Células madre adiposas humanas disminuyen el daño de la fibrosis hepática con baja persistencia de células trasplantadas en ratas / Human adipose stem cells decrease liver fibrosis damage with low persistence of transplanted cells in rats

RESUMEN: En la enfermedad hepática crónica el trasplante ortotópico es la única alternativa terapéutica actual pero es limitada por falta de donantes. Ensayos con células madre adultas en daño hepático agudo evidencian promisorios resultados. El objetivo de este trabajo fue evaluar en ratas con daño hepático crónico la efectividad de la infusión de células madre adiposas humanas (CMAd-h). Ratas con fibrosis hepática inducida por tioacetamida fueron agrupadas en: grupo I control que no recibió tioacetamida ni células madre, grupo II recibió tioacetamida y suero fisiológico i.v., grupo III recibió tioacetamida y células madre adiposas 1 x 106/kg i.v. vía vena de la cola. La regeneración hepática histológica se evaluó por el index METAVIR, mientras las Macrophagocytus stellatus, células estrelladas a- SMA+ y células colágeno I+ por inmunohistoquímica; el daño funcional se evaluó por los niveles sanguíneos de los analitos Aspartato Aminotransferasa (AST), Alanina Aminotransferasa (ALT), Fosfatasa Alcalina (ALP), úrea y nitrógeno ureico (BUN) y hemograma. Los resultados muestran atenuación del daño estructural hepático evidenciado por disminución de los nódulos, del grado de lesión histológica en el score Metavir, y disminución de Macrophagocytus stellatus, células a-SMA+ y células colágeno tipo I+; funcionalmente hay reducción moderada de AST, ALT, urea, BUN y disminución moderada de células blancas pero efecto favorable sobre el volumen corpuscular media y la hemoglobina corpuscular media. Ocho semanas después de la infusión hay escasa población de CMAd-h en el hígado. En conclusión la infusión intravenosa de CMAd-h en ratas disminuye el daño funcional y estructural de la fibrosis hepática con escasa persistencia de CMAd-h en el parénquima hepático. A nuestro conocimiento este es el primer trabajo que evalúa el efecto de las CMAd-h en el modelo daño hepático crónico murino y la persistencia de las células trasplantadas.

SUMMARY: In chronic liver disease, orthotopic transplantation is the only current therapeutic alternative but it is limited due to lack of donors. Trials with adult stem cells in acute liver damage show promising results. The aim of this work was to evaluate the effectiveness of human adipose stem cell (h-ASC) infusion in rats with chronic liver damage. Rats with thioacetamide- induced liver fibrosis were grouped into: group I control that did not receive thioacetamide and h-ASC, group II received thioacetamide and saline i.v., group III received thioacetamide and h-ASC 1 x 106/ kg i.v. via tail vein. Histological liver regeneration was evaluated by METAVIR index, while Macrophagocytus stellatus (Kupffer cells), stellate cells a-SMA+ and collagen I+ cells by immunohistochemistry; functional damage was evaluated by blood levels of the analytes Aspartate Aminotransferase (AST), Alanine Aminotransferase (ALT), Alkaline Phosphatase (ALP), Urea and Blood Urea Nitrogen (BUN) and hemogram. The results show attenuation of structural liver damage evidenced by decreased nodules, degree of histologic injury on Metavir score, and decreased Macrophagocytus stellatus, a-SMA+ cells and type I+ collagen cells; functionally there is moderate reduction of AST, ALT, urea, BUN and moderate decrease of white cells but favorable effect on mean corpuscular volume and mean corpuscular hemoglobin. Eight weeks after infusion there is a small population of h-ASC in the liver. In conclusion, intravenous infusion of h-ASC in rats reduces functional and structural damage of hepatic fibrosis with low persistence of h- ASC in the liver parenchyma. To our knowledge this is the first work that evaluates the effect of h-SC in the model of chronic murine liver damage and the persistence of transplanted cells.

Ultraestructura del inmunofenotipo CD44+/CD24- de una línea de células de cáncer de mama triple negativo / Ultrastructure of the CD44 + / CD24- immunophenotype of a line of triple negative breast cancer cells

RESUMEN: El cáncer de mama es la principal causa de muerte debido al cáncer en mujeres. La microscopía electrónica permite establecer características constitutivas de las células entre diferentes poblaciones celulares. Las células madre del cáncer mamario con inmunofenotipo CD44alta/CD24baja son una población de células intratumorales asociada a la quimioresistencia y metástasis, cuya ultraestructura aún no ha sido bien estudiada. El objetivo de este trabajo fue conocer características ultraestructurales de células con fenotipo de células madre del cáncer de la línea celular MDA-MB-436 de tumor mamario triple negativo comparándolas con células madre adiposas. Se utilizó microscopía electrónica de barrido y de transmisión. Previamente, mediante separación inmunomagnética positiva empleando anticuerpos anti CD44 y anti CD24 unidos a perlas magnéticas, se obtuvo una población de células con fenotipo CD44alta/CD24baja a partir de 10x106 células de la línea MDA-MB-436, la cual igual que las células madre adiposas fue cultivada en cubreobjetos para microscopía electrónica de barrido; en tanto que para microscopía electrónica de transmisión se obtuvo un pellet de células, luego se fijó con glutaraldehído al 2,5 % y post fijó con OsO4 1 %. Para microscopía óptica de alta resolución se usó azul de toluidina como tinción. Luego de obtener el fenotipo de células madre del cáncer se corroboró su pluripotencia detectando la expresión de los genes Oct4 y nanog mediante RT-PCR. Nuestros resultados muestran que las células de este fenotipo son pequeñas, redondeadas, recubiertas por microvellosidades abundantes pero cortas; el citoplasma tiene organelas de secreción celular y abundantes mitocondrias alargadas; el núcleo es excéntrico ocupando la mitad del volumen celular, el nucléolo es voluminoso y la heterocromatina está adosada a la membrana nuclear interna. Se concluye que el inmunofenotipo celular estudiado es una sub población celular dentro de la línea estudiada que difiere en tamaño y ultraestructura de las células madre adiposas.

