Conidiobolomicose em ovinos no Estado do Acre, Brasil / Conidiobolomycosis in sheep in the state of Acre, Brazil

A criação de ovinos tem expandido no mercado de carne e subprodutos no Brasil. A conidiobolomicose é uma zigomicose considerada uma doença emergente, que acomete humanos e animais. Por ser uma doença com letalidade alta e pela gravidade das lesões, ela causa perdas econômicas relevantes na ovinocultura. Este trabalho tem como objetivo descrever os aspectos epidemiológicos, clínicos, histopatológicos e microbiológicos da conidiobolomicose em um rebanho de ovinos no município de Porto Acre (AC). Descreve-se um surto de conidiobolomicose que ocorreu entre os meses de abril e julho de 2014. A propriedade possuía 60 ovinos da raça Santa Inês e cinco desses animais adoeceram. Clinicamente os animais doentes apresentavam dificuldade respiratória, corrimento nasal seroso a mucossanguinolento e, por vezes exoftalmia. Foram retirados fragmentos da lesão circunscrita do pulmão esquerdo dos ovinos necropsiados os quais foram submetidos à análise microbiológica e histopatológica. O fungo isolado apresentou caracterização macro e micromorfológica identificados como Conidiobolus lamprauges. Pelos sinais clínicos, achados epidemiológicos, análise histopatológica e, principalmente, pelo isolamento do agente, a enfermidade dos ovinos neste estudo foi identificada como conidiobolomicose causada por Conidiobolus lamprauges.(AU)

Sheep farming has expanded in the meat and by-products market in Brazil. Conidiobolomycosis is a zygomycosis considered an emerging disease, which affects humans and animals. Because it is a disease with high lethality and the severity of injuries, it causes significant economic losses in sheep farming. This work aims to describe the epidemiological, clinical, histopathological and microbiological aspects of conidiobolomycosis in a flock of sheep in Porto Acre city (Acre state of North Brazil). An outbreak of conidiobolomycosis occurred between April and July 2014. The property had 60 Santa Inês sheep and five of these animals became ill. Clinically, the sick animals had breathing difficulties, a serous to mucous-bloody runny nose and, at times, exophthalmos. Fragments of the circumscribed lesion of the left lung were removed from the necropsied sheep and submitted to microbiological and histopathological analysis. The isolated fungus showed macro and micromorphological characterization identified as Conidiobolus lamprauges. Due to clinical signs, epidemiological findings, histopathological analysis and, mainly, the isolation of the agent, the disease of the sheep in this study was identified as conidiobolomycosis caused by Conidiobolus lamprauges.(AU)

Avaliação da eficiência de cal virgem na inativação de ovos de nematoides (Strongyloides sp. ) parasitos de pacas (Cuniculus paca) criadas em cativeiro / Evaluation of quicklime efficiency in inactivating nematode eggs (Strongyloides sp. ) parasites of paca (Cuniculus paca) created in captivity

Criadores de animais silvestres sempre buscam métodos eficientes de manter sua criação. Parasitos intestinais afetam os animais em cativeiro, diminuindo sua sobrevivência e reprodução. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia do uso de cal virgem na desinfecção do solo e na prevenção da reinfestação de endoparasitos em pacas (Cuniculus paca) em cativeiro. Amostras de solo das baias de criação foram analisadas usando-se o método de Rugai modificado. Duas etapas foram avaliadas: a primeira aos cinco, 45 e 105 minutos após os tratamentos, e a segunda aos sete dias e aos 14 dias após os tratamentos. Os valores de pH das amostras foram verificados após a aplicação de quatro tratamentos. Foram aplicados 400g/m2 de cal virgem a lanço ou 500mL/m2 de três soluções de cal virgem (10%, 20% ou 40% p/v). Na primeira etapa, a cal a lanço foi ineficaz na modificação do pH do solo e no controle de parasitos. A solução a 10% proporcionou o melhor controle dos parasitos. Na segunda etapa, as soluções foram eficazes na elevação do pH, porém não houve diferença significativa nos achados larvais. Concluiu-se que, nas condições do estudo, a solução a 10% aumentou o pH do solo e teve boa capacidade de inativação dos ovos de Strongyloides sp., o que economicamente é interessante. Porém, para o controle eficiente de Strongyloides sp. em cativeiros de pacas, deve-se considerar a frequência da aplicação de soluções com até 20% de cal, juntamente com a adoção de um programa de vermifugação.(AU)

