Aislamiento de plásmidos conjugativos en cepas de enterobacterias productoras de ß-lactamasas de espectro expandido / Isolation of conjugative plasmids in enterobacteriaceae strains producing beta-lactamases expanded sprectrum

Las ß-lactamasas de espectro expandido son enzimas capaces de hidrolizar el enlace amida de los oximino ß-lactámicos, (cefotaxime, ceflazidime y aztreonam). Las mismas son codificadas en plásmidos y por lo tanto pueden ser transferidas mediante conjugación a diversos géneros bacterianos. Diseminándose ampliamente en el ambiente hospitalario. En esta investigación se persigue, en cepas de enterobacterias aislar plásmidos que codifican para ß-lactamasas de espectro expandido y que sean capaces de transferirse mediante conjugación. Se estudio una población de 51 enterobacterias productoras de ß-lactamasas de espectro expandido aisladas de diferentes centros hospitalarios del área Metropolitana de Caracas. A las mismas se le determinó el perfil de resistencia a múltiples antibióticos mediante la metodología de Kirby-Bauer. Se detectaron las BLEE mediante dos ensayos fenotípicos basados en el efecto sinergístico con el ácido clavulánico y se tipificaron molecularmente por PCRIRFLP, seguidamente se transfirieron los plásmidos conjugativos en ensayos de conjugación en medio sólido y se aislaron los plásmidos de cepas donantes y transconjugautes, por el método de lisis alcalina. Los resultados fenotípicos indican una mayor proporción de BLEE con actividad ceflazidimasa y en menor grado actividad cefotaximasa. La tipificación molecular indicó que 60,8 por ciento de las cepas portan genes tipo SHV y 15,6 por ciento codifican ß-lactamasas de espectro expandido de la familia CTX-M. De 36 cepas conjugadas un 81 por ciento transfirió material plasmídico. El análisis de los aislamientos plasmídicos mostró la presencia en la totalidad de las transcojugantes de una banda de 25000 pb y en un 80 por ciento se evidenció una banda plasmídica mayor a 50000 pb. Se pudo constatar la cotransferencia de resistencia a otras familias de antibióticos.

Micobacterias en muestras de autopsias / Mycobacteria in autopsy samples

Se estudiaron bacteriológicamente 83 muestras provenientes de autopsias (34 tejido ganglionar y 24 leptomeninges) correspondientes a 34 pacientes fallecidos y clínica de tuberculosis y/o VIH. En el 10,8 por ciento (9/83) hubo crecimiento de micobacterias: cuatro de M. tuberculosis y cinco micobacterias no tuberculosas (MNT): M. gordonae (1), M. vaccae (1) y tres que no pudieron ser identificadas bioquímicamente. Seis de estos aislados fueron estudiados por PCR, mediante amplificación de la secuencia IS6110. Se reconfirmaron como micobacterias del complejo tuberculoso (MCT) tres aislados (50 por ciento). En los tres aislados restantes, correspondientes a MNT, no se obtuvo amplificación de la secuencia IS6110. Sin embargo, utilizando la amplicación seguida de un análisis polimórfico de restricción (PRA) de un segmento del gen hsp65, éstos pudieron ser identificados como M. porcinum, M. vaccae y M. gordonae tipo II

Caracterización de plásmidos de acinetobacter baumannii en tres centros hospitalarios / Acinetobacter baumannii plasmids characterization in the hospitalary centers

Acinetobacter baumannii es un importante agente etiológico asociado a infecciones nosocomiales. Los patrones de resistencia a los principales agentes antimicrobianos y el perfil plasmídico fueron analizados en 34 cepas nosocomiales provenientes de tres hospitales del área metropolitana. La mayoría de los aislamientos (50 por ciento) provienen del tracto respiratorio y de la Unidad de Terapia Intensiva. Los porcentajes de resistencia obtenidos revelan la presencia de patrones complejos de resistencia múltiple incluso a los antimicrobianos imipenen, meropenen y ß lactamicos, los cuales son de uso frecuente en el tratamiento de las infecciones causadas por este germen. El perfil plasmídico obtenido sugiere una alta variabilidad. Un plásmido > 23 Kb fue asociado con la resistencia en algunos aislamientos. El análisis del DNA plasmídico es de gran utilidad en la tipificación epidemiológica de las cepas de A. baumannii y puede servir como un sistema complementario a los métodos epidemiológicos tradicionales

[Non conventional diagnostic methods for tuberculosis]. / Métodos de diagnóstico no convencionales para la tuberculosis.

This revision show the advantage and disadvantage of some diagnostic methods for tuberculosis and mycobacterium identification.

[Diagnosis of tuberculosis meningitis by detection of adenosine deaminase activity and amplification of nucleotide sequences with PCR]. / Diagnóstico de meningitis tuberculosa por la determinación de la actividad de adenosina deaminasa y la amplificación de secuencias nucleotídicas por PCR.

Tuberculous meningitis (TBM) is the most severe and lethal form of tuberculosis. The rapid bacteriological diagnosis with the conventional techniques is nearly impossible in TBM. There for many patients are treated with anti-TBC drugs without a definitive diagnosis. A more fast and accurate diagnostic method is necessary, in order to initiate the treatment on time to prevent the irreversible neurologic sequel or death. We evaluated the use of two rapid methods: Adenosine deaminase activity (ADA) and polymerase chain reaction (PCR) for IS6110 and mtp40 sequences on cerebrospinal fluid (CSF) from chronic meningitis patients. For ADA activity > 8.0 U/L the sensibility and specificity was 80% and 91%. PCR sensibility was 80% and specificity 97%. ADA activity and PCR on CSF could be specially useful as complementary tools in the early diagnosis of TBM.

Plasmid-encoded resistance to arsenic compounds in Gram-negative bacteria isolated from a hospital environment in Venezuela.

Resistance to arsenic compounds was examined among amikacin resistant Gram-negative bacteria isolate from a hospital environment. Arsenite resistance (Ars(r)) was found in a high proportion of isolates ( >60%) being frequently associated with resistance to tellurite (40%), and to other antimicrobial agents. Ars determinants (27%) were found to be transferable to E. coli K12 strains from which large plasmid DNA molecules were isolated and characterized by agarose gel electrophoresis. Plasmids were identified by both classical incompatibility tests, and by replicon typing using DNA specific probes. Most of the amikacin-arsenite (Ak-Ars) conjugative plasmids belong to the H incompatibility group. These results suggest that Ak-Ars resistance linked to IncH plasmids is wide spread in Gram-negative bacteria.