Epigenetic immune cell quantification for diagnostic evaluation and monitoring of patients with inborn errors of immunity and secondary immune deficiencies.

BACKGROUND: Early detection and monitoring of primary immunodeficiencies (PID) in humans require quantitative determination of immune cells from fresh blood analyzed by flow cytometry. However, epigenetic immune cell quantification allows analysis from fresh, frozen, or dried blood samples. We demonstrate the utility of epigenetic immune cell quantification for patients with PID. METHODS: Epigenetic quantification of basic lymphocyte subpopulations of 259 samples from PID patients were compared to flow cytometric data. Epigenetic analysis was extended to T-cell subsets (Treg, Th17, Tfh, PD-1+, CCR6+) and memory B-cells and compared between venous EDTA and dried blood. RESULTS: A high correlation of >0.9 was observed for basic T- and B-cell subsets. Extended epigenetic analysis showed quantitative trends within PID subgroups, but individually these varied substantially within these groups. Epigenetic analysis of dried blood samples was equivalent to EDTA blood. CONCLUSION: Epigenetic immune cell quantification is suitable for immune cell profiling in PID patients.

Sequencing the B Cell Receptor Repertoires of Antibody-Deficient Individuals With and Without Infection Susceptibility.

PURPOSE: Most individuals with antibody deficiency (hypogammaglobulinemia) need immunoglobulin replacement therapy (IgG-RT) from healthy plasma donors to stay clear of infections. However, a small subset of hypogammaglobulinemic patients do not require this substitution therapy. We set out to investigate this clinical conundrum by asking whether the peripheral B cell receptor repertoires differ between antibody-deficient patients who do and do not need IgG-RT. METHODS: We sequenced and analyzed IgG and IgM heavy chain B cell receptor repertoires from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) isolated from patients with low serum IgG concentrations who did or did not require IgG-RT. RESULTS: Compared to the patients who did not need IgG-RT, those who needed IgG-RT had higher numbers of IgG antibody clones, higher IgM diversity, and less oligoclonal IgG and IgM repertoires. The patient cohorts had different heavy chain variable gene usage, and the patients who needed IgG-RT had elevated frequencies of IgG clones with higher germline identity (i.e., fewer somatic hypermutations). CONCLUSION: Antibody-deficient patients with infection susceptibility who needed IgG-RT had more diverse peripheral antibody repertoires that were less diverged from germline and thus may not be as optimal for targeting pathogens, possibly contributing to infection susceptibility.

Validation of the Ischaemia Severity Scale (ISS) Based on Non-Invasive Vascular Assessments (SEWSS) for Predicting Outcomes of Diabetic Foot Attack.

Assessment of ischaemia severity includes a variety of measures, such as pedal pulse palpation, the ankle/brachial index (ABI), and the toe/brachial index (TBI), but there is a lack of consensus regarding which ischaemia scale is the most effective for determining outcome prognosis. The purpose of this study is to validate the application of the ischaemia severity scale (ISS) in the effective prediction of wound healing, amputations, and mortality for diabetic foot wounds (DFW). This prospective study included 235 consecutive patients graded according to the Saint Elian Wound Score System (SEWSS). The ISS is part of this system, with patients being scored as non-ischaemic (0) or having mild (1), moderate (2), or severe (3) ischaemia. Age, diabetes duration in years, and ulcer size were found to be associated with a longer mean ischaemia of increasing severity. A trend of reduction in the pulse palpation rates (70.4%, 50%, 8.5% to 0%; p < 0.01), ABI (1.1 ± 0.1, 0.86 ± 0.3, 0.68 ± 0.2, 0.47 ± 0.2, p < 0.01), TBI average values (0.90 ± 0.35, 0.62 ± 0.52, 0.50 ± 0.33, 0.10 ± 0.42, p < 0.01), wound healing success (88.7%, 57.7%, 40.7%, 12.9%; p < 0.01), and delay in weeks (Kaplan−Meier: log-rank 44.2, p < 0.01) was observed with increasing values of the ISS (0, 1, 2, and 3). The odds ratio for adverse outcomes increased for each additional level of ischaemia severity. Thus, we demonstrate that the ISS is useful in effectively predicting adverse outcomes for DFW.

