Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (bvdv) em rebanhos bovinos / Monitoring of natural infection by bovine viral diarrhea virus (bvdv) in cattle herds

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência da infecção nesse último rebanho. A dinâmica da infecção pelo BVDV foi variável nos rebanhos analisados, destacando a provável eliminação espontânea do BVDV no rebanho 1 e os fatores de risco relacionados à transmissão do BVDV, como a freqüente aquisição de animais de diversas procedências pelo rebanho 4, assim como a provável hipótese da infecção do rebanho 17 ter originado a partir do rebanho vizinho.

Natural infection by bovine viral diarrhea virus (BVDV) was monitored in blood serum samples of three cattle herds. The samples were drawn in several harvests from each herd and submitted to virus neutralization test (VN) against BVDV-1 and BVDV-2. The non reactive samples to at least one of the genotypes and also those collected from calves younger than six months, were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). In two herds, BVDV was not detected in any blood sample and the number of reactive samples to VN test, especially young animals, decreased as the blood sample harvests were conducted. However, in the third herd, the infection remained during the monitored period, because BVDV was detected in two persistently infected animals (PI) and also in one transiently infected animal (TI). The cattle breeding system and intense movement of animals were favorable to the permanence of infection in this last herd. The dynamics of BVDV infection changed in the analyzed herds, highlighting the probable self clearance of BVDV in herd 1 and the risk factors related to transmission of BVDV, such as the frequent purchase of animals from different origins for herd 4, as well as the probable hypothesis that infection of herd 17 may have originated from the neighboring herd.

MONITORING OF NATURAL INFECTION BY BOVINE VIRAL DIARRHEA VIRUS (BVDV) IN CATTLE HERDS / Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) em rebanhos bovinos

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência

MONITORING OF NATURAL INFECTION BY BOVINE VIRAL DIARRHEA VIRUS (BVDV) IN CATTLE HERDS / Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) em rebanhos bovinos.

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência

Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (bvdv) em rebanhos bovinos / Monitoring of natural infection by bovine viral diarrhea virus (bvdv) in cattle herds

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência da infecção nesse último rebanho. A dinâmica da infecção pelo BVDV foi variável nos rebanhos analisados, destacando a provável eliminação espontânea do BVDV no rebanho 1 e os fatores de risco relacionados à transmissão do BVDV, como a freqüente aquisição de animais de diversas procedências pelo rebanho 4, assim como a provável hipótese da infecção do rebanho 17 ter originado a partir do rebanho vizinho.(AU)

Natural infection by bovine viral diarrhea virus (BVDV) was monitored in blood serum samples of three cattle herds. The samples were drawn in several harvests from each herd and submitted to virus neutralization test (VN) against BVDV-1 and BVDV-2. The non reactive samples to at least one of the genotypes and also those collected from calves younger than six months, were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). In two herds, BVDV was not detected in any blood sample and the number of reactive samples to VN test, especially young animals, decreased as the blood sample harvests were conducted. However, in the third herd, the infection remained during the monitored period, because BVDV was detected in two persistently infected animals (PI) and also in one transiently infected animal (TI). The cattle breeding system and intense movement of animals were favorable to the permanence of infection in this last herd. The dynamics of BVDV infection changed in the analyzed herds, highlighting the probable self clearance of BVDV in herd 1 and the risk factors related to transmission of BVDV, such as the frequent purchase of animals from different origins for herd 4, as well as the probable hypothesis that infection of herd 17 may have originated from the neighboring herd.(AU)

Rotavírus bovino: fatores de risco, prevalência e caracterização antigênica de amostras em rebanhos leiteiros no estado de São Paulo / Rotavirus in cattle: risk factors, prevalence and antigenic characterization from dairy calves' samples in São Paulo State, Brazil

O estudo de prevalência da infecção por rotavírus em bezerros abrangeu 51 rebanhos leiteiros, escolhidos ao acaso, localizados em uma região produtora de leite do estado de São Paulo. Entre 31 de maio e 20 de outubro de 2003, foram colhidas 103 amostras de fezes de bezerros com diarreia e 308 amostras de animais sem diarreia, com idade entre um e 45 dias. As amostras foram analisadas pelas técnicas de ensaio imunoenzimático (EIE) e eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Pelo EIE foi observada prevalência de rotavírus de 21,6 por cento (11/51) nos rebanhos e 6,7 por cento (27/404) nos bezerros. Foram diagnosticados animais infectados por rotavírus tanto em bezerros diarreicos (18,4 por cento; 19/103) quanto em bezerros assintomáticos (2,7 por cento; 8/301). A maior frequência de infecção foi determinada em bezerros com idade entre um e 15 dias, sendo estabelecida uma relação inversa entre a frequência de positividade e a idade dos animais (P<0,05). Além da idade, o sistema de alimentação - fornecimento manual do leite ou bezerro com a mãe, o tipo de instalação - baias individuais ou baias coletivas - e o tamanho do rebanho -, número de matrizes foram fatores que influenciaram significativamente a frequência da infecção (P<0,05). O RNA extraído de 27 amostras pelo PAGE foi classificado em sete eletroferótipos, indicando grande diversidade genômica de rotavírus. A genotipagem das amostras positivas para rotavírus foi realizada pelo método de transcrição reversa-reação da polimerase em cadeia, destacando a presença de infecções pelos genótipos G6P[5] e G10P[11].

