La Red Nacional de Laboratorios Suma: soporte tecnológico en el pesquisaje seropidemiológico delVIH-SIDA en Cuba / National net: technological Ssupport Ffor the HIV-AIDS

Introducción: Desde 1980, los especialistas cubanos buscaron a partir de los principios básicos de los ensayos inmunoenzimáticos, nuevos procedimientos tecnológicos sostenibles para estudios masivos de la población, describiéndose una versión ultramicroanalítica (Sistema Ultra Micro Analítico SUMA) . Objetivos: El objetivo de este programa fue formar un sistema de laboratorio semiautomático con un soporte analítico-instrumental sin que se afectaran los criterios de reproducibilidad establecidos para los ensayos clásicos y los niveles esenciales de la calidad interna y externa. Métodos: El Método desarrollado formó una Red Nacional de Laboratorios SUMA (RNLSUMA), la que cuenta con una infraestructura de 174 Laboratorios distribuidos en diferentes especialidades a lo largo del país y cuatro centros de asistencia técnica o sucursales subordinadas a una direc ción nacional del Centro de Inmunoensayo. En la RNLSUMA, 109 laboratorios prestan servicios a la Red Nacional de Salud Pública y de ellos, 71 realizan determinación de anticuerpos contra el VIH-SIDA 1+2, en la certificación de la sangre, embarazadas y grupos poblacionales. Resultados: Desde el inicio del pesquisaje en Cuba y hasta el término del 2002, se han estudiado con el UMELISA HIV 1+2 Recombinat un total de 17 599 186 personas, para las cuales fue necesario producir mas de 38 718 209 determinaciones. De ellas, 3 468 967 fueron gestantes, 7 322 277 fueron donantes de sangre y 6 807 942 fueron grupos de riesgo. En el 2002 se notificó una especificidad del 99,75 por ciento en un grupo de 581 771 donantes; resultados similares se encontraron para los otros grupos estudiados. Conclusión: Se concluye que de un total acumulado histórico de 4 515 detectados, 3 441 fueron con el SUMA (76 por ciento), a pesar de que solamente el 57 por ciento de la pesquisa histórica fue realizada con el UMELISA HIV 1+2, lo que indica una mejora ostensible en la calidad del pesquisaje y en la tecnología utilizada(AU)

Introdução: Desde 1980, os especialistas cubanos buscaram, a partir dos princípios básicos dos ensaios imunoenzimáticos, novos procedimentos tecnológicos sostenibles para estudos de população em massa, descrevendo-se uma versão ultramicroanalítica (Sistema Ultra Micro Analítico SUMA).Objetivos: O objetivo deste programa foi formar um sistema de laboratório semi-automático com um suporte analítico-instrumental sem afetar os critérios de reprodutibilidade estabelecidos para os ensaios clássicos e os níveis essenciais de qualidade interna e externa. Métodos: O método desenvolvidoformou uma Rede Nacional de Labóratórios SUMA (RNLSUMA), que conta com uma infraestrutura de 174 Laboratórios distribuídos em diferentes especialidades em todo o país e quatro centros de assistência técnica ou sucursais subordinadas a uma direção nacional do Centro de Imunoensaio. Na RNLSUMA, 109 laboratórios prestam serviços a Rede Nacional de Saúde Pública e deles, 71 realizam determinação de anticorpos contra o HIV 1+2, certificação de sangue, gestantes e grupos populacionais. Resultados: Desde o início da pesquisaje em Cuba e até o término de 2002, foram estudados com o Umelisa HIV 1+2 recombinante um total de 17.599.186 pessoas, para os quais foi necessário produzir mais de 38.718.209 determinações.Destas, 3.468.942 foram gestantes, 7.322.277 foram doadores de sangue e 6.807.942 foram pessoas de grupos de risco. Em 2002 notificou-se uma especificidade de 99,75 por cento em um grupo de 581.771 doadores; resultados similares encontraram-se para os outros grupos estudados. Conclusão: Conclui-se que, de um total acumulado histórico de 4.515 detectados, 3.441 foram com o SUMA (76 por cento), apesar de somente 57 por cento da pesquisa histórica ser realizada como Umelisa HIV 1+2, o que indica uma melhora significativa na qualidade da pesquisaje e na tecnologia utilizada(AU)