SUMMARY: Breast cancer is the leading cause of cancer deaths in women. Electron microscopy allows establishing constitutive characteristics of cells between different cell populations. CD44 high / CD24 low mammary cancer stem cells are a population of intratumoral cells associated with chemoresistance and metastasis, whose ultrastructure has not yet been well studied. The objective of this work was to know the ultrastructural characteristics of cells with cancer stem cell phenotype, of the triple negative mammary tumor cell line MDAMB-436 436 using scanning and transmission electron microscopy, and to contrast them with adipose-derived mesenchymal stem cells. Previously, by immunomagnetic purification using anti CD44 and anti CD24 antibodies bound to magnetic beads, cells populations was obtained from 10x106 cells of the MDA-MB-436 line, which, adipose-derived mesenchymal stem whereas cultivated on coverslips for scanning electron microscopy; while for transmission electron microscopy a cell pellet was obtained, then fixed with 2.5 % glutaraldehyde and post fixed with OsO4 1 %. For high resolution optical microscopy, toluidine blue was used as staining. After obtaining the phenotype of cancer stem cells, their pluripotency was corroborated by detecting the expression of the Oct4 and nanog genes by RT-PCR. Our results show that the cells of this phenotype are small, rounded, covered by abundant but short microvilli; the cytoplasm has organelles of cellular secretion and abundant elongated mitochondria; the nucleus is eccentric occupying half of the cellular volume, the nucleolus is bulky and the heterochromatin is attached to the inner nuclear membrane. It is concluded that the cellular immunophenotype studied is a sub-cellular population within the line studied that differs in size and ultrastructure of the adipose stem cells.

Estudio comparativo de la glibenclamida, clorpropamida y metfomina como hipogliomiantes orales y el extacto acuoso de las hojas de Smallanthus sunchiolius / Comparative study of glibenclamide, chlorpropamide and metfomina as oral and extact hipogliomiantes aqueous Smallanthus the hoas of sunchiolius

Se realizó la evaluación comparativa de tres fármacos de síntesis utilizados como hipoglicemiantes orales con el extracto acuoso obtenido por infusión de las hojas de Smallanthus sochifolius (Poepp) Rob. "yacón", utilizando un biomodelo experimental por hiperglicemia en ratas nomoglucémicas de la especie Rattus norvegicus var. Albina. El objetivo de la investigación fue observa el efecto de extracto acuoso al 10 por ciento de las hojas de "yacon" en el descenso de la glicemia frente a la glibenclamida, clorpropamida y metformina, que tienen amplio uso en el tratamiento de la diabetes mellitus tipo 2 (DM2). El material vegetal fue colectado en el disco se realizó con 36 ratas albinas hembras, cepa Holtzman con un peso promedio de 240 g, que estuvieron sometidas a una alimentación controlada y agua ad libitum, hasta el momento de experimento. Se determinó la curva de tolerancia a la glucosa y la administración de las drogas se hizo por vía intragástrica. Los resultados obtenidos muestran un descenso significativo de glicemia con el extracto acuoso utilizado. Con la aplicación del extracto y los fármacos en e biomodelo experimenta, se concluye que las hojas de yacón producen en efecto de disminución significa de glicemia.

It was carried out the comparative evaluation of three synthetic drugs used as oral hypoglycemiants, against the aqueous obtained by infusion of leaves from Smallathus sonchifolius (Popp) Rob. Yacon, using a experimental biomodel by hypoglycemia in normogycemic rats of species Rattus norvegicus var. Albine. The object of the research was to observe the 10 per cent aqueous extract effect of Smallanthus sonchifolius (Poepp) Rob. Yacon in the decay of glycemia against glibenclamide, clorprofamide and metformine drugs that have great usage in the treatment of type 2 diabets mellitus (DM2). The vegetal material vas collected in the Huancbamba district, province of Oxapampa in Cerro de Pasco department. The pharmacological assay was taken with 36 female albine rats of Holtzman strain, with a average weight of 240 g that were fed by a controlled food and water ad libitum until the moment od experiment. Is was determined the glucose tolerance curve and the administration of drugs was made by intragastric via. The obtained results show a significant decay of glycemia with the used aqueous extact and the drugs used in the experimental biomodel, it was concluded that the Yacon leaves Produce an affect of signifcant decay of glycemia.

Histoplasmosis diseminada progresiva: comunicación de un caso / Progessive diseminated hystoplasmosis: a case comunication

Caso clínico correspondiente a paciente joven de sexo femenino que ingresa al hospital por proceso febril, ictericia y visceromegalia de evolución sub-aguda, agregándose cuadro respiratorio con imágenes radiológicas pulmonares tipo infiltrativo. El examen post-morten revela naturaleza inflamatoria granulomatosa con compromiso viscero-abdominal neumopatía inflamatoria exudativa alveolar y granulomatosa intersticial con la presencia de pequeñas estructuras parasitarias, que con la ayuda del microscopio electrónico son reconocidas como formas levaduriformes de histoplasma capsulatum. El comportamiento clínico y las características anatomopatológicas del caso en mención lo enmarcaron en la forma denominada "HISTOPLASMOSIS DISEMINADA PROGRESIVA" forma que al parecer se describe por primera vez en el Perú. Se estudia la relación huesped parásito a nivel ultraestructural comparando estos resultados con los obtenidos en trabajos de carácter experimental.