Multi-omics analysis of naïve B cells of patients harboring the C104R mutation in TACI.

Common variable immunodeficiency (CVID) is the most prevalent form of symptomatic primary immunodeficiency in humans. The genetic cause of CVID is still unknown in about 70% of cases. Ten percent of CVID patients carry heterozygous mutations in the tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B gene (TNFRSF13B), encoding TACI. Mutations in TNFRSF13B alone may not be sufficient for the development of CVID, as 1% of the healthy population carry these mutations. The common hypothesis is that TACI mutations are not fully penetrant and additional factors contribute to the development of CVID. To determine these additional factors, we investigated the perturbations of transcription factor (TF) binding and the transcriptome profiles in unstimulated and CD40L/IL21-stimulated naïve B cells from CVID patients harboring the C104R mutation in TNFRSF13B and compared them to their healthy relatives with the same mutation. In addition, the proteome of stimulated naïve B cells was investigated. For functional validation, intracellular protein concentrations were measured by flow cytometry. Our analysis revealed 8% less accessible chromatin in unstimulated naïve B cells and 25% less accessible chromatin in class-switched memory B cells from affected and unaffected TACI mutation carriers compared to healthy donors. The most enriched TF binding motifs in TACI mutation carriers involved members from the ETS, IRF, and NF-κB TF families. Validation experiments supported dysregulation of the NF-κB and MAPK pathways. In steady state, naïve B cells had increased cell death pathways and reduced cell metabolism pathways, while after stimulation, enhanced immune responses and decreased cell survival were detected. Using a multi-omics approach, our findings provide valuable insights into the impaired biology of naïve B cells from TACI mutation carriers.

BAFFR activates PI3K/AKT signaling in human naive but not in switched memory B cells through direct interactions with B cell antigen receptors.

Binding of BAFF to BAFFR activates in mature B cells PI3K/AKT signaling regulating protein synthesis, metabolic fitness, and survival. In humans, naive and memory B cells express the same levels of BAFFR, but only memory B cells seem to survive without BAFF. Here, we show that BAFF activates PI3K/AKT only in naive B cells and changes the expression of genes regulating migration, proliferation, growth, and survival. BAFF-induced PI3K/AKT activation requires direct interactions between BAFFR and the B cell antigen receptor (BCR) components CD79A and CD79B and is enhanced by the AKT coactivator TCL1A. Compared to memory B cells, naive B cells express more surface BCRs, which interact better with BAFFR than IgG or IgA, thus allowing stronger responses to BAFF. As ablation of BAFFR in naive and memory B cells causes cell death independent of BAFF-induced signaling, BAFFR seems to act also as an intrinsic factor for B cell survival.

The latin american Saint Elian wound score system (sewss) for the triage of the diabetic foot attack.

To review the global and regional contributions of the Saint Elian Wound Score System (SEWSS) for the diabetic foot syndrome are the aim of this report. The update includes definitions, classification, diagnosis, treatment, prognosis, and prevention to reduce amputations and mortality. From its local use in Mexico to their global spread as part of the Clinical Practice Recommendations of the Diabetic Foot - International Diabetes Federation-2017, the SEWSS has achieved a significant acceptance for the diabetic foot problem care in Latin America. The concept includes the triage of severity grades system for the five types of Diabetic Foot Attack (DFA) due to ischemia, infection, edema, neuropathy (Charcot), or a mixed combination. Persons with Diabetes Mellitus may progress from the low-risk stage to foot attack that may remite to a high risk stage or conversely, evolve to a major amputation or death. The DFA progressive stages (I-III) are described in this review. The clinical details provided by the assessment of the 10 Saint Elian factors permit a rationale therapeutic approach with relevance in prevention and medical treatment and not focused only on wound care avoiding bias originated by specialty-related preferences.