Introduction: Since 1980, Cuban specialists looked for a new sustainable technological procedure for population screening, starting from the basic principles of the immunoenzymatic assays, being described an ultra microanalytical version named SUMA (Ultra Micro Analytical System SUMA). This version was composed by a semiautomatic laboratory system with an analytic-instrumental support without affecting the established precision criteria for classical assays and the essential levels of internal and external quality. Objectives: The objective of this strategy was to develop the SUMA Laboratories National Net (SUMALNN) is formed by an infrastructure of 171 laboratories distributed in different specialties along the country and four regional centers for technical assistance, all of them subordinated to the national leadership of the Immunoassay Center in Havana City. In the SUMALNN, 109 laboratories give services to the National Net of Public Health and 71 of them carry out the determination of antibodies against HIV 1+2, in the blood certification program, in pregnant women and other population groups. Results: From the beginning of the HIV/AIDS screening in Cuba and until 2002, its been studied with the UMELISA HIV 1+2 RECOMBINANT, a total of 17 599 186 persons, being necessary to produce 38 718 209 tests. From all the persons studied, 3 468 967 were pregnant women, 7 322 277 were blood donors and 6 807 942 belonged to risk groups. In 2002, a specificity of 99,75 percent was notified in a group of 581 771 donors; similar results were found for the other studied groups. Conclusion: You concludes that the 4515 seropositives historically detected, 3 441 of them were using SUMA (76 percent), although only the 57 percent of the historical screening was carried out with the U Melisa HIV 1+2 recombinant, what shows an ostensible quality improvement of the population screening and the technology used(AU)

La red nacional de laboratorios SUMA: soporte tecnológico en el pesquisaje seroepidemiológico del VIH-SIDA en Cuba / SUMA laboratories National Net: technological support for the HIV-AIDS

Formação de um sistema de laboratório semi-automático com um suporte analítico-instrumental sem afetar os critérios de reprudutibilidade estabelecidos para os ensaios clássicos e os níveis essenciais de qualidade interna e externa

Leukocyte immunophenotypes in bronchoalveolar lavage fluid and peripheral blood of paracoccidioidomycosis, sarcoidosis and silicosis.

Leukocyte subsets in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid and peripheral blood of patients with paraccoccidioidomycosis, sarcoidosis and silicosis were characterized using monoclonal antibodies and an immunoperoxidase technique. In paraccocidioidomycosis, the number of T-helper/inducer CD4-positive lymphocytes was lower in peripheral blood than in BAL fluid. Additional analysis showed that the expression of HLA-DR was very similar in alveolar macrophages, lung and blood T-cells. In sarcoidosis and silicosis there were higher proportions of T-helper/inducer cells in peripheral blood than in BAL fluid. The alterations in the T-helper/inducer/T-suppressor/cytoxic CD4/CD8 ratio in sarcoidosis and silicosis were more appreciable in peripheral blood than in BAL fluid, contrasting with the results in paracoccidioidomycosis. The expression of HLA-DR by alveolar macrophages in sarcoidosis was the highest of all the disease studied. No statistically significant differences were observed between chronic multifocal and chronic unifocal paracoccidioidomycosis disease, stage II and stage III sarcoidosis, and chronic and accelerated silicosis. The three granulomatous diseases analyzed had a few alveolar macrophages expressing the CD4 molecule on their surface. These findings and the technique of analyzing both peripheral blood and BAL leukocyte subsets may help to understand the pathogenesis of interstitial lung diseases.

Variabilidad en la prevalencia del asma en un país tropical / Variability in asthma prevalence in a tropical country