Wild animal breeders are always looking for effective ways to care for their livestock. Intestinal parasites affect animals in captivity, reducing their survival and reproduction. This study aimed to evaluate the effectiveness of quicklime for use in soil disinfection and prevention of reinfection of endoparasites in paca (Cuniculus paca) kept in captivity. Soil samples of pacas' stalls were analyzed using the modified Rugai method. Two experimental stages were evaluated; the first at 5, 45 and 105 minutes after treatment and the second at 7 days and 14 days after treatment. The pH values of the samples were checked after the application of four treatments. An application of 400g/m2 of quicklime spread out on ground or 500mL/m2 of three lime solutions (10%, 20% or 40%, w / v) applied on ground. In the first stage, the lime spread out on soil was ineffective in parasites control, while the 10% solution provided the best control of parasites. In the second stage, the solutions were effective in raising the pH, but there was no significant difference in larval findings. In conclusion, under the conditions of the study, 10% solution increased the soil pH and had good ability to inactivate the eggs of Strongyloides sp.; that is economically interesting. However, for effective control of Strongyloides sp. in pacas kept captive, both the frequency of application of solutions up to 20% of lime and the adoption of a good worming schedule should be taken into consideration.(AU)

Avaliação da eficiência de cal virgem na inativação de ovos de nematoides (Strongyloides sp. ) parasitos de pacas (Cuniculus paca) criadas em cativeiro / Evaluation of quicklime efficiency in inactivating nematode eggs (Strongyloides sp. ) parasites of paca (Cuniculus paca) created in captivity

Criadores de animais silvestres sempre buscam métodos eficientes de manter sua criação. Parasitos intestinais afetam os animais em cativeiro, diminuindo sua sobrevivência e reprodução. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia do uso de cal virgem na desinfecção do solo e na prevenção da reinfestação de endoparasitos em pacas (Cuniculus paca) em cativeiro. Amostras de solo das baias de criação foram analisadas usando-se o método de Rugai modificado. Duas etapas foram avaliadas: a primeira aos cinco, 45 e 105 minutos após os tratamentos, e a segunda aos sete dias e aos 14 dias após os tratamentos. Os valores de pH das amostras foram verificados após a aplicação de quatro tratamentos. Foram aplicados 400g/m2 de cal virgem a lanço ou 500mL/m2 de três soluções de cal virgem (10%, 20% ou 40% p/v). Na primeira etapa, a cal a lanço foi ineficaz na modificação do pH do solo e no controle de parasitos. A solução a 10% proporcionou o melhor controle dos parasitos. Na segunda etapa, as soluções foram eficazes na elevação do pH, porém não houve diferença significativa nos achados larvais. Concluiu-se que, nas condições do estudo, a solução a 10% aumentou o pH do solo e teve boa capacidade de inativação dos ovos de Strongyloides sp., o que economicamente é interessante. Porém, para o controle eficiente de Strongyloides sp. em cativeiros de pacas, deve-se considerar a frequência da aplicação de soluções com até 20% de cal, juntamente com a adoção de um programa de vermifugação.(AU)

Wild animal breeders are always looking for effective ways to care for their livestock. Intestinal parasites affect animals in captivity, reducing their survival and reproduction. This study aimed to evaluate the effectiveness of quicklime for use in soil disinfection and prevention of reinfection of endoparasites in paca (Cuniculus paca) kept in captivity. Soil samples of pacas' stalls were analyzed using the modified Rugai method. Two experimental stages were evaluated; the first at 5, 45 and 105 minutes after treatment and the second at 7 days and 14 days after treatment. The pH values of the samples were checked after the application of four treatments. An application of 400g/m2 of quicklime spread out on ground or 500mL/m2 of three lime solutions (10%, 20% or 40%, w / v) applied on ground. In the first stage, the lime spread out on soil was ineffective in parasites control, while the 10% solution provided the best control of parasites. In the second stage, the solutions were effective in raising the pH, but there was no significant difference in larval findings. In conclusion, under the conditions of the study, 10% solution increased the soil pH and had good ability to inactivate the eggs of Strongyloides sp.; that is economically interesting. However, for effective control of Strongyloides sp. in pacas kept captive, both the frequency of application of solutions up to 20% of lime and the adoption of a good worming schedule should be taken into consideration.(AU)