El propósito de este informe es revisar las contribuciones regionales y mundiales del Sistema de San Elian para el Síndrome del Pie Diabético. Esta actualización incluye definiciones, clasificación, diagnóstico, pronóstico, tratamiento y prevención para reducir las amputaciones y su mortalidad. Desde su aplicación local en Mexico hasta su difusión mundial como parte fundamental de las Recomendaciones de Práctica Clínica del Pie Diabético- Federación Internacional de Diabetes 2017, el sistema ha alcanzado una aceptación significativa para la atención del Pie Diabético en Latinoamérica. El concepto incluye el triage urgente por la diferenciación de la gravedad que proporciona el sistema para los cinco tipos de Ataque Del Pie Diabético (APD): isquemico, infeccioso, edema grave, neuropatia (Charcot) y el mixto. Los pacientes con DM-2 pueden evolucionar desde un pie con bajo riesgo hasta un APD que logre remitir a una etapa de riesgo alto o que finalmente evolucione a amputacion mayor y/o muerte. Se describen las etapas evolutivas (I-III). La detallada evaluación que proporciona los 10 factores de San Elian permiten un abordaje terapéutico racional con relevancia en la prevención y el tratamiento médico sin centrarse erróneamente en el cuidado de heridas.

There is no gene for CVID - novel monogenetic causes for primary antibody deficiency.

'There is no gene for fate' (citation from the movie 'GATTACA') - and there is no gene for CVID. Common Variable ImmunoDeficiency (CVID) is the most prevalent primary immunodeficiency in humans. CVID is characterized by an increased susceptibility to infections, hypogammaglobulinemia, reduced switched memory B cell numbers in peripheral blood and a defective response to vaccination, often complicated by autoimmune and autoinflammatory conditions. However, as soon as a genetic diagnosis has been made in a patient with CVID, the diagnosis must be changed to the respective genetic cause (www.esid.org). Therefore, there are genetic causes for primary antibody deficiencies, but not for CVID. Primary antibody deficiencies (PADs) are a heterogeneous group of disorders. Several attempts have been made to gain further insights into the pathogenesis of PAD, using unbiased approaches such as whole exome or genome sequencing. Today, in just about 35% of cases with PAD, monogenic mutations (including those in the gene TNFRSF13B) can be identified in a set of 68 genes [1•]. These mutations occur either sporadically or are inherited and do explain an often complex phenotype. In our review, we not only discuss gene defects identified in PAD patients previously diagnosed with CVID and/or CVID-like disorders such as IKZF1, CTNNBL1, TNFSF13 and BACH2, but also genetic defects which were initially described in non-CVID patients but have later also been observed in patients with PAD such as PLCG2, PIK3CG, PMS2, RNF31, KMT2D, STAT3. We also included interesting genetic defects in which the pathophysiology suggests a close relation to other known defects of the adaptive immune response, such as DEF6, SAMD9 and SAMD9L, and hence a CVID-like phenotype may be observed in the future. However, alternative mechanisms most likely add to the development of an antibody-deficient phenotype, such as polygenic origins, epigenetic changes, and/or environmental factors.

Resident macrophages acquire innate immune memory in staphylococcal skin infection.

Staphylococcus aureus (S. aureus) is a common colonizer of healthy skin and mucous membranes. At the same time, S. aureus is the most frequent cause of skin and soft tissue infections. Dermal macrophages (Mφ) are critical for the coordinated defense against invading S. aureus, yet they have a limited life span with replacement by bone marrow derived monocytes. It is currently poorly understood whether localized S. aureus skin infections persistently alter the resident Mφ subset composition and resistance to a subsequent infection. In a strictly dermal infection model we found that mice, which were previously infected with S. aureus, showed faster monocyte recruitment, increased bacterial killing and improved healing upon a secondary infection. However, skin infection decreased Mφ half-life, thereby limiting the duration of memory. In summary, resident dermal Mφ are programmed locally, independently of bone marrow-derived monocytes during staphylococcal skin infection leading to transiently increased resistance against a second infection.

Dynamics in protein translation sustaining T cell preparedness.

In response to pathogenic threats, naive T cells rapidly transition from a quiescent to an activated state, yet the underlying mechanisms are incompletely understood. Using a pulsed SILAC approach, we investigated the dynamics of mRNA translation kinetics and protein turnover in human naive and activated T cells. Our datasets uncovered that transcription factors maintaining T cell quiescence had constitutively high turnover, which facilitated their depletion following activation. Furthermore, naive T cells maintained a surprisingly large number of idling ribosomes as well as 242 repressed mRNA species and a reservoir of glycolytic enzymes. These components were rapidly engaged following stimulation, promoting an immediate translational and glycolytic switch to ramp up the T cell activation program. Our data elucidate new insights into how T cells maintain a prepared state to mount a rapid immune response, and provide a resource of protein turnover, absolute translation kinetics and protein synthesis rates in T cells ( https://www.immunomics.ch ).