La prevalencia de enfermedades alérgicas en el trópico, ha sido reportada frecuentemente como baja y la infección helmíntica ha sido considerada como un factor determinante en este aspecto. En el presente estudio, diferentes poblaciones rurales del país fueron evaluadas encontrándose una prevalencia alta de asma en la isla de Coche (20,4%) del total de la población, aún más elevada en niños (33,0%) en 2531 personas encuestadas que conviven en un caluroso, húmedo, costero y semi árido. En contraste, la prevalencia de asma (55%) era baja en un grupo de 1040 pobladores de una región del Amazonas (San Juan de Manapiare) que sufrían de un menor grado de helmintiasis que en Coche, pero dicha prevalencia era inferior (27%) en 291 indígenas que demostraron una intensa infección helmíntica en otro poblado amazónico (Maroa). La enfermedad asmática en la región amazónica mostró una distribución etaria poco usual, porque fue mayor en adultos. Estos patrones tan contrastantes sobre prevalencia en Coche y Manapiare, fueron confirmados por estudios de la función pulmonar basal y posterior a la inhalación de broncodilatadores. Los niveles de IgE se encontraron bien elevados en Coche y Manapiare y excepcionalmente superiores en Maroa. En los tres grupos estimados la mayor positividad de la IgE específica fue para el Ascaris lumbricoides, aunque en la isla de Coche encontramos cierta positividad para el ácaro del polvo (Dermatofagoides sp), especialmente en los asmáticos. Estos resultados demuestran la amplia variabilidad en la prevalencia de asma y sugieren la multifactorialidad que influye en esta enfermedad en el medio tropical

Cuantificación de Apo B con empleo de anticuerpos monoclonales como indicador precoz de riesgo aterogénico / Quantitation of Apo B with the use of monoclonal antibodies as early indicator of atherogenic risk

Niveles elevados de apolipoproteína B (Apo B) en sangre, se correlacionan con un mayor riesgo al desarrollo de enfermedades cardiovasculares. En este trabajo se describe un método inmunoenzimático (ELISA) no competitivo tipo sandwich, que emplea como anticuerpo de recubrimiento el anticuerpo monoclonal IA/CB-LDL-1 y anticuerpos policlonales de carnero anti Apo B humana, purificados por afinidad y conjugados a enzimas marcadoras. Este sistema se desarrolló a escala microanalítica y ultramicroanalítica empleando en este último caso el equipo SUMA desarrollado en Cuba. La sensibilidad de ambas variantes permite detectar concentraciones de Apo B menores de 50 ng/ml. Los coeficientes de variación intra e interensayo fueron menores de 5 y 10 % respectivamente. Pacientes con infarto agudo del miocardio entre 45 y 80 años y con aterosclerosis periférica entre 60 y 80 años, mostraron niveles significativamente más altos de Apo B respecto a sujetos controles de igual rango de edad. La medición de la concentración de Apo B en muestras de suero de sangre de cordón umbilical realizada con el SUMA, permitió evidenciar valores marcadamente elevados en algunos recién nacidos. Tomando en consideración el nivel de automatización del SUMA, que posibilita analizar un gran número de muestras de manera confiable y bajo costo, se propone este método para estudios de screening primario de recién nacidos y adultos jóvenes, con el fin de identificar aquellos con riesgo de trastornos genéticos del metabolismo de las lipoproteínas que contienen Apo B, lo cual puede corroborarse posteriormente con técnicas más "sofisticadas" y costosas

Cuantificación de Apo B con empleo de anticuerpos monoclonales como indicador precoz de riesgo aterogénico / Quantitation of Apo B with the use of monoclonal antibodies as early indicator of atherogenic risk

Niveles elevados de apolipoproteína B (Apo B) en sangre, se correlacionan con un mayor riesgo al desarrollo de enfermedades cardiovasculares. En este trabajo se describe un método inmunoenzimático (ELISA) no competitivo tipo sandwich, que emplea como anticuerpo de recubrimiento el anticuerpo monoclonal IA/CB-LDL-1 y anticuerpos policlonales de carnero anti Apo B humana, purificados por afinidad y conjugados a enzimas marcadoras. Este sistema se desarrolló a escala microanalítica y ultramicroanalítica empleando en este último caso el equipo SUMA desarrollado en Cuba. La sensibilidad de ambas variantes permite detectar concentraciones de Apo B menores de 50 ng/ml. Los coeficientes de variación intra e interensayo fueron menores de 5 y 10 % respectivamente. Pacientes con infarto agudo del miocardio entre 45 y 80 años y con aterosclerosis periférica entre 60 y 80 años, mostraron niveles significativamente más altos de Apo B respecto a sujetos controles de igual rango de edad. La medición de la concentración de Apo B en muestras de suero de sangre de cordón umbilical realizada con el SUMA, permitió evidenciar valores marcadamente elevados en algunos recién nacidos. Tomando en consideración el nivel de automatización del SUMA, que posibilita analizar un gran número de muestras de manera confiable y bajo costo, se propone este método para estudios de screening primario de recién nacidos y adultos jóvenes, con el fin de identificar aquellos con riesgo de trastornos genéticos del metabolismo de las lipoproteínas que contienen Apo B, lo cual puede corroborarse posteriormente con técnicas más "sofisticadas" y costosas