Marcadores de proliferação celular no tumor venéreo transmissível canino transplantado / Cell proliferation markers in the transplanted canine transmissible venereal tumor

Adult male mongrel dogs were subcutaneously transplanted with the canine transmissible venereal tumor (TVT) on the hypogastric region. Twelve specimens of tumors were collected, half during the proliferative phase and the other half during the regressive phase. Fragments of the tumor were fixed in 10 percent buffered formalin and routinely processed for light microscopy. Sections of 4µm were stained by Schorr or AgNOR or either immunostained for MIB1 (Ki67). Schorr stain, AgNOR and MIB1 showed an increased proliferative activity through mitotic index, nuclear argyrophilic protein stain and cycling tumoral cells in the growing tumors, respectively. All of the three cell proliferation markers were able to distinguish the TVT in both evolution phases. MIB1 monoclonal antibody was the best in the morphologic evaluation of growth and regression of TVT. This resulted in higher values than AgNORs counting and mitotic index. MIB1 immunostaining was the most effective parameter of the proliferative activity of TVT. However, a significant correlation has been detected only between mitosis counting and AgNORs.(AU)

Cães machos, adultos, mestiços, foram transplantados com células do tumor venéreo transmissível canino (TVTC), na região hipogástrica. Foram coletados doze espécimes do TVTC, sendo metade durante a fase proliferativa e metade durante a fase regressiva. Fragmentos do tumor foram fixados em formol a 10 por cento, tamponado e processado rotineiramente para microscopia de luz. Secções de 4µm foram coradas pelo Shorr, ou pela AgNOR, ou ainda, imunocorado para MIB 1 (Ki67). As colorações pelo Shorr, AgNOR, ou MIB 1 mostraram um aumento do índice mitótico, coloração da proteína argirofílica nuclear e células tumorais ciclando em tumores em crescimento, respectivamente. Todos os três marcadores de proliferação celular foram capazes de distinguir o TVTC em ambas as fases de evolução. O anticorpo monoclonal MIB 1 foi o melhor na avaliação morfológica, de crescimento e regressão do TVTC. Isto resultou em um valor maior que a contagem de AgNOR e do índice mitótico. A imunomarcação com MIB1 foi o parâmetro mais efetivo da atividade proliferativa. No entanto, só foi observada uma correlação positiva entre a contagem de mitose e a AgNOR.(AU)

Cell proliferation markers in the transplanted canine transmissible venereal tumor / Marcadores de proliferação celular no tumor venéreo transmissível canino transplantado

Adult male mongrel dogs were subcutaneously transplanted with the canine transmissible venereal tumor (TVT) on the hypogastric region. Twelve specimens of tumors were collected, half during the proliferative phase and the other half during the regressive phase. Fragments of the tumor were fixed in 10 percent buffered formalin and routinely processed for light microscopy. Sections of 4µm were stained by Schorr or AgNOR or either immunostained for MIB1 (Ki67). Schorr stain, AgNOR and MIB1 showed an increased proliferative activity through mitotic index, nuclear argyrophilic protein stain and cycling tumoral cells in the growing tumors, respectively. All of the three cell proliferation markers were able to distinguish the TVT in both evolution phases. MIB1 monoclonal antibody was the best in the morphologic evaluation of growth and regression of TVT. This resulted in higher values than AgNORs counting and mitotic index. MIB1 immunostaining was the most effective parameter of the proliferative activity of TVT. However, a significant correlation has been detected only between mitosis counting and AgNORs.

Cães machos, adultos, mestiços, foram transplantados com células do tumor venéreo transmissível canino (TVTC), na região hipogástrica. Foram coletados doze espécimes do TVTC, sendo metade durante a fase proliferativa e metade durante a fase regressiva. Fragmentos do tumor foram fixados em formol a 10 por cento, tamponado e processado rotineiramente para microscopia de luz. Secções de 4µm foram coradas pelo Shorr, ou pela AgNOR, ou ainda, imunocorado para MIB 1 (Ki67). As colorações pelo Shorr, AgNOR, ou MIB 1 mostraram um aumento do índice mitótico, coloração da proteína argirofílica nuclear e células tumorais ciclando em tumores em crescimento, respectivamente. Todos os três marcadores de proliferação celular foram capazes de distinguir o TVTC em ambas as fases de evolução. O anticorpo monoclonal MIB 1 foi o melhor na avaliação morfológica, de crescimento e regressão do TVTC. Isto resultou em um valor maior que a contagem de AgNOR e do índice mitótico. A imunomarcação com MIB1 foi o parâmetro mais efetivo da atividade proliferativa. No entanto, só foi observada uma correlação positiva entre a contagem de mitose e a AgNOR.