Enfermedad arterial periferica oclusiva / Peripheral arterial occlusive disease

La enfermedad arterial periférica oclusiva, causada principalmente por la aterosclerosis, tiene una elevada morbilidad, en especial en el anciano. Su manifestación clínica principal, en su etapa temprana, es la claudicación intermitente. En esta revisión se analizan los aspectos más importantes para el estudio y manejo de la claudicación intermitente, que incluye datos epidemiológicos, factores de riesgo (tabaquismo, hipertensión arterial, diabetes mellitus, hiperlipidemia, obesidad, sedentarismo, niveles elevados de fibrinógeno y de homocisteína), historia natural, cuadro clínico, métodos diagnósticos, diagnóstico diferencial, tratamientos dirigidos a modificar los factores de riesgo (programa de ejercicios y terapia farmacológica) y manejos quirúrgicos (endovascular o cirugía de revascularización) que mejoren la calidad de vida y conserven la integridad del miembro afectado.

Factores de crecimiento en el tratamiento de úlceras en pacientes diabéticos. Mitos y realidades / Growth factors in treatment of foot ulcers in diabetic patients. Myths and realities

Las úlceras neuropáticas de los pies en los pacientes diabéticos se pueden presentar hasta en 10 por ciento de ellos y tienen una recurrencia a cinco años del 70 por ciento. La infección, isquemia y trauma repetido pueden contribuir al desarrollo de úlceras crónicas en este grupo de pacientes que además presentan como característica alteraciones en los procesos básicos de la cicatrización. Una de estas alteraciones es la disminución de factores de crecimiento de las úlceras crónicas. Se han identificado diversos factores de crecimiento en la reparación de tejidos entre los cuales se encuentra el factor de crecimiento epidérmico, factor de crecimiento transformante beta, factor de crecimiento de fibroblastos, factor de crecimiento derivado de plaquetas y el factor de crecimiento tipo insulina. Estos factores se han estudiado en úlceras de pacientes diabéticos de diferentes etiologías, sin embargo, los mejores resultados han sido observados en úlceras neuropáticas.Algunos de estos como el factor de crecimiento derivado de plaquetas ha sido estudiado incluso en ensayos clínicos fase III y aceptados por la FDA para su aplicación clínica en este tipo de padecimientos. Otros como el factor de crecimiento epidermoide ha demostrado ser útil o incluso superior a otros, sin embargo, aún son pocos los estudios clínicos controlados que demuestran lo anterior. El uso de factores de crecimiento en las úlceras neuropáticas y crónicas de diabéticos es una alternativa más en el manejo de esta compleja patología.

Anatomía vascular patológica / Vascular pathologic anatomy

La enfermedad vascular periférica es una de las manifestaciones de la enfermedad generalizada denominada ateroesclerosis. Esta enfermedad es la principal causa de infarto cardiaco, evento cerebral y gangrena de las extremidades, y es la responsable de casi 50 por ciento de todas las muertes en el mundo occidental. Los primeros síntomas de la enfermedad arterial obstructiva se desarrollan generalmente cuando existe un estrechamiento del 50 por ciento de la luz vascular. Dos Santos estableció que la cirugía vascular reconstructiva "es la cirugía de ruinas", este concepto explica el éxito de la cirugía vascular en la enfermedad aterosclerosa del segmento femoropoplíteo y distal.