Ensayo diagnóstico para IgE humana por ultramicroELISA empleando anticuerpos monoclonales / Diagnostic assay for human IgE by ultramicroELISA using monoclonal antibodies

La cuantificación de las concentraciones séricas de la inmunoglobulina E (IgE), tiene gran importancia diagnóstica en las enfermedades alérgicas. En Cuba existe, desde 1987, un programa nacional de diagnóstico de esta entidad, que emplea como elemento tecnológico fundamental un sistema ultramicroELISA (UME), tipo sandwich con anticuerpos policlonales, anti IgE. La introducción de anticuerpos monoclonales (AcM) en estos procedimientos puede proporcionar ventajas, especialmente lo que se refiere a especificidad, y producción de los reactivos. Nosotros hemos obtenido hibridomas secretores de AcM contra IgE, mediante la fusión del mieloma P3/x63.Ag8.653, con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con una preparación purificada de IgE humana monoclonal. Los 10 AcM obtenidos, parecen reconocer determinantes antigénicos alotípicos de la cadena * humana. El CP-IgE.1 (IgG2a) se estudió a mayor profundidad con anticuerpo de captura y revelado, en UME. Se demostró que este AcM puede sustituir efectivamente al anticuerpo policlonal de recubrimiento y puede ser empleado también como segundo anticuerpo en esta técnica. Se evaluó el funcionamiento de un UME con el CB-IgE. En la fase sólida y un anticuerpo policlonal de revelado en la cuantificación de IgE a partir de muestras de pacientes, obteniéndose 100

de coincidencia diagnóstica con el UME policlonal, y repetibilidad y reproducibilidad adecuadas

Ensayo diagnóstico para TSH humana por ultramicroELISA empleando anticuerpos monoclonales / Diagnostic assay for human TSH by ultramicroELISA using monoclonal antibodies

La cuantificación de las concentraciones séricas de la hormona estimulante del tiroides (TSH) en neonatos tiene gran importancia diagnóstica en el hipotiroidismo primario congénito, enfermedad que, de no ser tratada precozmente, evoluciona con complicaciones de retraso mental. En Cuba existe desde 1987 un programa nacional de diagnóstico de esta entidad, que emplea como elemento tecnológico fundamental un sistema ultramicroELISA (UME), con dos anticuerpos policlonales, anti ß-TSH como anticuerpo de captura, y anti subunidad * conjugado con ß-galactosidasa, para el revelado de la reacción. La introducción de anticuerpos monoclonales (AcM) en estos procedimientos puede proporcionar ventajas adicionales, especialmente en lo que se refiere a especificidad y producción del reactivo. Nosotros hemos obtenido hibridomas secretores de AcM contra ß-TSH mediante la fusión del mieloma P3/x63.Ag8.653, con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con TSH. El AcM CB-TSH,1 (IgG1) se estudió a mayor profundidad como anticuerpo de captura en UME. Se demostró que este AcM puede sustituir efectivamente el anticuerpo policlonal de referencia; el UME, que combina el AcM en la fase sólida, y el anticuerpo policlonal para el revelado fue evaluado con muestras de pacientes, ofreciendo 100

de coincidencia diagnóstica con el UME policlonal y buenas repetibilidad y reproducibilidad

Ensayo diagnóstico para TSH humana por ultramicroELISA empleando anticuerpos monoclonales / Diagnostic assay for human TSH by ultramicroELISA using monoclonal antibodies