Cell proliferation markers in the transplanted canine transmissible venereal tumor

Adult male mongrel dogs were subcutaneously transplanted with the canine transmissible venereal tumor (TVT) on the hypogastric region. Twelve specimens of tumors were collected, half during the proliferative phase and the other half during the regressive phase. Fragments of the tumor were fixed in 10% buffered formalin and routinely processed for light microscopy. Sections of 4µm were stained by Schorr or AgNOR or either immunostained for MIB1 (Ki67). Schorr stain, AgNOR and MIB1 showed an increased proliferative activity through mitotic index, nuclear argyrophilic protein stain and cycling tumoral cells in the growing tumors, respectively. All of the three cell proliferation markers were able to distinguish the TVT in both evolution phases. MIB1 monoclonal antibody was the best in the morphologic evaluation of growth and regression of TVT. This resulted in higher values than AgNORs counting and mitotic index. MIB1 immunostaining was the most effective parameter of the proliferative activity of TVT. However, a significant correlation has been detected only between mitosis counting and AgNORs.

Cães machos, adultos, mestiços, foram transplantados com células do tumor venéreo transmissível canino (TVTC), na região hipogástrica. Foram coletados doze espécimes do TVTC, sendo metade durante a fase proliferativa e metade durante a fase regressiva. Fragmentos do tumor foram fixados em formol a 10%, tamponado e processado rotineiramente para microscopia de luz. Secções de 4µm foram coradas pelo Shorr, ou pela AgNOR, ou ainda, imunocorado para MIB 1 (Ki67). As colorações pelo Shorr, AgNOR, ou MIB 1 mostraram um aumento do índice mitótico, coloração da proteína argirofílica nuclear e células tumorais ciclando em tumores em crescimento, respectivamente. Todos os três marcadores de proliferação celular foram capazes de distinguir o TVTC em ambas as fases de evolução. O anticorpo monoclonal MIB 1 foi o melhor na avaliação morfológica, de crescimento e regressão do TVTC. Isto resultou em um valor maior que a contagem de AgNOR e do índice mitótico. A imunomarcação com MIB1 foi o parâmetro mais efetivo da atividade proliferativa. No entanto, só foi observada uma correlação positiva entre a contagem de mitose e a AgNOR.

Apoptosis in the transplanted canine transmissible venereal tumor during growth and regression phases / Apoptose no tumor venéreo transmissível canino durante as fases de crescimento e regressão

Twelve male, mongrel, adult dogs were subcutaneously transplanted with cells originated from two canine transmissible venereal tumors (TVT). The aim was to demonstrate and to quantify the occurrence of apoptosis in the TVT regression. After six months of transplantation, a tumor sample was obtained from each dog, being six dogs with TVT in the growing phase and six in the regression phase as verified by daily measurements. Samples were processed for histological and ultrastructural purposes as well as for DNA extraction. Sections of 4µm were stained by HE, Shorr, methyl green pyronine, Van Gieson, TUNEL reaction and immunostained for P53. The Shorr stained sections went through morphometry that demonstrated an increase of the apoptotic cells per field in the regressive tumors. It was also confirmed by transmission electron microscopy, which showed cells with typical morphology of apoptosis and by the TUNEL reaction that detected in situ the 3'OH nick end labeling mainly in the regressive tumors. The regressive TVTs also showed an intensified immunostaining for P53 besides a more intense genomic DNA fragmentation detected by the agarose gel electrophoresis. In conclusion, apoptosis has an important role in the regression of the experimental TVT in a way that is P53-dependent.(AU)