The study on rotavirus infection prevalence in calves was undertaken in 51 dairy cattle herds, randomly selected, in a dairy area in the state of São Paulo. One hundred and three samples of feces from calves with diarrhea and 308 samples of feces from calves free from the disease, age ranging from 1 to 45 days, were collected from May 31st to October 20th 2003. Stool samples were analyzed through immunoenzymatic assay techniques (IEA) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Rotavirus prevalence rate of 21.6 percent (11/51) was detected by IEA in cattle herds and 6.7 percent (27/404) in calf population. Rotavirus infection was diagnosed in calves with diarrhea (18.4 percent; 19/103) and in clinically healthy calves (2.7 percent; 8/301). The highest infection frequency was found in calves aged 1 to 15 days. There is an inverse relationship between positive frequency and age of animals (P<0.05). Factors which may affect rotavirus prevalence in herds, such as type of meals (manual milk supply or calf with dame), enclosure (individual or collective pens), herd size (number of matrixes) and age have been analyzed by the chi-square test, and significantly affected infection frequency (p<0.05). RNA from 27 positive samples by PAGE were classified in seven electrophorotypes and showed the rotavirus' extensive genomic diversity. Rotavirus positive samples genotyping was undertaken through the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), underpinning infections by special genotypes G6P[5] and G10P[11].

Rotavírus bovino: fatores de risco, prevalência e caracterização antigênica de amostras em rebanhos leiteiros no estado de São Paulo / Rotavirus in cattle: risk factors, prevalence and antigenic characterization from dairy calves' samples in São Paulo State, Brazil

O estudo de prevalência da infecção por rotavírus em bezerros abrangeu 51 rebanhos leiteiros, escolhidos ao acaso, localizados em uma região produtora de leite do estado de São Paulo. Entre 31 de maio e 20 de outubro de 2003, foram colhidas 103 amostras de fezes de bezerros com diarreia e 308 amostras de animais sem diarreia, com idade entre um e 45 dias. As amostras foram analisadas pelas técnicas de ensaio imunoenzimático (EIE) e eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). Pelo EIE foi observada prevalência de rotavírus de 21,6 por cento (11/51) nos rebanhos e 6,7 por cento (27/404) nos bezerros. Foram diagnosticados animais infectados por rotavírus tanto em bezerros diarreicos (18,4 por cento; 19/103) quanto em bezerros assintomáticos (2,7 por cento; 8/301). A maior frequência de infecção foi determinada em bezerros com idade entre um e 15 dias, sendo estabelecida uma relação inversa entre a frequência de positividade e a idade dos animais (P<0,05). Além da idade, o sistema de alimentação - fornecimento manual do leite ou bezerro com a mãe, o tipo de instalação - baias individuais ou baias coletivas - e o tamanho do rebanho -, número de matrizes foram fatores que influenciaram significativamente a frequência da infecção (P<0,05). O RNA extraído de 27 amostras pelo PAGE foi classificado em sete eletroferótipos, indicando grande diversidade genômica de rotavírus. A genotipagem das amostras positivas para rotavírus foi realizada pelo método de transcrição reversa-reação da polimerase em cadeia, destacando a presença de infecções pelos genótipos G6P[5] e G10P[11].(AU)

The study on rotavirus infection prevalence in calves was undertaken in 51 dairy cattle herds, randomly selected, in a dairy area in the state of São Paulo. One hundred and three samples of feces from calves with diarrhea and 308 samples of feces from calves free from the disease, age ranging from 1 to 45 days, were collected from May 31st to October 20th 2003. Stool samples were analyzed through immunoenzymatic assay techniques (IEA) and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). Rotavirus prevalence rate of 21.6 percent (11/51) was detected by IEA in cattle herds and 6.7 percent (27/404) in calf population. Rotavirus infection was diagnosed in calves with diarrhea (18.4 percent; 19/103) and in clinically healthy calves (2.7 percent; 8/301). The highest infection frequency was found in calves aged 1 to 15 days. There is an inverse relationship between positive frequency and age of animals (P<0.05). Factors which may affect rotavirus prevalence in herds, such as type of meals (manual milk supply or calf with dame), enclosure (individual or collective pens), herd size (number of matrixes) and age have been analyzed by the chi-square test, and significantly affected infection frequency (p<0.05). RNA from 27 positive samples by PAGE were classified in seven electrophorotypes and showed the rotavirus' extensive genomic diversity. Rotavirus positive samples genotyping was undertaken through the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), underpinning infections by special genotypes G6P[5] and G10P[11].(AU)

