Identificación de espermatozoides humanos en muestras contaminadas con levaduras / Identification of human spermatozoids in samples contaminated with yeast

RESUMEN La violencia sexual es un problema mundial, y representa un delito grave que frecuentemente es difícil imputar, ante la ausencia de testigos. La valoración de las muestras de semen enviadas al laboratorio, para la detección de espermatozoides, es de gran importancia para encontrar al agresor; sin embargo, la evidencia no es sencilla, por la presencia de otros organismos y la labilidad espermática. El objetivo del presente estudio fue identificar espermatozoides humanos en muestras contaminadas con levaduras. Se aplicaron diferentes técnicas y recursos microscópicos. Se seleccionaron 46 muestras de semen fresco. Se dividieron en dos grupos: G1 normo u oligozoos-pérmicas (n = 28) y G2 azoospérmicas (n = 18). Cada muestra se diluyó 1:1 con solución fisiológica y se agregaron 0.05 mL de suspensión de levaduras Candida albicans. Como control, se procesaron testigos puros de espermatozoides (CE) y levaduras (CL). Las muestras se analizaron con microscopio óptico (MO), contraste de fase (CF), de luz polarizada (LP) y microscopio fluorescente (MF) con diferentes técnicas de tinción. El tinte Papanicolaou mostró mayor eficiencia que el tinte hematoxilina verde brillante (P < 0.05) para identificar espermatozoides con microscopio óptico. La detección de elementos refringentes mostró mayor correlación con la presencia de espermatozoides (CF: r = 0.966; P < 0.001), que la presencia de elementos birrefringentes (LP: r = 0.737; P < 0.001) y elementos fluorescentes (MF: r = 0.487; P < 0.05). La microscopía confocal con tinción de blanco de calcofluor-azul de Evans y naranja de acridina permitió la identificación de contaminación por levaduras. El empleo de técnicas microscópicas auxiliadas con técnicas de tinción permite confirmar la presencia de espermato zoides enteros o fragmentados en muestras de semen contaminadas con levaduras.

ABSTRACT Sexual violence is a global problem, and represents a serious felony which is often difficult to impute due to the absence of witnesses. The evaluation of semen samples sent to the laboratory, for the detection of spermatozoa is of great importance to find the aggressor. However the evidence is not simple due to the presence of other organisms and sperm lability. The objective of the present study was to identify human spermatozoa in samples contaminated with yeast. Different techniques and microscopic resources were applied and 46 samples of fresh semen were selected. They were divided into two groups: G1 normo or oligozoos-perms (n = 28) and G2 azoosperms (n = 18). Each sample was diluted 1:1 with physiological solution and 0.05 mL of yeast suspension Candida albicans was added. As controls, pure sperm (CE) and pure yeast (CL) were processed. The samples were analyzed with optical microscopy (MO), phase contrast (CF), polarized light (LP) and fluorescent microscope (MF) with different staining techniques. Papanicolaou dye showed greater efficiency than bright hematoxylin-green dye (P < 0.01) to identify spermatozoa with an optical microscope. The presence of refringent elements showed a higher correlation with the presence of spermatozoa (LP: r = 0.966; P < 0.001), that the presence of birrefringent elements (LP: r = 0.737; P < 0.001) and fluorescent elements (MF: r = 0.487, P < 0.05). Confocal microscopy with Evans blue calco-fluor white stain and acridine orange allowed the identification of yeast contamination. The use of microscopic techniques aided by staining techniques confirms the presence of whole or fragmented spermatozoa in semen samples contaminated with yeasts.

Efecto del tabaquismo sobre la espermatogenesis en hombres con infertilidad idiopatica / Effect of tobacco consumption on the spermatogenesis in males with idiopathic infertility

Objetivo: Relacionar en hombres con infertilidad idiopática, el tabaquismo con parámetros seminales espermatogénicos, tales como morfología espermática, concentración de espermatozoides y células germinales en muestras de semen fresco. Métodos: Se realizó un estudio prospectivo en 131 hombres con infertilidad idiopática que asistieron al Servicio de Reproducción del Hospital Centenario de Rosario desde mayo de 2004 a junio de 2006. Se realizó espermograma según normas OMS evaluando células germinales y morfología espermática con tinción Papanicolaou. La concentración de espermatozoides se determinó por el método subjetivo con cámara de Neubauer. La población en estudio se dividió en 3 grupos G1 fumadores de más de 20 cig/día, G2 fumadores de menos de 20 cig/día y G3 hombres no fumadores. Los fumadores lo hacían al menos desde hace un año. Resultados: Los resultados obtenidos se analizaron mediante la prueba t Student, encontrándose diferencia estadísticamente significativa para las 3 variables entre G1 vs G3 (p<0.001) y G2 vs G3 (p<0.005). .No se encontró diferencia significativa entre los grupos de fumadores G1vsG2 (p>0.1). Conclusiones: El tabaco altera la concentración y morfología espermática con aumento de formas espermáticas inmaduras que manifiestan un proceso espermatogénico alterado. El consumo de tabaco debe ser evaluado al realizar un estudio integral del hombre infértil (AU)