Doze cães, adultos, machos e sem raça definida foram transplantados subcutaneamente, na região hipogástrica, com células originadas de dois tumores venéreos transmissíveis caninos (TVT). O objetivo do estudo foi demonstrar e quantificar a ocorrência de apoptose na regressão do TVT. Após seis meses, foi obtido um tumor de cada animal, totalizando seis em crescimento e seis em regressão. Fragmentos dos tumores foram processados para avaliação histológica, ultra-estrutural e também para extração de DNA. Cortes de 4µm foram corados em HE, Shorr, verde de metila pironina e Van Gieson e alguns foram submetidos à reação do TUNEL e à imunoistoquímica para P53. Secções coradas pelo Shorr, submetidas à morfometria, demonstram maior índice apoptótico nos tumores em regressão. Esse achado foi confirmado pela microscopia eletrônica de transmissão que evidenciou células com morfologia típica de apoptose e pela reação de TUNEL que marcou mais células nos tumores em regressão que naqueles em crescimento. A imunomarcação para P53 foi mais intensa nos tumores em regressão, assim como a fragmentação internucleossômica do genoma mostrada pela eletroforese em gel de agarose. Concluiu-se que a apoptose tem importante papel na regressão do TVT transplantado experimentalmente, sendo, nesse caso, dependente de P53 para a sua execução.(AU)

Apoptosis in the transplanted canine transmissible venereal tumor during growth and regression phases / Apoptose no tumor venéreo transmissível canino durante as fases de crescimento e regressão

Twelve male, mongrel, adult dogs were subcutaneously transplanted with cells originated from two canine transmissible venereal tumors (TVT). The aim was to demonstrate and to quantify the occurrence of apoptosis in the TVT regression. After six months of transplantation, a tumor sample was obtained from each dog, being six dogs with TVT in the growing phase and six in the regression phase as verified by daily measurements. Samples were processed for histological and ultrastructural purposes as well as for DNA extraction. Sections of 4µm were stained by HE, Shorr, methyl green pyronine, Van Gieson, TUNEL reaction and immunostained for P53. The Shorr stained sections went through morphometry that demonstrated an increase of the apoptotic cells per field in the regressive tumors. It was also confirmed by transmission electron microscopy, which showed cells with typical morphology of apoptosis and by the TUNEL reaction that detected in situ the 3'OH nick end labeling mainly in the regressive tumors. The regressive TVTs also showed an intensified immunostaining for P53 besides a more intense genomic DNA fragmentation detected by the agarose gel electrophoresis. In conclusion, apoptosis has an important role in the regression of the experimental TVT in a way that is P53-dependent.

Doze cães, adultos, machos e sem raça definida foram transplantados subcutaneamente, na região hipogástrica, com células originadas de dois tumores venéreos transmissíveis caninos (TVT). O objetivo do estudo foi demonstrar e quantificar a ocorrência de apoptose na regressão do TVT. Após seis meses, foi obtido um tumor de cada animal, totalizando seis em crescimento e seis em regressão. Fragmentos dos tumores foram processados para avaliação histológica, ultra-estrutural e também para extração de DNA. Cortes de 4µm foram corados em HE, Shorr, verde de metila pironina e Van Gieson e alguns foram submetidos à reação do TUNEL e à imunoistoquímica para P53. Secções coradas pelo Shorr, submetidas à morfometria, demonstram maior índice apoptótico nos tumores em regressão. Esse achado foi confirmado pela microscopia eletrônica de transmissão que evidenciou células com morfologia típica de apoptose e pela reação de TUNEL que marcou mais células nos tumores em regressão que naqueles em crescimento. A imunomarcação para P53 foi mais intensa nos tumores em regressão, assim como a fragmentação internucleossômica do genoma mostrada pela eletroforese em gel de agarose. Concluiu-se que a apoptose tem importante papel na regressão do TVT transplantado experimentalmente, sendo, nesse caso, dependente de P53 para a sua execução.

Marcadores de proliferação celular na avaliação do crescimento do tumor sólido e ascítico de Ehrlich / Cell proliferation markers for evaluating the growth of solid and ascitic forms of Ehrlich tumor

Twenty BALB/c mice were inoculated with cell suspension of Ehrlich tumor. Ten mice were inoculated in the cushion plant (solid form) and the other 10 in the peritoneum (ascitic form). Animals were euthanized on different times (7 and 14 days). Cytological and histological slides, immunohistochemical (PCNA) analysis and NORs silver impregnation technique were performed. The results showed more proliferation on the 7th day in the ascitic form and on 14th day in the solid form, using both analyses (PCNA and AgNORs). The alterations observed in the Ehrlich tumors proliferation activity suggested that the growth curve is different between ascitic and solid forms. In the first one, the proliferation peak occurs on the seventh day and in the solid tumor the growth curve was more delayed, showing increased proliferative potential after seven days.(AU)

Morphometric analysis of the thymus of puppies infected with the Snyder Hill Strain of canine distemper virus / Análise morfométrica do timo de cães filhotes infectados com a amostra Snyder Hill do vírus de cinomose canina

