Monitoramento sanitário de colônia de camundongos BALB/c mantidos em biotério convencional / Health monitoring of the BALB/c mice colony kept in a conventional animal facility

O objetivo deste estudo foi avaliar o estado sanitário da colônia de camundongos BALB/c e as condições ambientais do Biotério do Instituto Lauro de Souza Lima, através de exames parasitológicos e microbiológicos. Utilizando-se meios de cultura enriquecidos e seletivos, procurou-se identificar agentes potencialmente patogênicos para os animais e zoonóticos, a partir de pele, pelos, trato respiratório e entérico dos animais, além da microbiota fúngica ambiental. Pesquisou-se a presença de Mycoplasma sp. e Bordetella sp. em traqueia e fungos em pele e pelos, além de exames parasitológicos e pesquisa de Salmonella spp. e enterobactérias em amostras de conteúdo do ceco dos animais. Para monitoramento do ambiente, coletaram-se amostras de diferentes locais do interior do biotério. Após macro e microcultivo fúngicos, foram identificados Cladosporium sp., Acremonium sp., Aspergillus sp., Curvularia sp. e Trichophyton mentagrophytes. O exame micológico de pele e pelos resultou negativo para 100% das amostras. Não foi observado crescimento de patógenos respiratórios, nem de Salmonella spp. As bactérias isoladas são constituintes da microbiota entérica normal de animais em condições convencionais: Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Proteus mirabilis, Klebsiella spp., Providencia stuart, Pseudomonas putida. O exame parasitológico demonstrou a presença de Strongyloides stercoralis, Syphacia obvelata, Aspiculuris tetraptera e Ancylostoma sp.. O trabalho realizado demonstrou grande valor diagnóstico, tanto para avaliação da saúde dos animais de laboratório, como para uma análise qualitativa da microbiota fúngica ambiental, devendo ser implantado como rotina no biotério.

The aim of this work was to evaluate the health status and environmental conditions of the colony of BALB/c mice maintained in an Animal Facility of the Lauro de Souza Lima Institute. Parasitological and microbiological tests with enriched and selective culture media were used to identify zoonotic and potentially pathogenic agents from skin, hair, respiratory and enteric tracts of the animals and fungal flora of the environment. This study proposed to verify colonization of Mycoplasma sp. and Bordetella sp. in trachea, fungi in skin and hair, as well as perform parasitological examination, Salmonella spp. and enterobacteria isolation from cecum of sampled animals. In addition serum of animals were tested against different viral and bacterial antigens and against Toxoplasma gondii antigen.For environmental monitoring samples were collected from different locations. After macro and microculture, the fungi identified were Cladosporium sp. Acremonium sp., Aspergillus sp., Curvularia sp. and Trichophyton mentagrophytes. Mycological examination of the skin was negative for 100% of the samples. There was no growth of respiratory pathogens or Salmonella spp. The bacteria isolated in the present study consist of the normal enteric microbiota of animals in conventional conditions: Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Proteus mirabilis, Klebsiella spp. Providencia stuart and Pseudomonas putida. The parasitological examination showed the presence of Strongyloides stercoralis, Syphacia obvelata, Aspiculuris tetraptera and Ancylostoma sp. Serology resulted negative for all tested antigens. The techniques used in this work showed to be valuable for diagnostic purpose, to assess the health of laboratory animals, as well as for qualitative analysis of environmental fungal microbiota, thus it should be implemented as a routine in the animal house.

In vitro and in situ activation of the complement system by the fungus Lacazia loboi.

