Biological and protective activities of outer membrane proteins from Bordetella.

In this work the biological properties and the capability of the outer membrane proteins (OMPs) from different strains of Bordetella to induce protection against challenge with B. pertussis 18323 were examined. The OMPs from each strain were isolated using Schnaitmann's method. Two OMPs (30 and 32 kDa) were found to be specific for the vaccine strains of B. pertussis and were absent in the OMPs preparation from both B. parapertussis and B. bronchiseptica. When the OMPs from the vaccine strains of B. pertussis were assayed in the mouse intracerebral protection test, they were found to be highly protective (75%-88%) against a challenge with 250 50% lethal doses (LD50) of B. pertussis 18323. However, no correlation was observed between the protective activity and the lymphocytosis-promoting factor (LPF) content of different preparations. Moreover, neither LPF activity or histamine-sensitizing activity (HSA) were found in any of the OMPs assayed. Our results show that OMPs from B. pertussis vaccine strains play a key role in the induction of protective immunity against B. pertussis 18323 in mice, making them excellent candidates to be used in further studies for the development of a pertussis vaccine for humans.

Characterization and detoxification of an easily prepared acellular pertussis vaccine. Antigenic role of the A protomer of pertussis toxin.

An acellular pertussis vaccine was prepared from pertussis vaccine concentrates by eliminating the cells by centrifugation and subsequent acid precipitation. SDS-PAGE analysis indicated the presence of 17 clearly defined bands including the subunits of pertussis toxin. The acellular preparation was detoxified with glutaraldehyde and lost its undesirable effects (leukocytosis-promoting activity, histamine-sensitizing activity and decrease in weight gain) but retained a very good protective activity (PD50 approximately 2 micrograms protein/mouse). Sera from mice immunized with this preparation indicated an antibody response against the A protomer of pertussis toxin.

Comparative biological activities of whole cell pertussis vaccine and a new acellular preparation.

The biological activities of whole-cell pertussis vaccine and a new acellular preparation were compared. It was observed that both preparations were similarly effective in inducing protection in mice against intracerebral challenge with B. pertussis, however, the acellular preparation was approximately 200-fold more potent. A close relationship between the degree of pertussis toxin purification and the increase in potency was observed. Neither preparation affected the weight gain of the animals within the doses employed. As expected, both preparations had histamine-sensitizing activity and leukocyte-promoting activity. It is suggested that this preparation, obtained using very simple methodology, can be considered as a potentially useful acellular pertussis vaccine.

Elaboracion de una preparacion nacional de referencia de antitoxina tetanica liofilizada. / Preparation of National Standard of lyophylized tetanus antitoxin

El objectivo de este trabajo fue elaborar una preparacion de referencia de antitoxina tetanica liofilizada. El producto se preparo a partir de gamma globulina humana hiperinmune concentrada conteniendo 367 (ul/ml). La formulacion del producto fue calculada para contener 25 Ul/ampula y 5 Ul/ml al ser reconstituido con 5 ml de diluente. Se uso sacarosa como suporte y glicina como estabilizador durante la liofilizacion. La prueba de potencia del producto liofilado se efectuo mediante un estudio en colaboracion en el que participaron 3 laboratorios. Los resultados muestran que se tiene un producto de facil resuspensibilidad, esteril, con bajo contenido de humedad residual y una potencia de +/- 0.013 (desviacion estandar promedio entre los diferentes laboratorios). Con ello, podemos concluir que el producto puede ser usado como preparacion nacional de referencia

Desarrollo de la produccion de inmunoglobulinas humanas especificas. I.Titulacion de la antitoxina tetanica en el proceso de obtencion de la inmunoglobulina humana normal. / Development of the production of specific human immunoglobulins. I. Titration of tetanus antitoxin during the process for obtention of human normal immunoglobulin

Este es un estudio preliminar en el desarrollo de inmunoglobulinas especificas. En este primer trabajo se determino el titulo de antitoxina tetanica por el metodo de Ipsen en varias etapas del proceso de produccion de inmunoglobulina humana normal inespecifica por las tecnicas 6 y 9 de Cohn a partir de plasma. El estudio se efectuo en tres lotes de produccion (A, B y C). Los niveles de antitoxina en unidades internacionales de antitoxina por mililitro (UIA/ml) de cada lote, desde la materia prima hasta el producto terminado, fueron: lote A: 0.069, 0.102, 3.251 y 5.848; B; 0.140, 0.177 y 12.53; lote C:0.182 0.204, 0.331 y 3.31. Tambien se estudiaron las variaciones de volumen del producto, la concentracion de proteinas y la pureza electroforetica en cada etapa. El fraccionamiente por el metodo 6 y 9 de Cohn aumento entre 18 y 89.5 veces la potencia del producto. Estos aumentos estan de acuerdo con los requerimientos minimos de la Organizacion Mundial de la Salud que fijan un aumento minino de 10 veces

Mezcla optima de vacuna pertussis elaborada por fermentacion. / Optimal concentration in mixtures of pertussis vaccine produced by fermentation