The thymic morphometry analysis was used for determining apoptosis and atrophy of the thymus of eight puppies inoculated with canine distemper virus (CDV). Three healthy dogs were used as negative controls. Sections, 5µm thick, were stained by HE and Shorr, and the latter were evaluated by morphometry. CDV nucleoprotein was detected by immunohistochemistry. Morphometric results confirmed lymphoid hypotrophy in CDV inoculated dog thymuses, more stroma, less parenchyma and higher apoptotic index/field than negative control (not inoculated) puppies. Apoptosis plays a role in the mechanism of thymus atrophy that develops in canine distemper.(AU)

Determinaram-se a apoptose e a atrofia no timo de oito cães novos, inoculados experimentalmente com o vírus de cinomose. Três cães saudáveis foram usados como controle negativo. Secções coradas pelo Shorr foram avaliadas por morfometria. A nucleoproteína viral foi detectada por imunoistoquímica. Os resultados morfométricos confirmaram a hipotrofia e mostraram que o timo dos cães inoculados tinha mais estroma, menos parênquima e maior índice apoptótico/campo que o dos animais-controle. Pode–se concluir que a apoptose desempenha importante papel no mecanismo de hipotrofia tímica que se desenvolve na cinomose.(AU)

Morphometric analysis of the thymus of puppies infected with the Snyder Hill Strain of canine distemper virus / Análise morfométrica do timo de cães filhotes infectados com a amostra Snyder Hill do vírus de cinomose canina

The thymic morphometry analysis was used for determining apoptosis and atrophy of the thymus of eight puppies inoculated with canine distemper virus (CDV). Three healthy dogs were used as negative controls. Sections, 5æm thick, were stained by HE and Shorr, and the latter were evaluated by morphometry. CDV nucleoprotein was detected by immunohistochemistry. Morphometric results confirmed lymphoid hypotrophy in CDV inoculated dog thymuses, more stroma, less parenchyma and higher apoptotic index/field than negative control (not inoculated) puppies. Apoptosis plays a role in the mechanism of thymus atrophy that develops in canine distemper.

Determinaram-se a apoptose e a atrofia no timo de oito cães novos, inoculados experimentalmente com o vírus de cinomose. Três cães saudáveis foram usados como controle negativo. Secções coradas pelo Shorr foram avaliadas por morfometria. A nucleoproteína viral foi detectada por imunoistoquímica. Os resultados morfométricos confirmaram a hipotrofia e mostraram que o timo dos cães inoculados tinha mais estroma, menos parênquima e maior índice apoptótico/campo que o dos animais-controle. Pode-se concluir que a apoptose desempenha importante papel no mecanismo de hipotrofia tímica que se desenvolve na cinomose.

Marcadores de proliferação celular na avaliação do crescimento do tumor sólido e ascítico de Ehrlich / Cell proliferation markers for evaluating the growth of solid and ascitic forms of Ehrlich tumor

Twenty BALB/c mice were inoculated with cell suspension of Ehrlich tumor. Ten mice were inoculated in the cushion plant (solid form) and the other 10 in the peritoneum (ascitic form). Animals were euthanized on different times (7 and 14 days). Cytological and histological slides, immunohistochemical (PCNA) analysis and NORs silver impregnation technique were performed. The results showed more proliferation on the 7th day in the ascitic form and on 14th day in the solid form, using both analyses (PCNA and AgNORs). The alterations observed in the Ehrlich tumorÆs proliferation activity suggested that the growth curve is different between ascitic and solid forms. In the first one, the proliferation peak occurs on the seventh day and in the solid tumor the growth curve was more delayed, showing increased proliferative potential after seven days.

Determination of the minimal representative number of microscopic fields to quantify apoptosis in canine lymph nodes / Determinação do número mínimo representativo de campos microscópicos para quantificar apoptose em linfonodos caninos