DETECÇÃO E ISOLAMENTO DE ROTAVÍRUS CAPRINO DO GRUPO A

ABSTRACT Rotavirus is the main cause of diarrhea in young animals of several species. They are classified as a genus within the virus family Reoviridae. Rotaviruses have a segmented genome made up of a double-stranded RNA. It is divided into 11 segments and surrounded by a triple protein capsid. In this study, Rotavirus was detected by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) in feces samples of 80-day-old goats during a diarrhea outbreak in a milk-producing herd. The samples electrophoretic pattern, called cap01/2007, was characterized as Group A rotavirus. A 20% fecal suspension in buffer TRIS 0.1M pH 7.3 was filtered and treated with crystalline trypsin in a 5 mg/mL concentration for viral isolation. Caprine sample Cap01/2007 was inoculated in MA-104 cells (Rhesuss kidneys) with a 48-hour growth. Two treatments (T1 and T2) were tested. In T1, maintenance medium without trypsin was added (Dulbecco-MEM) after adsorption (buffer at 37º C for 1h) the inoculum was maintained. In treatment T2, the previous procedure without the inoculum was performed. Cytopathic effect was observed in the first passage for both treatments (T1 and T2) with 48h inoculation, and viral isolation was then confirmed by PAGE. Migration design remained unchanged after 3 successive passages. This is the first report of isolation of caprine rotavirus in Brazil.

RESUMO Rotavírus é a principal causa de diarreia em animais jovens de várias espécies. Os rotavirus estão classificados na família Reoviridae e contêm um genoma formado por 11 segmentos de RNA de cadeia dupla, envolvidos em três camadas proteicas. Neste estudo, foi detectado rotavírus pela eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) em amostras de fezes de caprinos, com 80 dias de idade, durante surto de diarreia em um rebanho leiteiro. O perfil eletroforético das amostras, denominadas cap01/2007 e cap02/2007, foi caracterizado no PAGE como sendo de rotavírus do grupo A. Para o isolamento viral, suspensão fecal a 20% em tampão tris 0,1M pH 7,3 foi filtrada e tratada com tripsina cristalina na concentração de 5mg/mL. A amostra caprina cap01/2007 foi inoculada em cultura de células MA104 (Rim de Macaco Rhesus). Foram testados dois tratamentos (T1 e T2): após adsorção (estufa 37º C por uma hora) adicionou-se meio de manutenção (Dulbecco-MEM) sem tripsina, mantendo o inóculo (T1). No tratamento 2 (T2), foi realizado o mesmo pro cedimento anterior, porém o inóculo foi dispensado. O efeito citopático foi observado na primeira passagem para ambos os tratamentos (T1 e T2) com 48 horas de inoculação e o isolamento viral foi confirmado no PAGE. O perfil de migração manteve-se inalterado após três passagens sucessivas. Este é o primeiro relato de isolamento de rotavírus em caprinos no Brasil.

Occurrence of neutralizing antibodies against BVDV-1 and BVDV-2 in cattle herds from Minas Gerais and São Paulo States, Brazil / Ocorrência de anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 e o BVDV-2 em rebanhos bovinos de Minas Gerais e São Paulo, Brasil

The occurrence of neutralizing antibodies against bovine viral diarrhea virus genotypes (BVDV-1 and BVDV-2) has been confirmed by virus neutralization test (VN) in samples of blood serum from 26 cattle herds which were not BVDV vaccinated, located in the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Ten blood samples were collected from each herd, five samples from 6 to 12-month-old calves and five samples from adult bovines. Of the total samples analyzed, 102 (39.2%) were reactive to BVDV, more specifically, 81 (31.1%) were reactive to BVDV-1 and BVDV-2, seven (2.7%) were reactive to BVDV-1 only and 14 (5.4%) were reactive to BVDV-2 only. Except for two herds, in all others at least one animal was detected reactive to BVDV, however, one of them was reactive to BVDV-2 only. In six herds, neutralizing antibodies were detected in blood serum from 6 to 12-month-old calves. Therefore, were indicative of recent BVDV infection and also suggested the likely presence of an infection source in the herd. The results showed the occurrence of neutralizing antibodies against BVDV genotypes in cattle herds located in the states analyzed, but these same results demonstrated the differences in the number of bovines reactive for BVDV-1 and BVDV-2, thus demonstrating the need to use strains from each genotype in VN tests for serological diagnosis of BVDV.

A ocorrência de anticorpos neutralizantes contra os genótipos do vírus da diarréia viral bovina (BVDV-1 e BVDV-2) foi determinada pelo teste de virusneutralização (VN) em amostras de soro sangüíneo provenientes de 26 rebanhos bovinos não vacinados contra o BVDV, localizados nos Estados de Minas Gerais e São Paulo, Brasil. Foram analisadas 10 amostras por rebanho, sendo cinco de bovinos adultos e cinco de bovinos com idade entre 6 e 12 meses. Do total de 260 amostras analisadas, 102 (39,2%) reagiram ao BVDV, das quais 81 (31,1%) foram reagentes tanto ao BVDV-1 quanto ao BVDV-2, sete (2,7%) reagiram apenas ao BVDV-1 e 14 (5,4%) reagiram apenas ao BVDV-2. Com exceção de dois rebanhos, nos demais foram detectados pelo menos um animal reagente ao BVDV, entretanto, foram detectados animais reagentes apenas ao BVDV-2 em um deles. Em seis rebanhos foram detectados anticorpos neutralizantes nos bovinos da faixa etária de 6 a 12 meses, sendo, portanto, indicativos da infecção recente pelo vírus e também sugestivos da provável presença da fonte de infecção no rebanho. Os dados obtidos mostraram a ocorrência de anticorpos neutralizantes contra os genótipos do BVDV em rebanhos bovinos localizados nos Estados analisados, mas os resultados apresentaram diferenças no número de bovinos reagentes ao BVDV-1 e ao BVDV-2, ressaltando assim a necessidade da utilização de estirpes de cada genótipo nos testes de VN para o diagnóstico sorológico do BVDV.

