Comparison of colony-stimulating activities for evaluating in vitro granulomonopoiesis in normal subjects and in patients with myeloid leukemias

El crecimiento in vitro de unidades formadoras de colonias granulomonocíticas (UFC-GM) en sangre periférica (SP) y médula ósea (MO) humana requiere de fractores estimuladores denominados actividad estimuladora de colonias (AEC). El ensayo de Pike & Robinson emplea como fuente de AEC capa alimentadora (CA) compuesta por leucocitos de SP inmovilizados en agar. No obstante que este ensayo de bicapa presenta desventajas técnicas es ampliamente utilizado. Los sobrenadantes tisulares y celulares con actividad biológica para la UFC-GM, también conocidos como medios condicionados (MC), eliminan lsos incovenientes teécnicos de la estimulación con CA. En el presente trabajo se prepararon dos MC, uno de CA (MC-CA) y otro de leucocitos estimulados con fitohemaglutinina (MC-LEF). La AEC de ambos MC se comparó con la producida por la CA. Las tres AEC, evaluadas por el número de racimos (agregados celulares con 3 a 39 células) y de colonias (agregados celulares con -> 40 células) presentes en el cultivo, se probaron en células obtenidas de SP de 17 individuos sanos, y en células de SP (17 muestras) y MO (12 muestras) de enfermos con leucemias mieloides. Se encontró que el MC-CA indujo un número significativamente menor de agregados celulares tanto en muestras de sujetos normales como de enfermos leucémicos al compararlo con el ensayo de CA. En muestras de pacientes con leucemia, el crecimiento clonal mediado por el MC-LEF fue similar al encontrado con CA. En cambio, la adición de MC-LEF a muestras de sujetos sanos dio como resultado un número promedio de colonias significativamente menor al observado con CA. Estos resultados indican que el MC-CA es una fuente inapropiada de AEC para muestras provenientes de sujetos normales y de pacientes leucémicos, mientras que la AEC derivada del MC-LEF mantiene adecuadamente el crecimiento de UFC-GM en muestras de enfermos con leucemia, pero no en muestras de personas normales. Basados en estos hallazgos y en los incovenientes técnicos del ensayo de Pike & Robinson, se concluye que el MC-LEF permite una mejor evaluación de la granulomonopoyesis in vitro en pacientes con leucemias mieloides

Release of granulocyte-macrophage colony-inhibiting activity by normal human postthymic precursor cells.

Seven normal human peripheral blood cell fractions (buffy coat, mononuclear cells, non-T, T, Fc-IgM receptor-depleted T-lymphocyte, Fc-IgG receptor-depleted T-lymphocyte, and autologous rosette-forming T-cell-depleted T-lymphocyte subpopulations) treated with phytohemagglutinin (PHA) were examined for the production of granulocyte-macrophage colony-stimulating activity (CSA). It was found that medium conditioned by a T-lymphocyte subpopulation depleted of autologous rosette-forming T-cells (Tar cells, a postthymic precursor subpopulation that inhibits Ig synthesis) stimulated colony-forming units of granulocyte and macrophages (CFU-GM) to a greater extent than did the other conditioned media (CM) analyzed. Based on this finding, CM from an enriched Tar subpopulation was prepared and thus showed that PHA-treated Tar cells release a factor capable of inhibiting CFU-GM growth. The inhibitory activity of this factor persisted-after heat inactivation, suggesting that cause of the colony-inhibiting activity (CIA) is other than interferon. Further studies revealed that Tar-derived inhibitory factor acts either directly upon CFU-GM or via monocytes/macrophages (M phi/Ma), enhancing CIA, and not the level of CSA production by M phi/Ma. The overall data are interpreted as demonstrating the presence of CIA in a specific T-lymphocyte subpopulation that may represent a new relationship between lymphocytic and myelocytic systems in the human.

Ferritin in normal human peripheral blood T-lymphocyte subpopulations.

Six peripheral blood lymphoid fractions (total lymphocytes, non-T, T, Tar (autologous rosette-forming T cells/precursor), T mu (helper), and T gamma (suppressor) lymphocytes) isolated through rosetting procedures were examined for the presence of ferritin by a direct immunofluorescence technique. Although ferritin was present in all lymphoid fractions studied, a significantly higher proportion of ferritin-containing cells were detected in the T-cell fraction than in the non-T-cell fraction, (mean +/- SD = 7.9 +/- 1.6% and 5.0 +/- 1.2%, respectively). T mu- and T gamma-cell fractions showed a twofold increase in the number of ferritin-positive cells (14.1 +/- 1.4% and 15.4 +/- 2.6%, respectively), as compared with Tar (7.0 +/- 0.9%)-and total lymphocyte (6.9 +/- 1.3%)-cell fractions. These results indicate that ferritin is preferentially distributed in T mu and T gamma lymphocytes and may constitute the basis for explaining some of the roles exercised by these cells in the control of other biological systems.

Lymphocyte subpopulations and serum immunoglobulins in splenectomized patients with hereditary spherocytosis.

Estudios efectuados en roedores demuestran la participacion importante del bazo en determinadas funciones inmunologicas.En el humano, los conocimientos que se tienen de este organo y de su participacion en la respuesta inmune emanan principalmente de estudios realizados en enfermos esplenectomizados por un padecimiento inmunologico. Hasta el momento, no existe evidencia de defecto inmunologico en los pacientes con eferocitosis hereditaria (EH), esto hace que los enfermos con EH constituyan un grupo adecuado para evaluar la repercusion de la esplenectomia en el sistema inmune. Se estudiaron 10 enfermos esplenectomizados no infectados con EH y 7 personas sanas. A todos los participantes se les practicaron 10 pruebas inmunologicas que incluyeron, enumeracion de subpoblaciones linfociticas en sangre periferica y cuantificacion de inmunoglobulinas sericas. Los pacientes esplenectomizados comparados con los individuos sanos mostraron un numero significativamente mayor de leucocitos, linfocitos totales, y de celulas con receptores para la fraccion cristalizable de la IgC y con receptores para la fraccion tercera del complemento, asi como un incremento significativo de la IgA. Estos hallazgos sugieren una funcion importante del bazo en el control migratorio de los linfocitos y en la produccion de inmunoglobulinas