Con el objeto de lograr una vacuna atoxica y potente antigenicamente se efectuo un estudio para determinar la concentracion optima en la que deben mezclarse las cepas de B. pertussis 134 y 509 que se utilizan en la elaboracion de la vacuna pertussis producida por proceso de fermentacion. Se prepararon 15 lotes que incluyen las cepas individuales y sus respectivas mezclas.Las pruebas efectuadas a cada lote fueron: opacidad, esterilidad, toxicidad y potencia. La primera tuvo una variacion minima entre lotes; la esterilidad fue satisfactoria en todos los casos; la toxicidad se determino siguiendo el metodo de Pittman y van Ramshorts, en que se mide el incremento de peso del raton. Se observo que la toxicidad moderada que existe cuando la concentracion de cada cepa es de 100% tiende a anularse cuando se mezclan dichas cepas a diferentes concentraciones. La prueba de proteccion en el raton se efectuo por el metodo de Kendrick, encontrando que no hay diferencias significativas por lo que se refiere a la potencia para mezclas de ambas cepas en cualquier proporcion

Liofilizacion de vacuna pertussis para uso como preparacion de referencia / Lyophilization of pertussis vaccine to be used as reference

En este trabajo se liofilizo vacuna pertussis sola y con los siguientes soportes: sacarosa al l.5%, manitol al 5%, glicina al 5% y glutamato de sodio al 1.5%, con la finalidad de obtener una vacuna que cubriera los requisitos fisicoquimicos y biologicos necesarios para establecer una preparacion interna de referencia de la vacuna pertussis en el Instituto Nacional de Higiene. La vacuna liofilizada con manitol al 5% presento un aspecto homogeneo, rapida resuspensibilidad, atoxica para el raton y conserva la inmunogenicidad que tenia como vacuna liquida en la prueba de proteccion activa en el raton. Los resultados permiten considerar que el producto puede ser usado como una preparacion interna de referencia para la prueba de potencia de la vacuna pertussis

Relacion experimental entre leucocitos y otros factores de Bordetella pertussis / Experimental relationship between leukocytosis and other factors of Bordetella pertussis

Se estudiaron la dosis y la via de inoculacion en el raton con respecto al factor promotor de leucocitosis (FPL) en la vacuna pertussis. Tambien se investigo la relacion del FPL con el factor sensibilizante a la histamina (FSH), el factor que causa baja ganancia de peso en el raton (FBGP) y el antigeno protector (AP).Durante la inmunizacion, la leucocitosis aumento em forma proporcional a la dosis. En el desafio, la leucocitosis disminuyo al aumetar la dosis. Al injeyectar a ratones con cuatro unidades de opacidad (UOP) por via intraperitoneal (IP) y subcutanea (SC) se presento la leucocitosis mas alta al quinto dia de la inmunizacion induciendose mayor leucocitosis por la via IP. Por la via intravenosa (IV) cuatro UOP matan a todos los ratones y con 1.6 UOP la leucocitosis fue tan alta como en la via IP al tercer dia de la inmunizacion. La inoculacion de cinco UOP de vacuna toxica induce mayor leucocitosis que la vacuna atoxica.Los resultados sugieren una estrecha relacion entre el FPL, FSH, FBGP y el AP en la vacunas pertussis

Relacion experimental entre el factor sensibilizante a la histamina y el antigeno protector de Bordetella pertussis / Experimental relationship between the histamine sensitizing factor and Bordetella pertussis protective antigen

Con cinco lotes liquidos de vacuna pertussis y dos lotes liofilizados se estudio la relacion entre la prueba de factor sensibilizante a la histamina (UFSH) y la potencia del producto en el Instituto Nacional de Higiene. Se encontro una relacion de 1.76 a 2 UFSH por cada unidad de potencia.Dado que la prueba de UFSH es mas economica y mas rapida que la prueba de potencia, se sugiere su empleo como prueba orientadora para el control de la produccion sin sustituir la prueba oficial de potencia para la liberacion de los lotes

Liofilizacion de vacuna tifoidica fenolizada / Lyophylization of typhoid vaccine produced with phenolization

Se prepararon dos lotes de vacuna tifoidica fenolizada concentrada para liofilizarla. Se probaron vacunas simples y con soportes: glicina, manitol, glicina/sacarosa Basandose en el aspecto, en inocuidad, y la potencia, se decidio liofilizar la vacuna sin soporte. Al productor liofilizar se le hicieron pruebas de control fisico quimico y biologico, obteniendo un producto que resuspendido con 20 ml de solucion salina isotonica contiene 10 bacterias/ml, es homogeneo en el envase del lote, es inocuo al raton, tiene resuspensibilidad rapida y una potencia de 14.2 unidades protectoras/ml. Estos resultados permiten considerar que se tiene un producto estable para ser empleado como una preparacion de referencia para la prueba de potencia de vacuna lifoidica fenolizada. A continuacion debera realizarse un estudio en colaboracion para establecerla como preparacion nacional de referencia