ABSTRACT
In eukaryotes, the Suv39 family of proteins tri-methylate lysine 9 of histone H3 (H3K9me) to form constitutive heterochromatin. However, how Suv39 proteins are nucleated at heterochromatin is not fully described. In the fission yeast, current models posit that Argonaute1-associated small RNAs (sRNAs) nucleate the sole H3K9 methyltransferase, Clr4/SUV39H, to centromeres. Here, we show that in the absence of all sRNAs and H3K9me, the Mtl1 and Red1 core (MTREC)/PAXT complex nucleates Clr4/SUV39H at a heterochromatic long noncoding RNA (lncRNA) at which the two H3K9 deacetylases, Sir2 and Clr3, also accumulate by distinct mechanisms. Iterative cycles of H3K9 deacetylation and methylation spread Clr4/SUV39H from the nucleation center in an sRNA-independent manner, generating a basal H3K9me state. This is acted upon by the RNAi machinery to augment and amplify the Clr4/H3K9me signal at centromeres to establish heterochromatin. Overall, our data reveal that lncRNAs and RNA quality control factors can nucleate heterochromatin and function as epigenetic silencers in eukaryotes.
Subject(s)
Cell Cycle Proteins , Heterochromatin , Histone-Lysine N-Methyltransferase , Histones , Schizosaccharomyces pombe Proteins , Schizosaccharomyces , Cell Cycle Proteins/metabolism , Centromere/metabolism , Heterochromatin/metabolism , Histone-Lysine N-Methyltransferase/metabolism , Histones/metabolism , Methylation , Methyltransferases/metabolism , RNA, Long Noncoding/metabolism , RNA, Long Noncoding/genetics , Schizosaccharomyces/metabolism , Schizosaccharomyces/genetics , Schizosaccharomyces pombe Proteins/metabolism , RNA, Fungal/genetics , RNA, Small Interfering/geneticsABSTRACT
Se utiliza una técnica de coloración con plata para visualizar las Regiones Organizadoras Nucleolares (AgNORs). La evaluación cuantitativa y cualitativa de estas regiones representa en la actualidad un marcador de actividad proliferativa en células tumorales. El presente estudio tuvo como objetivo caracterizar las AgNORs en algunos tipos de tumores cutáneos caninos, para lo cual se evaluaron 28 mastocitomas, 18 carcinomas espinocelulares y siete epiteliomas basocelulares, procedentes del archivo de Patología Animal y del Consultorio Veterinario de la Universidad de Antioquia, y de otros consultorios de la ciudad de Medellín, Colombia. Las muestras bloqueadas en parafina se cortaron a cuatro micras, y se colorearon con Hematoxilina-Eosina y Giemsa paradiagnosticar y clasificar los mastocitomas. Se utilizó otra serie de cortes coloreados con plata para evaluar morfométricamente las AgNORs utilizando un Sistema Automático Analizador de Imágenes (SAAI). Se evaluaron los parámetros: área nuclear, área AgNORs/célula, número de AgNORs/ célula, y distribución AgNORs en la célula. Para determinar el número de células a evaluar se utilizó el estudio de variación de la inestabilidad de los valores medios, con relación al tamaño de la muestra;se obtuvo un mínimo representativo de 20 células por caso para los mastocitomas y los carcinomas espinocelulares, y de 30 células por caso, para los tumores basocelulares. Los datos fueron analizadosestadísticamente mediante el análisis de varianza (ANOVA) y se compararon las medias por el test de Fischer (F) empleando un nivel de significancia de p<0.05. La coloración AgNORs fue factible en lostumores evaluados para lo cual se necesitaron de 30 minutos en el período de incubación. El análisis estadístico mostró que los mastocitomas grado II poseen un área nuclear menor estadísticamentesignificativa (p<0.05). Existe además, diferencia estadística significativa (p<0.05) en el número y en el área de las AgNORs entre los tres grados hi...