Since there are no studies evaluating the participation of the complement system (CS) in Jorge Lobo's disease and its activity on the fungus Lacazia loboi, we carried out the present investigation. Fungal cells with a viability index of 48% were obtained from the footpads of BALB/c mice and incubated with a pool of inactivated serum from patients with the mycosis or with sterile saline for 30 min at 37 masculineC. Next, the tubes were incubated for 2 h with a pool of noninactivated AB+ serum, inactivated serum, serum diluted in EGTA-MgCl2, and serum diluted in EDTA. The viability of L. loboi was evaluated and the fungal suspension was cytocentrifuged. The slides were submitted to immunofluorescence staining using human anti-C3 antibody. The results revealed that 98% of the fungi activated the CS by the alternative pathway and no significant difference in L. loboi viability was observed after CS activation. In parallel, frozen histological sections from 11 patients were analyzed regarding the presence of C3 and IgG by immunofluorescence staining. C3 and IgG deposits were observed in the fungal wall of 100% and 91% of the lesions evaluated, respectively. The results suggest that the CS and immunoglobulins may contribute to the defense mechanisms of the host against L. loboi.

In vitro and in situ activation of the complement system by the fungus Lacazia loboi

Since there are no studies evaluating the participation of the complement system (CS) in Jorge Lobo's disease and its activity on the fungus Lacazia loboi, we carried out the present investigation. Fungal cells with a viability index of 48 percent were obtained from the footpads of BALB/c mice and incubated with a pool of inactivated serum from patients with the mycosis or with sterile saline for 30 min at 37 °C. Next, the tubes were incubated for 2 h with a pool of noninactivated AB+ serum, inactivated serum, serum diluted in EGTA-MgCl2, and serum diluted in EDTA. The viability of L. loboi was evaluated and the fungal suspension was cytocentrifuged. The slides were submitted to immunofluorescence staining using human anti-C3 antibody. The results revealed that 98 percent of the fungi activated the CS by the alternative pathway and no significant difference in L. loboi viability was observed after CS activation. In parallel, frozen histological sections from 11 patients were analyzed regarding the presence of C3 and IgG by immunofluorescence staining. C3 and IgG deposits were observed in the fungal wall of 100 percent and 91 percent of the lesions evaluated, respectively. The results suggest that the CS and immunoglobulins may contribute to the defense mechanisms of the host against L. loboi.

Considerando que não existe nenhum estudo avaliando a participação do sistema complemento (SC) na doença de Jorge Lobo e sua atividade sobre o fungo Lacazia loboi, realizamos o presente trabalho. Os fungos foram obtidos dos coxins plantares de camundongos BALB/c com índice de viabilidade de 48 por cento e, em seguida, foram incubados com pool de soro inativado de pacientes ou com solução salina estéril (SSE) por 30 min, a 37 °C. Os tubos foram incubados, por 2 h, com pool de soro AB+ sem inativar, inativado, diluído em EGTA-MgCl2 e EDTA. A viabilidade do L. loboi foi avaliada e a suspensão fúngica foi citocentrifugada. As lâminas foram submetidas à técnica de imunofluorescência empregando o anticorpo anti-C3 humano. Os resultados revelaram que 98 por cento dos fungos ativaram o SC pela via alternativa e que não houve diferença significante na viabilidade do L. loboi após ativação do SC. Em paralelo, cortes histológicos congelados de 11 pacientes foram avaliados quanto à presença de C3 e IgG, pela técnica de imunofluorescência. Foram encontrados depósitos de C3 e de IgG na parede dos fungos em 100 por cento e 91 por cento das lesões avaliadas, respectivamente. Os resultados sugerem que o SC e as imunoglobulinas poderiam contribuir nos mecanismos de defesa do hospedeiro contra o L. loboi.

In vitro and in situ activation of the complement system by the fungus Lacazia loboi / Ativação in vitro e in situ do sistema complemento pelo fungo Lacazia loboi