Aneurisma de aorta abdominal roto y contenido a cavidad peritoneal / Rupture abdominal aortic aneurysm restrained in peritoneal cavity

El aneurisma de aorta abdominal roto se asocia con un alto índice de mortalidad reportándose entre 15 por ciento hasta 80 por ciento de los casos. Presentamos el caso de una paciente de 80 años de edad con un aneurisma de aorta abdominal roto y contenido a la cavidad peritoneal presentando tres síntomas relevantes a su ingreso a urgencias: tumoración abdominal pulsátil, dolor abdominal súbito e hipotensión, caracterizada por lipotimia y diaforesis profusa, se documenta con radiografía y tomografía computarizada de abdomen, ya que permaneció hemodinámicamente estable en urgencias. El curso postoperatorio fue satisfactorio. Conclusiones: El síndrome de abdomen agudo tiene como diagnóstico diferencial el aneurisma de aorta abdominal roto y por lo tanto, el cirujano general en las unidades de urgencias debe tener el suficiente criterio para poder diferenciar las modalidades clínicas de cómo se presenta esta patología en especial.

Complicaciones asociadas al uso del balón intraaórtico de contrapulsación / Complications associated with use of intra-aortic counterpulsation ballon pump

Introducción. Desde 1967 Kantrowitz introdujo el balón intraaórtico de contrapulsación (BIACP) para su uso clínico. Objetivo. Evaluar la incidencia y tipo de complicaciones en pacientes sometidos a revascularización aortocoronaria, analizando la técnica quirúrgica a través del agujero obturador y reportar el primer caso en México de paraplejía secundaria al uso de BIACP. Material y métodos. Sesenta pacientes ameritaron el uso del BIACP, reportando 3 pacientes complicados: dos desarrollaron seudoaneurismas, isquemia crítica de la extremidad e infección, el otro presentó infección, síndrome compartamental e isquemia asociada a paraplejía irreversible. Las tres casos se manejaron con una derivación extranatómica a través de agujero obturador. Resultados. Dos pacientes salvaron su extremidad y el tercero ameritó una amputación supracondílea secundaria al proceso neurisquémico, representando el 5 por ciento. Conclusiones: La enfermedad coronaria se asocia en 67 por ciento a enfermedad vascular periférica, proponemos una evaluación estricta y rutinaria en todos los pacientes con cardiopatía isquémica que van a ser revascularizados. Las derivaciones vasculares extraanatómicas son una buena alternativa, individualizando cada paso

Evaluación de la prótesis de poliuretano como acceso vascular en pacientes con insuficiencia renal crónica / Poliuretano graft: evaluation like vascular access in chronic renal failure patients

Introducción: Los pacientes con insuficiencia renal crónica que se encuentran en programas de hemodiálisis requieren un acceso vascular permeable a largo plazo. Objetivo: Evaluar la prótesis de poliuretano ®THORATEC¼ como alternativa en pacientes de difícil acceso vascular para hemodiálisis. Material y métodos: De enero de 1994 al 31 de mayo de 1997, se realizaron 20 fístulas arteriovenosas internas con prótesis de poliuretano en 16 pacientes como última alternativa. Diez del sexo femenino y seis masculinos, con una media de 49.5 años. La evaluación preoperatoria fue maniobra de Allen, del torniquete, llenado capilar y temperatura de la extremidad. Se realizó registró Doppler continuo pulsado en todos los casos. La técnica operatoria varió de acuerdo al sitio anatómico, siendo el más frecuente al antebrazo izquierdo, se usaron miembros inferiores como último recurso. Resultados: Se colocaron 20 fístulas arteriovenosas internas en forma de asa con prótesis de poliuretano, 18 con diámetro de 6 mm y dos de 5 mm; la punción temprana fue en los primeros 7 días con un promedio de 72 horas postquirúrgicas, se realizaron de 8 a 12 sesiones mensuales de hemodiálisis, obteniéndose flujos superiores de 300 mL/min, permitiendo llevar a cabo la hemodiálisis en un tiempo promedio de 4 horas. El manejo profiláctico con antimicrobianos fue selectivo contra estafilococos y bacterias gram negativoas. Los índices de permeabilidad fueron: edema de la mano, equimosis postpunción, infección y atrapamiento nervioso. Siete pacientes murieron en el curso del seguimiento por la evolución natural de su enfermedad. Conclusión: La prótesis de poliuretano es un material no absorbible, con un costo accesible y permeabilidad aceptable a mediano plazo

Complicaciones vasculares en cateterismos cardiacos / The vascular complications following cardiac catheterizations

