Actividad inhibitoria de extractos y aceites esenciales de especies condimentarias, alimenticias y medicinales contra Campylobacter jejuni / Inhibitory activity of extracts and essential oils of species seasoning, nutritional and medicinal against Campylobacter jejuni

Los agentes químicos son los métodos de conservación más usados, pero no cumplen con el concepto de natural o seguro demandado por los consumidores, ya que algunos presentan cierta toxicidad. Por eso la industria busca antimicrobianos naturales para la conservación de alimentos. El propósito fue evaluar la actividad contra Campylobacter jejuni ATCC 33291 y dos aislamientos clínicos (C. jejuni UVG 62-1773-6 y C. coli UVG 62-1769-9) de extractos diclorometánico (ED), metanólico (EM) y aceite esencial (AE) de Cornutia grandifolia, Eryngium foetidum, Fernaldia pandurata, Lippia alba L. chiapasensis, L. graveolens, Ocimum micranthum, Pimienta dioica, Piper auritum, P.jacquemontianum, Psidiumguajava y Tagetes lucida.

Bladder injection of "naked" hSlo/pcDNA3 ameliorates detrusor hyperactivity in obstructed rats in vivo.

The goal of these studies was to examine the potential utility of bladder instilled K+ channel gene therapy with hSlo cDNA (i.e., the maxi-K channel) to ameliorate bladder overactivity in a rat model of partial urinary outlet obstruction. Twenty-two female Sprague-Dawley rats were subjected to partial urethral (i.e., outlet) obstruction, with 17 sham-operated control rats run in parallel. After 6 wk of obstruction, suprapubic catheters were surgically placed in the dome of the bladder in all rats. Twelve obstructed rats received bladder instillation of 100 microg of hSlo/pcDNA in 1 ml PBS during catheterization, and another 10 obstructed rats received 1 ml PBS (7 rats) or 1 ml PBS containing pcDNA only (3 rats). Two days after surgery cystometry was performed on all animals to examine the characteristics of the micturition reflex in conscious and unrestrained rats. Obstruction was associated with a three- to fourfold increase in bladder weight and alterations in virtually every micturition parameter estimate. PBS-injected obstructed rats routinely displayed spontaneous bladder contractions between micturitions. In contrast, hSlo injection eliminated the obstruction-associated bladder hyperactivity, without detectably affecting any other cystometric parameter. Presumably, expression of hSlo in rat bladder functionally antagonizes the increased contractility normally observed in obstructed animals and thereby ameliorates bladder overactivity. These initial observations indicate a potential utility of gene therapy for urinary incontinence.

Significant physiological roles of ancillary penile nerves on increase in intracavernous pressure in rats: experiments using electrical stimulation of the medial preoptic area.

The objectives of this work were to evaluate the contributions of the ancillary penile nerves to penile erection in male rats in vivo. We investigated the effects of unilateral and bilateral transection of the cavernous nerve (main penile nerve) on the increase in intracavernous pressure (ICP) following electrical stimulation of the medial preoptic area (MPOA) in male rats in vivo. After unilateral or bilateral transection of the cavernous nerve (main penile nerve), the ICP responses showed decreases of 28% and 55%, respectively compared to those ICP responses before transection. In other words, even after bilateral transection of the cavernous nerve, significant increases in the ICP response following central stimulation were observed. In contrast to these findings, the ICP response was completely eliminated following bilateral pelvic nerve transection. These data suggested that the ancillary penile nerves, which originate from the major pelvic ganglia, have a complementary role to the cavernous nerves in the autonomic motor innervation of the penis.