Objectives: Our objetive was to relate the tobacco with seminal spermatogenic parameters such as sperm morphology, concentration of spermatozoids and germinal cells in samples of semen from men with idiopatic infertility. Methods: A prospective study was carried out on a population of 131 men with idiopatic infertility that attended the Reproduction Service of Centenario Hospital in Rosario from may 2004 to june 2006. Sperm study according to WHO was carried out evaluating germinal cells and sperm morphology with Papannicolaou. The concentration of spermatozoids was determined by means of a subjective method with Neubauer camera. The studied population was divided in the three groups: G1: smokers more of 20 cigarettes/day, G2: smokers under 20 cigarettes/day, G3 non smokers. The smokers had had the habit for over a year. Results: Results were analyzed with the student’s t-test. Statistically significant differences between G1 vs G3 (p<0.001) and G2 vs G3 (p<0.005) were found for the three variables. No significant difference was found between the groups of smokers G1 vs G2 (p>0.1). Conclusions: The results show that tobacco alters sperm concentration and morphology with an increase of immature forms, demonstrating an altered spermatogenesis process. The consumption of tobacco should be evaluated to carry out the integral study of infertile man (AU)

[Macrophages in human semen]. / Macrófagos en semen humano.

OBJECTIVES: To investigate the presence of macrophages in human semen samples and the function they carry out in the seminal fluid. Their presence was studied in relation to spermatic morphology, percentage of spermatozoids with native DNA, and presence of antispermatic antibodies. METHODS AND RESULTS: The work was performed with semen samples from 31 unfertile males from 63 couples in which the "female factor" was ruled out as the cause of infertility. Sperm study according to WHO (1992) was carried out in all samples, in addition to: DNA study with acridine orange as fluorocrom, macrophage concentration by neutral red in a Neubauer camera, and detection of antispermatic antibodies with a mixed agglutination test (TAC II) (validated with Mar Screen-Fertility technologies). Sperm morphology was evaluated by Papanicolaou test. 19/31 selected sperm samples (61.3%) showed increased concentration of macrophages, 13 of them (41.9%) with denaturalized DNA, and 8 (25.8%) abnormal morphology. Six samples showed increased macrophage concentration and predominance of native DNA, whereas 11 samples showed increased macrophages and abnormal morphology. Among 18 (58.1%) samples showing antispermatic antibodies 14 (77.7%) had an increased concentration of macrophages. Statistical analysis resulted in a high correlation between macrophage concentration and increased percentage of spermatozoids with denaturalized DNA (p < 0.05). An increased concentration of macrophages is associated with the presence of antispermatic antibodies (p < 0.05). There was not evidence of significant association between concentration of macrophages and percentage of morphologically normal spermatozoids (p < 0.05). CONCLUSIONS: We can conclude that macrophages are present in human semen and participate in immunovigilance contributing to improve the seminal quality.

Macrófagos en semen humano / Macrophages in human semen

OBJETIVO: Nuestro objetivo fue investigar la presencia de macrófagos en muestras de semen humano y la función que los mismos desempeñan en el fluido seminal. Para ello se los relacionó con morfología espermática, porcentaje de espermatozoides con ADN nativo y presencia de anticuerpos antiespermáticos (AAE). MÉTODO Y RESULTADOS: Se trabajó con muestras de semen de 31 hombres infértiles provenientes de 63 parejas en las que se descartó el "factor femenino" como causa de infertilidad. En todas ellas se efectuó espermograma según normas O.M.S., además de: estudio del ADN con Naranja de Acridina como fluorocromo; la concentración de macrófagos que se realizó con Rojo Neutro en cámara de Neubauer y la investigación de anticuerpos antiespermáticos con el test de aglutinación mixta TAC II (Validado frente a Mar Screen- Fertility Technologies). Para evaluar la morfología espermática se utilizó tinción Papanicolaou. De las 31 muestras de semen seleccionadas en 19 (61,3 por ciento) se observó concentración aumentada de macrófagos, de las cuales 13 (41,9 por ciento) presentaban ADN desnaturalizado y 8 (25,8 por ciento) morfología anormal. Seis de las muestras presentaron concentración de macrófagos aumentados y predominio de ADN nativo, mientras que once tenían macrófagos aumentados y morfología alterada . De las 18 (58,1 por ciento) muestras que presentaban AAE hubo 14 (77,7 por ciento) con concentración de macrófagos aumentada. De los estudios estadísticos realizados surge que, la concentración de macrófagos está altamente correlacionada con un aumento del porcentaje de espermatozoides con ADN desnaturalizado (p<0,05). La concentración aumentada de macrófagos está asociada a la presencia de AAE. (p<0,05). No se encontró asociación significativa entre la concentración de macrófagos y el porcentaje de espermatozoides morfológicamente normales (p<0,5). CONCLUSION: Podemos concluir que los macrófagos están presentes en el semen humano y participan en la inmunovigilancia contribuyendo a mejorar la calidad seminal (AU)