Usefulness of FC-TRIPLEX Chagas/Leish IgG1 as confirmatory assay for non-negative results in blood bank screening of Chagas disease.

A relevant issue in Chagas disease serological diagnosis regards the requirement of using several confirmatory methods to elucidate the status of non-negative results from blood bank screening. The development of a single reliable method may potentially contribute to distinguish true and false positive results. Our aim was to evaluate the performance of the multiplexed flow-cytometry anti-T. cruzi/Leishmania IgG1 serology/(FC-TRIPLEX Chagas/Leish IgG1) with three conventional confirmatory criteria (ELISA-EIA, Immunofluorescence assay-IIF and EIA/IIF consensus criterion) to define the final status of samples with actual/previous non-negative results during anti-T. cruzi ELISA-screening in blood banks. Apart from inconclusive results, the FC-TRIPLEX presented a weak agreement index with EIA, while a strong agreement was observed when either IIF or EIA/IIF consensus criteria were applied. Discriminant analysis and Spearman's correlation further corroborates the agreement scores. ROC curve analysis showed that FC-TRIPLEX performance indexes were higher when IIF and EIA/IIF consensus were used as a confirmatory criterion. Logistic regression analysis further demonstrated that the probability of FC-TRIPLEX to yield positive results was higher for inconclusive results from IIF and EIA/IIF consensus. Machine learning tools illustrated the high level of categorical agreement between FC-TRIPLEX versus IIF or EIA/IIF consensus. Together, these findings demonstrated the usefulness of FC-TRIPLEX as a tool to elucidate the status of non-negative results in blood bank screening of Chagas disease.

Avaliação do método confirmatório FC-TRIPLEX-IgG1 no esclarecimento diagnóstico e na monitoração sorológica para doença de Chagas em bancos de sangue

A triagem sorológica para doença de Chagas em bancos de sangue, obrigatória no Brasil desde 1969, aliada ao desenvolvimento de métodos para detecção de anticorpos anti-T.cruzi cada vez mais sensíveis, permitiram a diminuição da transmissão transfusional desta doença.No entanto, os resultados não negativos (positivos ou indeterminados/inconclusivos) e a discordância entre testes aumentaram consideravelmente, passando a representar um grande desafio para os hemocentros. Outro desafio está relacionado à reinclusão de indivíduos não negativos em triagens prévias como potenciais doadores. Resultados falso-positivos e inconclusivos promovem o descarte desnecessário de bolsas de sangue, além de rotular pessoas saudáveis como portadoras de uma doença grave. Assim, verifica-se a necessidade de desenvolver métodos capazes de distinguir com segurança resultados positivos verdadeiros dos falsos, além de resolver os resultados indeterminados. Neste contexto, o FC-TRIPLEXIgG1 se apresenta como um método confirmatório inovador para o diagnóstico diferencial da doença de Chagas, leishmaniose visceral e leishmaniose tegumentar em plataforma única,utilizando citometria de fluxo.

O objetivo deste estudo foi verificar o desempenho desta nova metodologia para o esclarecimento diagnóstico de amostras não negativas (n=91) e para o monitoramento sorológico de indivíduos com antecedente de não negatividade (n=100) na triagem para doença de Chagas realizada em três grandes hemocentros brasileiros. Para isto,as amostras foram triadas com os métodos ELISA (I e II) e RIFI e, em seguida, foram realizados os métodos confirmatórios recELISA e FC-TRIPLEX-IgG1. Os resultados mostraram alta discordância entre os testes de triagem (78,0%), além de grande número de reações indeterminadas. Nas amostras positivas em todos os testes de triagem, o FCTRIPLEX-IgG1e o recELISA apresentaram desempenho semelhante na confirmação dos resultados. Porém, o desempenho dos métodos no esclarecimento diagnóstico das amostras discordantes foi diferente (p=0,001). O FC-TRIPLEX-IgG1 foi positivo em muitas amostras positivas no ELISA-I e indeterminadas na RIFI, sugerindo sua aplicabilidade na confirmaçãode resultados e no esclarecimento diagnóstico de amostras não negativas. Já o recELISA foi positivo em muitas amostras negativas nos outros testes, o que mostrou sua baixa especificidade neste estudo. O teste de maior concordância com o FC-TRIPLEX-IgG1 foi aRIFI (k=0,5), seguida do ELISA-I (k=0,5), recELISA (k=0,2) e ELISA-II (k=0,2). O FCTRIPLEX-IgG1 foi capaz de realizar o diagnóstico diferencial e também se mostrou útil na monitoração sorológica de indivíduos com antecedente de não negatividade na triagem para doença de Chagas, com 98,0% de concordância em amostras ELISA-RIFI- e 94,0% de concordância em amostras ELISA+RIFI+.

Os resultados deste estudo sugerem que o FC TRIPLEX-IgG1 é uma ferramenta promissora, de alta especificidade e desempenho, que pode ser aplicada em hemocentros para auxiliar no esclarecimento diagnóstico de resultados indeterminados/inconclusivos na triagem sorológica para doença de Chagas e na monitoração sorológica periódica de indivíduos com precedente de não negatividade, visando sua exclusão ou reinclusão como possível doador.

Avaliação do método confirmatório FC-TRIPLEX-IgG1 no esclarecimento diagnóstico e na monitoração sorológica para doença de Chagas em bancos de sangue / Method evaluation confirmatory FC-TRIPLEX-IgG1 in the diagnosis clarification and serological monitoring for Chagas disease in blood banks

A triagem sorológica para doença de Chagas em bancos de sangue, obrigatória no Brasil desde 1969, aliada ao desenvolvimento de métodos para detecção de anticorpos anti-T.cruzi cada vez mais sensíveis, permitiram a diminuição da transmissão transfusional desta doença.No entanto, os resultados não negativos (positivos ou indeterminados/inconclusivos) e a discordância entre testes aumentaram consideravelmente, passando a representar um grande desafio para os hemocentros. Outro desafio está relacionado à reinclusão de indivíduos não negativos em triagens prévias como potenciais doadores. Resultados falso-positivos e inconclusivos promovem o descarte desnecessário de bolsas de sangue, além de rotular pessoas saudáveis como portadoras de uma doença grave. Assim, verifica-se a necessidade de desenvolver métodos capazes de distinguir com segurança resultados positivos verdadeiros dos falsos, além de resolver os resultados indeterminados. Neste contexto, o FC-TRIPLEXIgG1 se apresenta como um método confirmatório inovador para o diagnóstico diferencial da doença de Chagas, leishmaniose visceral e leishmaniose tegumentar em plataforma única,utilizando citometria de fluxo...