Infectious bovine rinotracheitis associated with bovine viral diarrhea and enzootic bovine leukosis / Herpesvírus bovino associado à diarreia viral bovina e à leucose enzoótica bovina

This research verified the variation of the occurrence of herpesvirus bovine type 1 (BoHV-1) by its association with two viral infections: bovine viral diarrhea (BVD) and enzootic bovine leukosis (EBL). The following methodologies were used: virus neutralization test (VNT) for both BoHV-1 and BVD diagnosis, and agar gel immunodiffusion (IDGA) for EBL. Five cattle herds were selected in the states of São Paulo and Minas Gerais, three of them were dairy cattle herds, one beef cattle and one crossbred. Every herd had a number of animals seropositive for BoHV-1. From 278 analyzed samples, 54.68% (152/278) were responsive to BoHV-1, 69.70% (194/278) to BVDV-1, and 34.33% (97/278) to EBLV. The statistical analysis showed significant difference (a = 0.01) in infection occurrence according to the type of herd and animal age. Dairy cattle were more sensitive to BoHV-1 (81.31%) and to EBLV (49.53%), while in beef cattle the most frequent was BVDV-1 (94.74%). Age was a risk factor only for BoHV-1 and EBLV, the results showed that the older animals were more susceptible. The association analysis also indicated that among BVDV-1 and/or EBLV infected herds the probability of finding BoHV-1 is higher than among herds where these two infections do not occur.

Esta pesquisa verificou a variação da ocorrência do herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) pela associação com duas doenças virais: diarréia viral bovina (BVD) e leucose enzoótica bovina (LEB). Como metodologias foram utilizados o teste de virusneutralização para detecção de BoHV-1 e BVD, e imunodifusão em gel de ágar para LEB. Foram selecionados cinco rebanhos bovinos, de propriedades localizadas em municípios dos Estados de São Paulo e Minas Gerais, sendo três de exploração leiteira, um de corte e um misto, todos com parte dos animais soropositivos ao BoHV-1. Das 278 amostras analisadas, 54,68% (152/278) foram positivas ao BoHV-1, 69,70% (194/278) ao BVDV-1 e 34,33% (96/278) ao VLEB. Na análise estatística, ao relacionar cada enfermidade com o tipo de exploração do rebanho e a idade dos animais, houve diferença significativa (a=0.01). Os rebanhos leiteiros foram mais suscetíveis ao BoHV-1 (81,31%) e a LEB (49,53%), enquanto o gado de corte teve como maior ocorrência o BVDV-1 (94,74%). A idade foi fator de risco apenas para o BoHV-1 e a LEB, sendo os animais mais velhos os mais suscetíveis. As análises associativas também indicaram que em rebanhos infectados por BVDV-1 e/ou LEB, a probabilidade de se encontrar o BoHV-1 é maior do que nas isentas dessas duas enfermidades.

Detecção e isolamento de rotavírus caprino do grupo A / Detection and isolation of group A caprine rotavirus

Rotavírus é a principal causa de diarreia em animais jovens de várias espécies. Os rotavirus estão classificados na família Reoviridae e contêm um genoma formado por 11 segmentos de RNA de cadeia dupla, envolvidos em três camadas proteicas. Neste estudo, foi detectado rotavírus pela eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) em amostras de fezes de caprinos, com 80 dias de idade, durante surto de diarreia em um rebanho leiteiro. O perfil eletroforético das amostras, denominadas cap01/2007 e cap02/2007, foi caracterizado no PAGE como sendo de rotavírus do grupo A. Para o isolamento viral, suspensão fecal a 20% em tampão tris 0,1M pH 7,3 foi filtrada e tratada com tripsina cristalina na concentração de 5mg/mL. A amostra caprina cap01/2007 foi inoculada em cultura de células MA104 (Rim de Macaco Rhesus). Foram testados dois tratamentos (T1 e T2): após adsorção (estufa 37º C por uma hora) adicionou-se meio de manutenção (Dulbecco-MEM) sem tripsina, mantendo o inóculo (T1). No tratamento 2 (T2), foi realizado o mesmo pro cedimento anterior, porém o inóculo foi dispensado. O efeito citopático foi observado na primeira passagem para ambos os tratamentos (T1 e T2) com 48 horas de inoculação e o isolamento viral foi confirmado no PAGE. O perfil de migração manteve-se inalterado após três passagens sucessivas. Este é o primeiro relato de isolamento de rotavírus em caprinos no Brasil.