La cuantificación de las concentraciones séricas de la hormona estimulante del tiroides (TSH) en neonatos tiene gran importancia diagnóstica en el hipotiroidismo primario congénito, enfermedad que, de no ser tratada precozmente, evoluciona con complicaciones de retraso mental. En Cuba existe desde 1987 un programa nacional de diagnóstico de esta entidad, que emplea como elemento tecnológico fundamental un sistema ultramicroELISA (UME), con dos anticuerpos policlonales, anti ß-TSH como anticuerpo de captura, y anti subunidad * conjugado con ß-galactosidasa, para el revelado de la reacción. La introducción de anticuerpos monoclonales (AcM) en estos procedimientos puede proporcionar ventajas adicionales, especialmente en lo que se refiere a especificidad y producción del reactivo. Nosotros hemos obtenido hibridomas secretores de AcM contra ß-TSH mediante la fusión del mieloma P3/x63.Ag8.653, con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con TSH. El AcM CB-TSH,1 (IgG1) se estudió a mayor profundidad como anticuerpo de captura en UME. Se demostró que este AcM puede sustituir efectivamente el anticuerpo policlonal de referencia; el UME, que combina el AcM en la fase sólida, y el anticuerpo policlonal para el revelado fue evaluado con muestras de pacientes, ofreciendo 100% de coincidencia diagnóstica con el UME policlonal y buenas repetibilidad y reproducibilidad

Ensayo diagnóstico para IgE humana por ultramicroELISA empleando anticuerpos monoclonales / Diagnostic assay for human IgE by ultramicroELISA using monoclonal antibodies

La cuantificación de las concentraciones séricas de la inmunoglobulina E (IgE), tiene gran importancia diagnóstica en las enfermedades alérgicas. En Cuba existe, desde 1987, un programa nacional de diagnóstico de esta entidad, que emplea como elemento tecnológico fundamental un sistema ultramicroELISA (UME), tipo sandwich con anticuerpos policlonales, anti IgE. La introducción de anticuerpos monoclonales (AcM) en estos procedimientos puede proporcionar ventajas, especialmente lo que se refiere a especificidad, y producción de los reactivos. Nosotros hemos obtenido hibridomas secretores de AcM contra IgE, mediante la fusión del mieloma P3/x63.Ag8.653, con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con una preparación purificada de IgE humana monoclonal. Los 10 AcM obtenidos, parecen reconocer determinantes antigénicos alotípicos de la cadena * humana. El CP-IgE.1 (IgG2a) se estudió a mayor profundidad con anticuerpo de captura y revelado, en UME. Se demostró que este AcM puede sustituir efectivamente al anticuerpo policlonal de recubrimiento y puede ser empleado también como segundo anticuerpo en esta técnica. Se evaluó el funcionamiento de un UME con el CB-IgE. En la fase sólida y un anticuerpo policlonal de revelado en la cuantificación de IgE a partir de muestras de pacientes, obteniéndose 100 % de coincidencia diagnóstica con el UME policlonal, y repetibilidad y reproducibilidad adecuadas

Digestion of killed Paracoccidioides brasiliensis by neutrophils.

We previously described an in vitro assay showing that neutrophils (PMNs) from patients with paracoccidioidomycosis (PARA) have a specific digestive deficiency against suspensions of live Paracoccidioides brasiliensis. We now report that this defect is equally detectable against autoclaved, but not Amphotericin B-killed P. brasiliensis. The use of autoclaved suspensions facilitates the use of our in vitro assay. It might allow the development of an in vitro intradermal test for digestion of fungi. Differential digestive ability of phagocytes against live (or autoclaved) and Amphotericin-B killed fungi is of conceptual interest. It may be relevant in understanding therapeutic effect of Amphotericin B.

A novel method for estimating killing ability and digestion of Paracoccidioides brasiliensis by phagocytic cells in vitro.

We describe a novel method by which phagocytosis, digestion and killing of Paracoccidioides brasiliensis yeast cells by polymorphonuclear leukocytes or other phagocytic cells may be estimated simultaneously. Suspensions of P. brasiliensis (yeast-like phase) were sonicated, counted and incubated at 37 degrees C with known numbers of phagocytes. Control preparations contained no phagocytic cells. At given intervals samples were incorporated into gelatin nutrient medium and droplets of the mixtures were incubated at room temperature. Live yeast-like P. brasiliensis germinate in vitro and produce filaments. After incubation, droplets may be melted and examined under phase contrast optics, or the cells may be washed and stained by a variation of Papanicolaou's method. Digested P. brasiliensis, intact but non-germinating yeasts and filamented (viable) yeasts may be identified and counted. Killing and digestive abilities of phagocytes may be estimated by the difference between values obtained from phagocyte-containing and control preparations.