La inducción de alcohol oxidasa en levaduras metilotróficas / Induction of alcohol oxidase in methylotrophic yeasts

Se reporta el desarrollo de un micrométodo para la determinación de la actividad de la alcohol oxidasa en levaduras metilotróficas, basado en la gran cantidad de enzima que se acumula en estos microorganismos al crecerlos en presencia de metanol. El método es una modificación del anteriormente reportado por Ellis et al. (1985). La proporción de alcohol oxidasa en extractos celulares de Pichia pastoris y Hansenula polimorpha resultó ser muy alta: 32

y 34

de la proteina total respectivamente. La inducción de la enzima ocurre como parte de una respuesta fidiológica general al metanol, que incluye la inducción de otras proteinas y un aumento en el número y tamaño de los peroxisomas. Para obtener una alta actividad de alcohol oxidasa es necesario considerar tres parámetros sencillos: el tiempo de crecimiento en condiciones de represión, la densidad óptica en el momento de la inducción y la duración de la inducción (AU)

La inducción de alcohol oxidasa en levaduras metilotróficas / Induction of alcohol oxidase in methylotrophic yeasts

Se reporta el desarrollo de un micrométodo para la determinación de la actividad de la alcohol oxidasa en levaduras metilotróficas, basado en la gran cantidad de enzima que se acumula en estos microorganismos al crecerlos en presencia de metanol. El método es una modificación del anteriormente reportado por Ellis et al. (1985). La proporción de alcohol oxidasa en extractos celulares de Pichia pastoris y Hansenula polimorpha resultó ser muy alta: 32 % y 34 % de la proteina total respectivamente. La inducción de la enzima ocurre como parte de una respuesta fidiológica general al metanol, que incluye la inducción de otras proteinas y un aumento en el número y tamaño de los peroxisomas. Para obtener una alta actividad de alcohol oxidasa es necesario considerar tres parámetros sencillos: el tiempo de crecimiento en condiciones de represión, la densidad óptica en el momento de la inducción y la duración de la inducción

Expresión de interferones humanos en E. coli / Expression of human interferons in E. coli

Los genes codificantes para los interferones alfa-2 y gamma humanos fueron clonados y expresados eficientemente bajo el control del promotor triptófano de E. coli. La adición de una señal de terminación de la transcripción en ambos ARNn dió como resultado un aumento de la expresión de las respectivas proteinas (AU)

Expresión de interferones humanos en E. coli / Expression of human interferons in E. coli

Los genes codificantes para los interferones alfa-2 y gamma humanos fueron clonados y expresados eficientemente bajo el control del promotor triptófano de E. coli. La adición de una señal de terminación de la transcripción en ambos ARNn dió como resultado un aumento de la expresión de las respectivas proteinas

Production and characterization of human gamma interferon from Escherichia coli.

The production of human gamma interferon as intracellular inclusion bodies in Escherichia coli, which simplified the purification process, is described. An expression plasmid carrying lipoprotein and the tryptophane promoters in tandem was used. Preparation of highly pure interferon was achieved using high resolution chromatography after denaturation and renaturation steps. Structural characteristics of this protein were verified by mass spectrometric analysis. Additional control tests have shown the suitability of the final product for clinical purposes.

Biologicals production by recombinant DNA technology in Cuba.

During 1981 we started an intensive programme for the development of biotechnology in Cuba. The first project was related to the production of leucocyte interferon and the cloning an expression of these genes in prokaryotic and yeast cells. These products are currently obtained in large amounts and their physical and chemical characterization are presented. The use of mammalian cells in culture for the production of recombinant proteins has also been carried out. The results obtained with the expression and amplification of the hepatitis B surface antigen (HBsAg) in CHO cells are discussed and compared with that obtained in yeast. The construction of a recombinant vaccinia virus carrying the HBsAg was also achieved. The specific transcripts were characterized and the Ab levels tested in animals. The results presented here indicate that the host system is a very important aspect to be taken into consideration and in some cases mammalian cells appear to be the best choice.