Rotavirus is the main cause of diarrhea in young animals of several species. They are classified as a genus within the virus family Reoviridae. Rotaviruses have a segmented genome made up of a double-stranded RNA. It is divided into 11 segments and surrounded by a triple protein capsid. In this study, Rotavirus was detected by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) in feces samples of 80-day-old goats during a diarrhea outbreak in a milk-producing herd. The sample's electrophoretic pattern, called cap01/2007, was characterized as Group A rotavirus. A 20% fecal suspension in buffer TRIS 0.1M pH 7.3 was filtered and treated with crystalline trypsin in a 5 mg/mL concentration for viral isolation. Caprine sample Cap01/2007 was inoculated in MA-104 cells (Rhesus's kidneys) with a 48-hour growth. Two treatments (T1 and T2) were tested. In T1, maintenance medium without trypsin was added (Dulbecco-MEM) after adsorption (buffer at 37º C for 1h) the inoculum was maintained. In treatment T2, the previous procedure without the inoculum was performed. Cytopathic effect was observed in the first passage for both treatments (T1 and T2) with 48h inoculation, and viral isolation was then confirmed by PAGE. Migration design remained unchanged after 3 successive passages. This is the first report of isolation of caprine rotavirus in Brazil.

INFECTIOUS BOVINE RINOTRACHEITIS ASSOCIATED WITH BOVINE VIRAL DIARRHOEA AND ENZOOTIC BOVINE LEUKOSIS / Herpesvirus bovino associado à diarréia viral bovina e à leucose enzoótica bovina.

Esta pesquisa verificou a variação da ocorrência do herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) pela associação com duas doenças virais: diarréia viral bovina (BVD) e leucose enzoótica bovina (LEB). Como metodologias foram utilizados o teste de virusneutralização para detecção de BoHV-1 e BVD, e imunodifusão em gel de ágar para LEB. Foram selecionados cinco rebanhos bovinos, de propriedades localizadas em municípios dos Estados de São Paulo e Minas Gerais, sendo três de exploração leiteira, um de corte e um misto, todos com parte dos animais soropositivos ao BoHV-1. Das 278 amostras analisadas, 54,68% (152/278) foram positivas ao BoHV-1, 69,70% (194/278) ao BVDV-1 e 34,33% (96/278) ao VLEB. Na análise estatística, ao relacionar cada enfermidade com o tipo de exploração do rebanho e a idade dos animais, houve diferença significativa (α=0,01). Os rebanhos leiteiros foram mais suscetíveis ao BoHV-1 (81,31%) e a LEB (49,53%), enquanto o gado de corte teve como maior ocorrência o BVDV-1 (94,74%). A idade foi fator de risco apenas para o BoHV-1 e a LEB, sendo os animais mais velhos os mais susc

OCCURRENCE OF NEUTRALIZING ANTIBODIES AGAINST BVDV-1 AND BVDV-2 IN CATTLE HERDS FROM MINAS GERAIS AND SÃO PAULO STATES, BRAZIL / Ocorrência de anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 e o BVDV-2 em rebanhos bovinos de Minas Gerais e São Paulo, Brasil.

A ocorrência de anticorpos neutralizantes contra os genótipos do vírus da diarréia viral bovina (BVDV-1 e BVDV-2) foi determinada pelo teste de virusneutralização (VN) em amostras de soro sangüíneo provenientes de 26 rebanhos bovinos não vacinados contra o BVDV, localizados nos Estados de Minas Gerais e São Paulo, Brasil. Foram analisadas 10 amostras por rebanho, sendo cinco de bovinos adultos e cinco de bovinos com idade entre 6 e 12 meses. Do total de 260 amostras analisadas, 102 (39,2%) reagiram ao BVDV, das quais 81 (31,1%) foram reagentes tanto ao BVDV-1 quanto ao BVDV-2, sete (2,7%) reagiram apenas ao BVDV-1 e 14 (5,4%) reagiram apenas ao BVDV-2. Com exceção de dois rebanhos, nos demais foram detectados pelo menos um animal reagente ao BVDV, entretanto, foram detectados animais reagentes apenas ao BVDV-2 em um deles. Em seis rebanhos foram detectados anticorpos neutralizantes nos bovinos da faixa etária de 6 a 12 meses, sendo, portanto, indicativos da infecção recente pelo vírus e também sugestivos da provável presença da fonte de infecção no rebanho. Os dados obtidos mostraram a ocorrência de anticorpos neutralizantes contra os gen&o

Caracterização epidemiológica da raiva bovina no estado de Mato Grosso, Brasil, no período de 1996 a 2006 / Epidemiological characterization of bovine rabies in the state of Mato Grosso, Brasil, in the period from 1996 to 2006

Um levantamento epidemiológico de todos os casos de raiva bovina ocorridos no Estado de Mato Grosso durante os anos de 1996 a 2006 foi realizado pela análise da curva epidêmica, por meio do cálculo do somatório, média, desvio padrão, valores máximos e mínimos da ocorrência de casos de raiva nos três ecossistemas; análise estatística entre o efetivo bovino nos três biomas do estado e o número de casos de raiva bovina; a distribuição sazonal e a situação da doença no estado em relação ao panorama nacional. Para organização dos dados, levou-se em consideração o mês e o ano de ocorrência da raiva e a região geográfica de origem do material. Os diferentes municípios envolvidos foram classificados conforme sua localização nas regiões de Cerrado, Pantanal e Amazônia. Constatou-se que a variação no número de casos positivos da enfermidade tem sido crescente nos últimos anos, sendo que o maior número de casos deu-se no bioma Cerrado, que apresentou uma tendência de aumento anual. A partir do ano de 2004, o ecossistema Cerrado passou da situação de enzootia para epizootia, ficando pois, evidente que o principal problema de raiva em bovinos no Estado de Mato Grosso está situado no bioma Cerrado.

