in distension medullar and or myeloculture was observed in 69.7% of the samples. The presented approaches were significantly associated with the low concordance degree (kappa 0.21- 0.40). the clinical chart of the dogs with visceral leishmaniasis in Campo Grande, MS, does not differ from the dogs at other regions of the country. The infected animals present a spectrum of clinical characteristics of the varies from the apparently state of healthy to severe symptomatic presentation. The association of the direct parasitological exam in medullar distension with the myeloculture increased the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in seropositive dogs(AU)

Aspectos clínicos e de diagnóstico parasitológico da leishmaniose visceral canina em Campo Grande – MS / Clinical and parasitological diagnostic aspects of canine visceral leishmaniasis in Campo Grande – MS

A leishmaniose visceral no Brasil tem como agente etiológico Leishmania (Leishmania infantum chagasi), sendo o cão considerado o principal reservatório doméstico. Os objetivos deste estudo foram verificar a associação entre métodos parasitológicos no diagnóstico da infecção por Leishmania em cães e identificar possíveis características clínicas regionais da leishmaniose visceral canina. Foram examinados 195 cães soropositivos de Centro de Controle de Zoonoses do município de Campo Grande – MS, agrupados em sintomáticos, oligossintomáticos e assintomáticos. A confirmação parasitológica por meio do exame parasitológico direto em distensão medular e ou mielocultura ocorreu em 69,7% das amostras. Esses métodos apresentaram-se significativamente associados, com grau de concordância fraco (kappa 0,21 – 0,40). O quadro clínico de cães com leishmaniose visceral, em Campo Grande, MS, não refere de cães de outras regiões do país. Animais infectados apresentam um espectro de características clínicas que varia do aparente estado sadio a grave apresentação sintomática. A associação do exame parasitológico direto em distensão medular com a mielocultura, em cães soropositivos, aumenta as chances de diagnóstico preciso da LVC

Visceral leishmaniasis in Brazil is caused by Leishmania (Leishmania infantum chagasi), being the dog the main domestic reservoir, the objectives of this study were to verify the association between parasitologicals approaches on the diagnosis of the Leishmania infection and to identify possible regional clinical characteristics of the canine visceral leishmaniasis in dogs. It was examined 195 seropositive dogs from the Zoonosis Control Center in Campo Grande- MS, grouped in symptomatic, oligosymptomatic and asymptomatic. The parasitological confirmation by the direct parasitological exam in distension medullar and or myeloculture was observed in 69.7% of the samples. The presented approaches were significantly associated with the low concordance degree (kappa 0.21- 0.40). the clinical chart of the dogs with visceral leishmaniasis in Campo Grande, MS, does not differ from the dogs at other regions of the country. The infected animals present a spectrum of clinical characteristics of the varies from the apparently state of healthy to severe symptomatic presentation. The association of the direct parasitological exam in medullar distension with the myeloculture increased the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in seropositive dogs

Trypanosoma (Duttonella) vivax: its biology, epidemiology, pathogenesis, and introduction in the New World--a review.

The biology, epidemiology, pathogenesis, diagnostic techniques, and history of the introduction of Trypanosoma (Duttonella) vivax in the New World are reviewed. The two main immunological responses of trypanosome-infected animals - antibody production and immunodepression - are discussed in the context of how these responses play a role in disease tolerance or susceptibility. Isolation and purification of T. vivax are briefly discussed. The recent reports of bovine trypanosomiasis diagnosed in cattle on farms located in the Pantanal region of the states of Mato Grosso do Sul and Mato Grosso, Brazil, are also discussed.

Trypanosoma (Duttonella) vivax: its biology, epidemiology, pathogenesis, and introduction in the New World - a review

The biology, epidemiology, pathogenesis, diagnostic techniques, and history of the introduction of Trypanosoma (Duttonella) vivax in the New World are reviewed. The two main immunological responses of trypanosome-infected animals - antibody production and immunodepression - are discussed in the context of how these responses play a role in disease tolerance or susceptibility. Isolation and purification of T. vivax are briefly discussed. The recent reports of bovine trypanosomiasis diagnosed in cattle on farms located in the Pantanal region of the states of Mato Grosso do Sul and Mato Grosso, Brazil, are also discussed.

Mycobacterium bovis identification by a molecular method from post-mortem inspected cattle obtained in abattoirs of Mato Grosso do Sul, Brazil

The presence of Mycobacterium bovis in bovine carcasses with lesions suggestive of tuberculosis was evaluated. Seventy-two carcass samples were selected during slaughter inspection procedures in abattoirs in the state of Mato Grosso do Sul, Brazil. Seventeen (23.6 percent) of samples showed colonies suggestive of mycobacteria that were confirmed to be acid-fast bacilli by Ziehl-Neelsen staining. Polymerase chain reaction (PCR) using primers specific for M. bovis identified M. bovis in 13 (76.5 percent) isolates. The PCR-restriction enzyme pattern analysis using gene encoding for the 65-kDa protein and two restriction enzymes identified the remaining four isolates that were represented by two M. tuberculosis complex and two nontuberculous mycobacteria. The results are indicative of infection of slaughter cattle by M. bovis and other mycobacteria in the state of Mato Grosso do Sul.