Determinou-se o número mínimo de campos por lâmina para se ter uma amostragem representativa para o estudo de apoptose em linfonodos de cães com cinomose. Um linfonodo traqueobrônquico de cão foi colhido e processado segundo técnica para inclusão em parafina. Secções de 5µm foram coradas pelo tricrômico de Shorr. Utilizou-se um analisador de imagens para registrar o número de células em apoptose e os índices apoptóticos de 300 campos, na mesma lâmina. Obtiveram-se, então, valores médios para 10 amostras de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50 campos ao acaso. Realizou-se o estudo dos desvios-padrão das médias (DP) em relação ao tamanho da amostra que os originou. Quando as oscilações de DP entre amostras consecutivas foram menores que 5%, o ganho em representatividade produzido pelo acréscimo no número de campos não se justificou, dispensando amostragens maiores. Desse modo, a análise de 40 campos por lâmina, na pesquisa de índices apoptóticos em linfonodos caninos, é suficientemente representativa, uma vez que apresenta instabilidade aceitável.(AU)

Determination of the minimal representative number of microscopic fields to quantify apoptosis in canine lymph nodes

Determinou-se o número mínimo de campos por lâmina para se ter uma amostragem representativa para o estudo de apoptose em linfonodos de cães com cinomose. Um linfonodo traqueobrônquico de cão foi colhido e processado segundo técnica para inclusão em parafina. Secções de 5æm foram coradas pelo tricrômico de Shorr. Utilizou-se um analisador de imagens para registrar o número de células em apoptose e os índices apoptóticos de 300 campos, na mesma lâmina. Obtiveram-se, então, valores médios para 10 amostras de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50 campos ao acaso. Realizou-se o estudo dos desvios-padrão das médias (DP) em relação ao tamanho da amostra que os originou. Quando as oscilações de DP entre amostras consecutivas foram menores que 5 por cento, o ganho em representatividade produzido pelo acréscimo no número de campos não se justificou, dispensando amostragens maiores. Desse modo, a análise de 40 campos por lâmina, na pesquisa de índices apoptóticos em linfonodos caninos, é suficientemente representativa, uma vez que apresenta instabilidade aceitável.

Apoptosis in the cerebellum of dogs with distemper.

Canine distemper virus (CDV) may induce multifocal demyelination in the central nervous system of infected dogs. The pathogenesis of this process is not clear. The present work identifies the presence of apoptotic cells in white and grey matter of dogs'cerebellum, naturally infected with CDV. Fifteen dogs with clinical signs of canine distemper that tested positive for CDV nucleoprotein were used. Brain specimens were processed and embedded in paraffin. Sections 5 microm thick were stained with hematoxylin-eosin and Shorr. Other sections were submitted to TUNEL reaction and to immunohistochemistry for CDV nucleoprotein detection. Acute and chronic demyelinated plaques were observed in the white matter, while apoptosis occurred particularly in the granular layer of grey matter. Apoptosis seems to play an important role in the pathogenesis of canine distemper demyelination.

Porcentagem de parênquima e índice apoptótico da bolsa cloacal em frangos de corte em ambiente de conforto e estresse térmico / Parenchymal percentage and apoptotic index of cloacal bursa of broiler chickens maintained in thermal comfort or stress

Noventa e seis pintos de corte foram mantidos em diferentes temperaturas ambientais (calor, 29ºC; neutro, 24ºC; frio, 15ºC) e oito aves de cada grupo de temperatura (tratamento) foram sacrificadas nos dias 1, 7, 14, 21, 28, 35 e 42, e suas bolsas cloacais (BC) coletadas e processadas segundo técnica de rotina para inclusão em parafina. Cortes de 4m m, corados em HE, foram submetidos à análise histométrica utilizando-se o programa Kontron KS300, V 2.0. De cada corte foram mensurados a porcentagem de parênquima e o índice apoptótico nas BC. As médias da porcentagem de parênquima nas BC das aves com cinco semanas foram significativamente menores quando mantidas em ambiente frio (53,0%), quando comparadas com as do ambiente neutro (78,5%). As médias do índice apoptótico foram significativamente maiores nas BC de aves mantidas no ambiente frio (0,26), em relação às do neutro (0,12). Conclui-se que o estresse térmico induz apoptose de linfócitos e, conseqüentemente, hipotrofia da bolsa cloacal, alterando sua maturação.(AU)

Ninety six broiler chickens were kept in climatic chambers and submitted to three different environmental temperatures 24h/day: 29ºC (hot), 24ºC (neutral) and 15ºC (cold). Eight chickens of each temperature group were sacrificed at 1, 7, 14, 21, 28, 35 and 42 days, and the cloacal bursae (CB) were collected, processed and embedded in paraffin. Sections were stained with HE and histometric evaluation was carried out. From each section, parenchyma ratio (PR) and apoptotic index (AI) were measured. The CB of five week-old chickens kept in lower temperature showed PR lower than CB of chickens kept in neutral temperature. The CB of five week-old chickens kept in lower temperature showed an AI greater than CB of chickens submitted to neutral temperature. The present study shows that environmental temperature stress induces lymphocytes apoptosis, cloacal bursae atrophy and affects CB maturation.(AU)