Inmunización primaria in vitro de linfocitos de ratón para la obtención de hibridomas B / In vitro primary immunization of mouse lymphocytes for the obtention of B hybridomas

Las células esplénicas de ratones BALB/c se sometieron a un proceso de inmunización primaria en cultivo, empleando como antígeno el factor de crecimiento epidérmico humano recombinante, y el sobrenadante de cultivos mixtos de timocitos de ratón como fuente estimuladora de activación y progresión. En algunos experimentos se evaluó el efecto del sobrenadante de células endoteliales humanas (HECS) durante el período de inmunización. Las células inmunizadas se hibridizaron con el mieloma P3/x63-Ag8-653 para obtener hibridomas. Por microscopía electrónica de trasmisión se siguieron los cambios morfológicos de los linfocitos durante los cinco días de inmunización in vitro, siendo estos característicos de la transformación de células quiescentes en altamente secretoras. Se demostró que la secreción de anticuerpo específico durante el período de inmunización no podía ser evaluada mediante un sistema ELISA con el antígeno, a causa de la gran reactividad cruzada inespecífica de IgM policlonales. El HECS estimuló, tanto la frecuencia de hibridización como la formación de hibridomas específicos. Se incluyó una batería de antígenos no relacionados durante el ensayo de los sobrenadantes de los hibridomas, con vistas a descartar las células secretoras de IgM de amplia reactividad cruzada. Todos los hibridomas específicos producían anticuerpos del tipo IgM.

Síntesis y secreción del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B en células de mamíferos / Synthesis and secretion of the hepatitis B surface antigen in mammalian cells

La infección por el virus de la hepatitis B (HBV), es uno de los problemas más serios de la humanidad. La utilización de células de mamíferos en cultivo para la producción de una vacuna contra el HBV, ofrece un conjunto de ventajas en comparación con otros sistemas celulares. Nosotros hemos producido el antígeno de superficie de la hepatitis tipo B (HBsAg) recombinante, en células CHO utilizando el sistema de amplificación DHFR/mtx. Se obtuvo una producción de 1 * HBsAg/10 a la 6 células/día, y el HBsAg recombinante fue caracterizado por microscopía electrónica y resultó similar a las partícyulas de HBsAg derivadas de plasma

Síntesis y secreción del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B en células de mamíferos / Synthesis and secretion of the hepatitis B surface antigen in mammalian cells

La infección por el virus de la hepatitis B (HBV), es uno de los problemas más serios de la humanidad. La utilización de células de mamíferos en cultivo para la producción de una vacuna contra el HBV, ofrece un conjunto de ventajas en comparación con otros sistemas celulares. Nosotros hemos producido el antígeno de superficie de la hepatitis tipo B (HBsAg) recombinante, en células CHO utilizando el sistema de amplificación DHFR/mtx. Se obtuvo una producción de 1 * HBsAg/10 a la 6 células/día, y el HBsAg recombinante fue caracterizado por microscopía electrónica y resultó similar a las partícyulas de HBsAg derivadas de plasma

Inmunización primaria in vitro de linfocitos de ratón para la obtención de hibridomas B / In vitro primary immunization of mouse lymphocytes for the obtention of B hybridomas

Las células esplénicas de ratones BALB/c se sometieron a un proceso de inmunización primaria en cultivo, empleando como antígeno el factor de crecimiento epidérmico humano recombinante, y el sobrenadante de cultivos mixtos de timocitos de ratón como fuente estimuladora de activación y progresión. En algunos experimentos se evaluó el efecto del sobrenadante de células endoteliales humanas (HECS) durante el período de inmunización. Las células inmunizadas se hibridizaron con el mieloma P3/x63-Ag8-653 para obtener hibridomas. Por microscopía electrónica de trasmisión se siguieron los cambios morfológicos de los linfocitos durante los cinco días de inmunización in vitro, siendo estos característicos de la transformación de células quiescentes en altamente secretoras. Se demostró que la secreción de anticuerpo específico durante el período de inmunización no podía ser evaluada mediante un sistema ELISA con el antígeno, a causa de la gran reactividad cruzada inespecífica de IgM policlonales. El HECS estimuló, tanto la frecuencia de hibridización como la formación de hibridomas específicos. Se incluyó una batería de antígenos no relacionados durante el ensayo de los sobrenadantes de los hibridomas, con vistas a descartar las células secretoras de IgM de amplia reactividad cruzada. Todos los hibridomas específicos producían anticuerpos del tipo IgM.