Since there are no studies evaluating the participation of the complement system (CS) in Jorge Lobo's disease and its activity on the fungus Lacazia loboi, we carried out the present investigation. Fungal cells with a viability index of 48% were obtained from the footpads of BALB/c mice and incubated with a pool of inactivated serum from patients with the mycosis or with sterile saline for 30 min at 37 ºC. Next, the tubes were incubated for 2 h with a pool of noninactivated AB+ serum, inactivated serum, serum diluted in EGTA-MgCl2, and serum diluted in EDTA. The viability of L. loboi was evaluated and the fungal suspension was cytocentrifuged. The slides were submitted to immunofluorescence staining using human anti-C3 antibody. The results revealed that 98% of the fungi activated the CS by the alternative pathway and no significant difference in L. loboi viability was observed after CS activation. In parallel, frozen histological sections from 11 patients were analyzed regarding the presence of C3 and IgG by immunofluorescence staining. C3 and IgG deposits were observed in the fungal wall of 100% and 91% of the lesions evaluated, respectively. The results suggest that the CS and immunoglobulins may contribute to the defense mechanisms of the host against L. loboi

Considerando que não existe nenhum estudo avaliando a participação do sistema complemento (SC) na doença de Jorge Lobo e sua atividade sobre o fungo Lacazia loboi, realizamos o presente trabalho. Os fungos foram obtidos dos coxins plantares de camundongos BALB/c com índice de viabilidade de 48% e, em seguida, foram incubados com pool de soro inativado de pacientes ou com solução salina estéril (SSE) por 30 min, a 37 ºC. Os tubos foram incubados, por 2 h, com pool de soro AB+ sem inativar, inativado, diluído em EGTA-MgCl2 e EDTA. A viabilidade do L. loboi foi avaliada e a suspensão fúngica foi citocentrifugada. As lâminas foram submetidas à técnica de imunofluorescência empregando o anticorpo anti-C3 humano. Os resultados revelaram que 98% dos fungos ativaram o SC pela via alternativa e que não houve diferença significante na viabilidade do L. loboi após ativação do SC. Em paralelo, cortes histológicos congelados de 11 pacientes foram avaliados quanto à presença de C3 e IgG, pela técnica de imunofluorescência. Foram encontrados depósitos de C3 e de IgG na parede dos fungos em 100% e 91% das lesões avaliadas, respectivamente. Os resultados sugerem que o SC e as imunoglobulinas poderiam contribuir nos mecanismos de defesa do hospedeiro contra o L. loboi

Monitoramento sanitário da colônia de camundongos BALB/c no biotério com padrão convencional do ILSL Bauru, SP / Sanitary monitoring of the colony of BALB / c mice in the vivarium with conventional ILSL standard Bauru, SP

A necessidade de trabalhar com modelos animais refinados fez com que a ciência de animais de laboratório se desenvolvesse muito nos últimos anos. Hoje trabalha-se com animais com padrão sanitário e genético conhecidos, levando-se em consideração o bem estar animal e das pessoas em contato com estes. Para garantir a qualidade dos animais utilizados, faz-se necessária à avaliação periódica destes animais. O objetivo deste trabalho, portanto, foi fazer um monitoramento microbiológico e parasitológico da colônia de camundongos BALB/c produzidos no biotério do Instituto Lauro de Souza Lima, em instalações convencionais com barreiras, para verificar as condições de saúde dos animais. Foram sacrificados 21 animais com intervalo de 12 meses para exame micológico de pele, bacteriológico de amostras coletadas de traquéia e ceco utilizando isolamento em meios seletivos específicos. Foi realizado exame parasitológico de amostras do ceco. As bactérias isoladas são constituintes da microbiota normal de animais em condições convencionais Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Proteus mirabilis, Klebsiella spp., Staphylococcus aureus, Streptococcus spp.. Foram observadas amostras positivas para os oxiurídeos Syphacia obvelata e Aspiculuris tetraptera, o que indica que o manejo da colônia deve ser melhorado. Apesar disso, as poucas barreiras estabelecidas têm surtido efeitos positivos no controle de contaminação. Pode-se concluir que a caracterização da microbiota torna mais fácil a identificação de microorganismos para diagnóstico e controle de enfermidades e que o monitoramento sanitário mostrou-se importante para auxiliar na validação de métodos operacionais que visem à obtenção de animais de qualidade para uso na pesquisa científica.