An epidemiological survey of all cases of bovine rabies that occurred in Mato Grosso, Brazil, during the years 1996 to 2006 was conducted by way of the analysis of the epidemic curve, by calculating the sum, average, standard deviation, maximum and minimum values of the occurrence of rabies in three ecosystems; statistical analysis between the actual cattle in the three biomes of the state and the number of cases of rabies cattle; and the seasonal distribution and disease situation in the state in relation to the national scene. The data were organized by taking into account the month and year of occurrence of rabies and the geographic region of the origin of the material. The different cities involved were classified according to their location in regions of Cerrado, the Pantanal and the Amazon. It was found that the variation in the number of positive cases of the disease has been increasing in recent years, with the largest number of cases occurring in the Cerrado biome, which showed a trend of annual increase. Beginning in the year 2004 the Cerrado ecosystem passed from the situation of enzootic to epizootic, making it evident that the main bovine rabies problem in the state of Mato Grosso is situated in the Cerrado biome.

Caracterização genética e distribuição geográfica do vírus rábico isolado de bovinos no estado de Mato Grosso, Brasil / Genetic characterization and geographic distribution of rabies virus isolates from cattle in Mato Grosso, Brazil

Foram caracterizados, geneticamente e geograficamente, o sequenciamento parcial da nucleoproteína (gene N) de 53 isolados do vírus da raiva (VR) originários do Estado de Mato Grosso, Brasil. Os isolados de bovinos, que se encontravam no grupo do VR relacionado a morcegos hematófagos, foram posteriormente subdivididos em sete subgrupos genéticos. Estes subgrupos foram distribuídos em regiões de terras planas, com alguns subgrupos separados por formações de pequenas montanhas e hidrografia. Estes resultados indicam que a raiva em bovinos é derivada de diversas variantes regionalmente definidas, o que sugere que sua distribuição geográfica está relacionada as populações de morcegos hematófagos.

A total of 53 rabies virus (RV) isolates originating from cattle in the state of Mato Grosso, Brazil, were genetically characterized. Partial nucleoprotein gene sequences of these isolates were phylogenetically and geographically analyzed. Cattle isolates, which clustered with the vampire bat related RV group, were further subdivided into 7 subgroups. These subgroups were distributed widely in lowland regions, with some subgroups separated from each other by small mountains and hydrographical features. These results indicate that cattle rabies is derived from several regionally-defined variants, which suggests that its geographical distribution is related to that of the vampire bat population.

CARACTERIZAÇÃO GENÉTICA E DISTRIBUIÇÃO GEOGRÁFICA DO VÍRUS RÁBICO ISOLADO DE BOVINOS NO ESTADO DE MATO GROSSO, BRASIL

ABSTRACT A total of 53 rabies virus (RV) isolates originating from cattle in the state of Mato Grosso, Brazil, were genetically characterized. Partial nucleoprotein gene sequences of these isolates were phylogenetically and geographically analyzed. Cattle isolates, which clustered with the vampire bat related RV group, were further subdivided into 7 subgroups. These subgroups were distributed widely in lowland regions, with some subgroups separated from each other by small mountains and hydrographical features. These results indicate that cattle rabies is derived from several regionally-defined variants, which suggests that its geographical distribution is related to that of the vampire bat population.

RESUMO Foram caracterizados, geneticamente e geograficamente, o sequenciamento parcial da nucleoproteína (gene N) de 53 isolados do vírus da raiva (VR) originários do Estado de Mato Grosso, Brasil. Os isolados de bovinos, que se encontravam no grupo do VR relacionado a morcegos hematófagos, foram posteriormente subdivididos em sete subgrupos genéticos. Estes subgrupos foram distribuídos em regiões de terras planas, com alguns subgrupos separados por formações de pequenas montanhas e hidrografia. Estes resultados indicam que a raiva em bovinos é derivada de diversas variantes regionalmente definidas, o que sugere que sua distribuição geográfica está relacionada as populações de morcegos hematófagos.