El trauma vascular y sus complicaciones por cateterismos cardiacos, tienen una incidencia variable, de acuerdo a la experiencia de cada centro hospitalario, que varía del 0.2 al 3 por ciento. El objetivo del trabajo es conocer la incidencia y características de estas complicaciones en el Centro Médico Nacional 20 de Noviembre del ISSSTE. Se realizaron en un periodo de 33 meses, 2,308 cateterismos cardiacos, el 81.2 por ciento por enfermedad coronaria, el 11.6 por ciento por enfermedad valvular cardiaca y se realizaron en un periodo de 33 meses, 2,308 cateterismos cardiacos, en 81.2 por ciento por enfermedad coronaria, el 11.6 por ciento por enfermedad valvular cardiaca y el 7.2 por ciento por cardiopatía congénita. Veintiséis lesiones vasculares fueron detectadas con una incidencia de 1.1 por ciento; once pacientes se manejaron conservadoramante y 15 fueron operados; la indicación quirúrgica más frecuente fue le hematoma expansivo en cinco pacientes, que se resolvió con trombectomía y arteriorrafia simple, lesión de arterias coronarias en cinco casos que se trataron con revascularización coronaria, amenaza de pérdida de extremidad en tres enfermos, que se sometieron a trombectomía y fasciotomía, un paciente presentó migración de férula endovascular coronaria a la arteria femoral común derecha y en otro paciente se presentó pseudoaneurisma de arteria humeral derecha que se reparó con interposición de segmento de vena safena autóloga. Los sitios de lesión en ocho pacientes fueron la arteria femoral común, cinco pacientes con lesión de arterias coronarias, otro caso con lesión de arteria femoral superficial y otro enfermo con lesión de arteria humeral derecha. El porcentaje más alto de complicaciones en los procedimientos realizados fue la angioplastia coronaria en 14 pacientes (4.3 por ciento). La morbilidad se presentó en tres pacientes con infección superficial de la herida en la región inguinal. No hubo mortalidad perioperatoria. Conclusión: Los mecanismos de lesión y las complicaciones están en relación directa a la vías de abordaje. El tiempo prolongado del procedimiento y la inadecuada heparinización sistémica, son factores directamante relacionados con complicaciones vasculares tempranas. La detección y el manejo quirúrgico temprano son determinantes para disminuir la morbimortalidad

Aneurismas de arteria renal. Reporte de un caso / Renal artery aneurysm. One case report

Se ha estimado que los aneurismas de arteria renal representan el 22 por ciento de todos los aneurismas viscerales, sin embargo a nivel de población general su incidencia varía del 0.3 al 1 por ciento. El 20 por ciento puede ser bilateral; y del 55 al 75 por ciento cursan con hipertención arterial secundaria a estenosis renal segmentaria coexistente o a compresión extrínseca provocada por el mismo aneurisma. Se trata de femenino de 41 años de edad, hipertensa de cinco años de evolución de difícil control con manejo médico, con fenómeno de Raynaud incompleto asociado de predominio en extremidades superiores. Perfíl inmunológico completo negativo, gammagrama renal y urografía excretora normal. Se realizó angiografía por sustracción digitálica reportando aneurisma de arteria renal derecha tipo sacular no calcificado de 2.5 x 3.5 cm. Se realizó determinación de reninas con reporte anormal. Se decidió manejo quirúrgico con abordaje transabdominal con incisión transversa con maniobra de Kocher ampliada, resección directa del saco aneurismático y reconstrucción realizando plastia con vena safena autóloga, con sutura continua de monofilamento 7/0 y magnificación óptica del campo a 3x. No hubo complicaciones transoperatorias, y la presión arterial se normalizó. Se realizó Dúplex de control a la semana de postoperatorio con índice de resistencia de .87 en arteria renal y de .57 en vena renal con velocidad de flujo normal. No se apreciaron trastornos estructurales residuales, y el seguimiento actualmente a 6 meses es clínicamente satisfactoria. Conclusión: Los aneurismas de arteria renal son raros, pueden presentar complicaciones graves y cuando se asocian a hipertensión arterial esencial o renovascular, su manejo quirúrgico es factible hacerlo de forma primaria con buenos resultados