Mycobacterium bovis identification by a molecular method from post-mortem inspected cattle obtained in abattoirs of Mato Grosso do Sul, Brazil.

The presence of Mycobacterium bovis in bovine carcasses with lesions suggestive of tuberculosis was evaluated. Seventy-two carcass samples were selected during slaughter inspection procedures in abattoirs in the state of Mato Grosso do Sul, Brazil. Seventeen (23.6%) of samples showed colonies suggestive of mycobacteria that were confirmed to be acid-fast bacilli by Ziehl-Neelsen staining. Polymerase chain reaction (PCR) using primers specific for M. bovis identified M. bovis in 13 (76.5%) isolates. The PCR-restriction enzyme pattern analysis using gene encoding for the 65-kDa protein and two restriction enzymes identified the remaining four isolates that were represented by two M. tuberculosis complex and two nontuberculous mycobacteria. The results are indicative of infection of slaughter cattle by M. bovis and other mycobacteria in the state of Mato Grosso do Sul.

Evaluation of antibodies production against Borrelia burgdorferi in cattle submitted to rBm86 protein Boophilus microplus tick immunization and associated challenges influence

Avaliou-se a produção de anticorpos da classe Ig-G anti Borrelia burgdorferi em bovinos imunizados com proteína recombinante Bm86 de Boophilus microplus, assim como a influência de imunizações e estresse associados por meio do teste ELISA indireto no período de um ano. Não houve interferência na produção de anticorpos IgG anti B. burgdorferi pelos desafios utilizados isoladamente no presente estudo. O imunógeno rBm86 não causou oscilações significantes na produção de anticorpos IgG anti B. burgdorferi capazes de interferir nos resultados sorológicos para Borreliose de Lyme em bovinos. O estudo demonstrou a possibilidade de alterações transitórias na produção de anticorpos após estímulos vacinais e de estresse associados, ressaltando a necessidade de estudos sorológicos em conjunto a dados epidemiológicos e de manejo.

Evaluation of antibodies production against Borrelia burgdorferi in cattle submitted to rBm86 protein Boophilus microplus tick immunization and associated challenges influence

IgG antibodies production against Borrelia burgdorferi in immunized cattle with rBm86 protein from Boophilus microplus was evaluated as well as the influence of the association between immunizations and stress through indirect ELISA test during one year. In the present study there was no influence of the isolated challenged used on the production of IgG antibodies against B. burgdorferi. The rBm86 immunogen did not cause significant oscillation in the production of IgG antibodies against B. burgdorferi capable to interfere in the serological results for Lyme Borreliosis in cattle. This study demonstrated the possibility of transitory changes in the production of antibodies after the association of vaccine stimuli and stress, emphasizing the necessity of serological studies combined with epidemiological and management data.

Avaliou-se a produção de anticorpos da classe Ig-G anti Borrelia burgdorferi em bovinos imunizados com proteína recombinante Bm86 de Boophilus microplus, assim como a influência de imunizações e estresse associados por meio do teste ELISA indireto no período de um ano. Não houve interferência na produção de anticorpos IgG anti B. burgdorferi pelos desafios utilizados isoladamente no presente estudo. O imunógeno rBm86 não causou oscilações significantes na produção de anticorpos IgG anti B. burgdorferi capazes de interferir nos resultados sorológicos para Borreliose de Lyme em bovinos. O estudo demonstrou a possibilidade de alterações transitórias na produção de anticorpos após estímulos vacinais e de estresse associados, ressaltando a necessidade de estudos sorológicos em conjunto a dados epidemiológicos e de manejo.

Alteraçoes clínicas, patológicos e laboratoriais na intoxicaçao crônica por cobre em ovinos / Clinical, pathological and laboratorial changes in the copper chronic intoxication in sheep

Com o objetivo de avaliar a toxicidade do cobre em ovinos, administrou-se sulfato de cobre a quatro grupos, nas dosagens de 15, 30, 60 e 120ppm, até surgirem os sinais da intoxicaçao; um quinto grupo permaneceu como controle. Estes animais foram submetidos a exames clínicos diários e a determinaçoes periódicas dos níveis séricos de trasaminase glutâmico oxalacética (AST) e gamaglutamiltransferase (gamaGT). Aqueles que morreram durante o experimento foram necropsiados, sendo os fragmentos dos principais órgaos analisados histologicamente; adicionalmente foram determinados os níveis de cobre hepático. Em todos os grupos houve casos de intoxicaçao, os quais ocorreram entre 80 e 116 dias. Os principais sinais clínicos da intoxicaçao foram: depressao, icterícia, hemoglobinúria e diarréia. Elevaçoes dos níveis de gamaGT e AST foram observadas entre 21 e 43 dias antes do aparecimento dos sinais clínicos, atingindo valor máximo durante o quadro clínico. As principais alteraçoes histológicas foram observadas no fígado e rins, revelando lesoes degenerativas. Os valores de cobre hepático variaram entre 1097,5 e 1366,9ppm, evidenciando níveis iguais ou superiores a duas vezes o valor considerado como limite máximo normal, confirmando-se assim que este elemento foi responsável pelo quadro clínico patológico. Todas as dosagens usadas no experimento foram consideradas como potencialmente tóxicas para esta espécie animal.