TÍTULOS DE ANTICORPOS ANTI-HERPESVÍRUS BOVINO TIPO 1 (BoHV-1) DE BEZERRAS EM TRÊS REBANHOS LEITEIROS DO ESTADO DE SÃO PAULO, BRASIL

O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) é um importante agente infeccioso dos bovinos responsável por expressivas perdas econômicas. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar os títulos de anticorpos de bezerras nascidas e criadas, durante doze meses, em três propriedades, apresentando baixa, média e alta prevalência de BoHV-1, onde foram adotadas medidas de manejo sanitário. Os soros colhidos periodicamente foram analisados e titulados pelo teste de vírus-neutralização. Os resultados mostraram que em relação à vacinação das vacas e transferência da imunidade passiva, em rebanhos de baixa prevalência de BoHV-1, não existiram diferenças nos títulos de anticorpos colostrais entre filhas de vacas vacinadas e não vacinadas contra o BoHV-1. Entretanto, em rebanhos de média e alta prevalência de BoHV-1, os títulos de anticorpos maternos foram mais elevados nas bezerras nascidas de vacas positivas e vacinadas contra BoHV-1. Com relação à avaliação zootécnica e sanitária, foi observado que quando as bezerras são manejadas corretamente, mantidas com cuidados de higiene veterinária e alimentação balanceada, não sofrem infecção em quaisquer circunstâncias de prevalência de BoHV-1, ou seja, independentemente do rebanho apresentar baixa, média ou alta prevalência para este vírus, o manejo constitui uma ferramenta fundamental quando se tem por objetivo controlar e/ou erradicar o BoHV-

CARACTERIZAÇÃO EPIDEMIOLÓGICA DA RAIVA BOVINA NO ESTADO DE MATO GROSSO, BRASIL, NO PERÍODO DE 1996 A 2006

ABSTRACT An epidemiological survey of all cases of bovine rabies that occurred in Mato Grosso, Brazil, during the years 1996 to 2006 was conducted by way of the analysis of the epidemic curve, by calculating the sum, average, standard deviation, maximum and minimum values of the occurrence of rabies in three ecosystems; statistical analysis between the actual cattle in the three biomes of the state and the number of cases of rabies cattle; and the seasonal distribution and disease situation in the state in relation to the national scene. The data were organized by taking into account the month and year of occurrence of rabies and the geographic region of the origin of the material. The different cities involved were classified according to their location in regions of Cerrado, the Pantanal and the Amazon. It was found that the variation in the number of positive cases of the disease has been increasing in recent years, with the largest number of cases occurring in the Cerrado biome, which showed a trend of annual increase. Beginning in the year 2004 the Cerrado ecosystem passed from the situation of enzootic to epizootic, making it evident that the main bovine rabies problem in the state of Mato Grosso is situated in the Cerrado biome.

RESUMO Um levantamento epidemiológico de todos os casos de raiva bovina ocorridos no Estado de Mato Grosso durante os anos de 1996 a 2006 foi realizado pela análise da curva epidêmica, por meio do cálculo do somatório, média, desvio padrão, valores máximos e mínimos da ocorrência de casos de raiva nos três ecossistemas; análise estatística entre o efetivo bovino nos três biomas do estado e o número de casos de raiva bovina; a distribuição sazonal e a situação da doença no estado em relação ao panorama nacional. Para organização dos dados, levou-se em consideração o mês e o ano de ocorrência da raiva e a região geográfica de origem do material. Os diferentes municípios envolvidos foram classificados conforme sua localização nas regiões de Cerrado, Pantanal e Amazônia. Constatou-se que a variação no número de casos positivos da enfermidade tem sido crescente nos últimos anos, sendo que o maior número de casos deu-se no bioma Cerrado, que apresentou uma tendência de aumento anual. A partir do ano de 2004, o ecossistema Cerrado passou da situação de enzootia para epizootia, ficando pois, evidente que o principal problema de raiva em bovinos no Estado de Mato Grosso está situado no bioma Cerrado.

Títulos de anticorpos anti-herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) de bezerras em três rebanhos leiteiros do estado de São Paulo, Brasil / Antibodies titers against bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) from calves on three dairy farms in São Paulo State, Brazil

O presente estudo teve como objetivo avaliar os títulos de anticorpos de bezerras de zero a doze meses de idade, em três propriedades de baixa, média e alta prevalência de BoHV-1. Os soros colhidos periodicamente foram analisados e titulados pelo teste de vírus-neutralização. Em rebanho de baixa prevalência de BoHV-1, não existiu diferença nos títulos de anticorpos colostrais entre filhas de vacas vacinadas e não vacinadas contra o BoHV-1. Em rebanhos de média e alta prevalência de BoHV-1, os títulos de anticorpos foram mais elevados nas bezerras nascidas de vacas positivas e vacinadas contra BoHV-1. A avaliação zootécnica demonstrou que quando as bezerras são manejadas corretamente e mantidas com cuidados de higiene sanitária e alimentação balanceada, não sofrem infecção em quaisquer circunstâncias de prevalência de BoHV-1. Assim, o manejo é fundamental quando se tem por objetivo controlar e/ou erradicar o BoHV-1 do rebanho.

This study aimed to evaluate the antibody titers of calves from zero to twelve months in three properties, with low, medium and high prevalence of BoHV-1. Sera were collected periodically, analyzed and titrated by virus neutralization test. In herd with low BoHV-1 prevalence, there was not difference in antibody titers from colostrum in calves born from cows vaccinated or not against BoHV-1. In herds with medium and high BoHV-1 prevalence, antibody titers were greater in calves born from cows positive and vaccinated against BoHV-1. The zootechnical evaluation showed that calves well-managed in relation to hygiene and quality of feed do not get infected in any type of BoHV-1 situation prevalence. Thus, the management is essential when it aims to control or eradicate the BoHV-1 from the herd.

