Structure, organization and promoter expression of the actin-encoding gene in Trichoderma reesei.

The single gene encoding actin (Act) in the cellulolytic filamentous fungus Trichoderma reesei (Tr) has been isolated and characterized. The gene contains five introns located in identical positions when compared to the putative ancestral actin genes (act) present in Thermomyces lanuginosus and Aspergillus nidulans. The 5' untranslated region (UTR) of the gene contains a TATA-like sequence (TAATA), a C + T-rich region and a potential CCAAT motif. This region was used as a homologous promoter to direct expression of hygromycin-B-resistance-encoding gene as a dominant-selectable Tr marker.

Mitochondrial functions mediate cellulase gene expression in Trichoderma reesei.

We examined the effects of inhibition of mitochondrial functions on the expression of two nuclear genes encoding the extracellular cellobiohydrolase I (cbh1) and endoglucanase I (egl1) of the cellulase system of the filamentous fungus Trichoderma reesei. The cbh1 and egl1 transcripts are repressed at a low oxygen tension, and by glucose at a concentration known to repress mitochondrial respiration. The transcripts are also down-regulated by chemical agents known to dissipate the proton electrochemical gradient of the inner mitochondrial membrane and blocking of the electron-transport chain, such as DNP and KCN, respectively. These results suggest that expression of those transcripts is influenced by the physiological state of the mitochondria. In addition, heterologous gene fusion shows that the sensitivity of the expression of those transcripts to the functional state of the mitochondria is transcriptionally controlled through the 5'-flanking DNA sequence of those genes.

Hormonal regulation of ribosomal RNA synthesis in immature rat uterus

Fraçöes nucleares e nucleolares de útero de ratas jovens injetadas com 17-ß-estadiol näo radioativo foram isoladas e caracterizadas morfológica e bioquimicamente. A análise destas preparaçöes revelou que estas encontravam-se substancialmente puras, com a alfa-amanitina inibindo apenas apenas 20%% da atividade transcricional em nucléolos isolados. O emprego destas fraçöes nos experimentos utilizando a técnica de troca do 3H-estradiol pelo 17-ß-estradiol näo radioativo injetado préviamente nos animais, levou à determinaçäo de curvas de cinética, saturaçäo e de Scatchard para núcleos e nucléolos. Determinou-se alguns parâmetros físico-químicos que definem a ligaçäo do complexo receptor 17-ß-estradiol em núcleos e nucléolos. Os resultados obtidos mostram que tanto núcleos quanto nucléolos apresentam sítios aceptores para o complexo receptor-17-ß-estradiol, sendo esta ligaçäo saturável e específica devido à inibiçäo por um inibidor competitivo,m o diestilstilbestrol, com valores de Kd = 1,06 x 10**-9 M e 20,41 x10**-8 M; Ka = 0,94 x 10**10 M e 20,05 x 10 M; Bo = 0,49 x 10**9 M e 0,35 x 10**-9 M para nucléolos, respectivamente. Em nucléolos a curva de cinética sugere uma acumulaçäo tardia do complexo receptor-hormônio de características diferentes daquelas apresentadas em núcleos, onde existe uma acumulaçäo precoce deste complexo. A partir dos resultados apresentados neste estudo, conclue-se que em útero de ratas jovens pode haver uma açäo direta do hormônio sobre os genes ribossomais. Tal mecanismo caracteriza um sistema de regulaçäo extremamente preciso e complexo, com a presença de sítios aceptores específicos para a açäo do complexo receptor-hormônio sobre o genoma ribossomal. Tendo estabelecido este ponto, estudos adicionais säo necessários para determinar os mecanismos pelos quais os receptores estimulam as velocidades de transcriçäo e suas possíveis implicaçöes no controle gênico