Ocorrência dos genótipos g e p de rotavírus do grupo a em bezerros de rebanhos de corte no estado de são paulo, brasil

ABSTRACT The frequency of group A rotavirus and the molecular G and P characterization of strains in beef cattle were determined from July 2003 to July 2004, in herds of the state of São Paulo, Brazil. Samples came from 649 calves, aged between 1 and 60 days, from 14 beef cattle herds, regardless of clinical manifestation of diarrhea. A 64.3% (9/14) frequency of rotavirus among herds and 6.2% (40/649) among animals were detected by ELISA and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). The higher frequency infection was detected in animals aged between 16 and 30 days (10.5%). Rotavirus infection was diagnosed in animals with (25.8%; 22/85) or without (3.2%; 18/564) clinical signs of diarrhea. A correlation was found between the presence of infection and the clinical manifestation of diarrhea (p 0.05). PAGE analysis of the rotaviruss genome profile identified 7 distinct electropherotypes which indicated extensive genomic diversity of the rotavirus in the region under analysis. Genotyping by polymerase chain reaction (RT-PCR) of the rotavirus strains revealed the genotypes G6P[5], G6P[11], G6P[5]P[11] and G10P[11].

RESUMO Foi determinada a ocorrência de rotavírus do grupo A e a caracterização molecular G e P de estirpes detectadas em bezerros de rebanhos de corte em propriedades rurais do Estado de São Paulo, Brasil. Foram analisadas amostras de fezes de 649 bezerros de 14 rebanhos de corte com idade entre 1 e 60 dias, independentemente da manifestação clínica de diarréia, colhidas de julho de 2003 a julho de 2004. Por meio das técnicas de ELISA e de eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE), determinou-se a ocorrência de rotavírus do grupo A em 64,3% (09/14) dos rebanhos e em 6,2% (40/649) dos animais. A maior freqüência de infecção foi detectada em animais com idade entre 16 e 30 dias (10,5%). Foram diagnosticados bezerros infectados por rotavírus tanto em animais com sinais clínicos de diarréia (25,8%; 22/85) quanto naqueles assintomáticos (3,2%; 18/ 564), existindo, porém, uma correlação entre a presença da infecção e a manifestação clínica da diarréia (p 0,01). A análise do perfil do genoma do rotavírus por PAGE identificou sete eletroferótipos distintos, indicando grande diversidade genômica dos rotavírus na região estudada. A genotipagem pela reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) das amostras de rotavírus revelou que as estirpes circulantes nos rebanhos eram G6P[5], G6P[11], G6P[5]P[11] e G10P[11].

Avaliação da imunidade passiva em bezerros nascidos de vacas imunizadas com vacina contra rotavírus / Evaluation of passive immunity in calves born from cows immunized with anti-rotavirus vaccine

Com o objetivo de monitorar a imunidade passiva em bezerros alimentados com colostro de vacas imunizadas e não imunizadas com vacina contra rotavírus, foram determinados títulos de anticorpos em amostras de sangue e colostro de 26 vacas da raça Holandesa no dia do parto e de seus bezerros, à zero, às 24, 48 horas e aos sete, 14, 21, 28 dias de idade, pelo ensaio imunoenzimático. Tanto no soro sangüíneo como no colostro, os títulos dos isótipos IgG, IgG1 e IgG2 foram mais elevados no grupo dos animais vacinados, porém somente no colostro o aumento foi significativo. Os bezerros alimentados com o colostro das vacas vacinadas apresentaram títulos mais altos dos isótipos IgG, IgG1, IgG2, IgA e IgM, após a ingestão do colostro, sendo constatado aumento significativo apenas para os títulos do isótipo IgG2. Amostras positivas para rotavírus foram detectadas nos dois grupos experimentais a partir dos sete dias de idade. A vacinação materna não protegeu efetivamente os bezerros das infecções naturais por rotavírus, pois, apesar de aumentar os títulos séricos de anticorpos anti-rotavírus nos animais vacinados, não foi capaz de impedir a ocorrência da rotavirose nos bezerros alimentados com o colostro das vacas imunizadas.

Passive immune response in calves fed colostrum from immunized and nonimmunized cows by anti-rotavirus vaccine was monitored. Titers of antibodies were determined by immunoenzymatic assay in blood and colostrum sampled at parturition day from 26 Holstein cows as well as in blood from their calves collected at 0, 24, and 48 hours and seven, 14, 21, and 28 days after birth. In serum and colostrum, IgG, IgG1, and IgG2 antibody titers were higher in vaccinated animals; however, this increase was only significant in colostrum. The calves fed colostrum from vaccinated cows showed higher IgG, IgG1, IgG2, IgA, and IgM isotypes titers after the ingestion of colostrum, being evidenced significant increase only for IgG2 titers. Positive samples for rotavirus were detected in both experimental groups since seven days after birth. Results showed that maternal vaccine failed to protect effectively the calves from natural infections by rotavirus, though it increased the anti-rotavirus antibody titers in vaccinated animals, but was not capable to impair the occurrence of rotaviruses in the calves fed colostrum from immunized cows.