Porcentagem de parênquima e índice apoptótico da bolsa cloacal em frangos de corte em ambiente de conforto e estresse térmico / Parenchymal percentage and apoptotic index of cloacal bursa of broiler chickens maintained in thermal comfort or stress

Noventa e seis pintos de corte foram mantidos em diferentes temperaturas ambientais (calor, 29ºC; neutro, 24ºC; frio, 15ºC) e oito aves de cada grupo de temperatura (tratamento) foram sacrificadas nos dias 1, 7, 14, 21, 28, 35 e 42, e suas bolsas cloacais (BC) coletadas e processadas segundo técnica de rotina para inclusäo em parafina. Cortes de 4m m, corados em HE, foram submetidos à análise histométrica utilizando-se o programa Kontron KS300, V 2.0. De cada corte foram mensurados a porcentagem de parênquima e o índice apoptótico nas BC. As médias da porcentagem de parênquima nas BC das aves com cinco semanas foram significativamente menores quando mantidas em ambiente frio (53,0 por cento), quando comparadas com as do ambiente neutro (78,5 por cento). As médias do índice apoptótico foram significativamente maiores nas BC de aves mantidas no ambiente frio (0,26), em relaçäo às do neutro (0,12). Conclui-se que o estresse térmico induz apoptose de linfócitos e, conseqüentemente, hipotrofia da bolsa cloacal, alterando sua maturaçäo

Ocorrência de apoptose em leucócitos no esfregaço de sangue periférico e em sincícios na infecção in vivo pelo vírus da cinomose canina / Occurrence of apoptosis in leukocytes in the peripheral blood smear and in syncytia in canine distemper infection in vivo

The aim of this paper is to report the occurrence of apoptosis in peripheral blood leukocytes and in syncytia induced by experimental infection of dogs with canine distemper virus. Blood was collected from nine puppies that were inoculated with the Snyder Hill strain of CDV, and stained with May Grunwaldt-Giemsa. Dogs were necropsied and retropharyngeal lymph nodes were collected and processed for paraffin embedding. Five micrometers thick sections were stained with hematoxylin-eosin and methyl green pyronin. Other sections were submitted to TUNEL reaction for in situ detection of apoptosis, and immunohistochemistry to detect CDV antigen. Immunohistochemistry confirmed the presence of viral antigen. Syncytia were present in all retropharyngeal lymph nodes. Several syncytia contained apoptotic nuclei as detected by hematoxylin-eosin and methyl green pyronin stains. Apoptotic nuclei were labeled inside syncytia by the TUNEL reaction. Blood smear analyses indicated higher proportion of apoptotic leukocytes in the peripheral blood of infected dogs.(AU)

Ocorrência de apoptose em leucócitos no esfregaço de sangue periférico e em sincícios na infecçäo in vivo pelo vírus da cinomose canina / Occurrence of apoptosis in leukocytes in the peripheral blood smear and in syncytia in canine distemper infection in vivo

The aim of this paper is to report the occurrence of apoptosis in peripheral blood leukocytes and in syncytia induced by experimental infection of dogs with canine distemper virus. Blood was collected from nine puppies that were inoculated with the Snyder Hill strain of CDV, and stained with May Grunwaldt-Giemsa. Dogs were necropsied and retropharyngeal lymph nodes were collected and processed for paraffin embedding. Five micrometers thick sections were stained with hematoxylin-eosin and methyl green pyronin. Other sections were submitted to TUNEL reaction for in situ detection of apoptosis, and immunohistochemistry to detect CDV antigen. Immunohistochemistry confirmed the presence of viral antigen. Syncytia were present in all retropharyngeal lymph nodes. Several syncytia contained apoptotic nuclei as detected by hematoxylin-eosin and methyl green pyronin stains. Apoptotic nuclei were labeled inside syncytia by the TUNEL reaction. Blood smear analyses indicated higher proportion of apoptotic leukocytes in the peripheral blood of infected dogs

Apoptose no tumor venéreo transmissível canino: características morfológicas e evidenciaçäo bioquímica / Apoptosis in the canine transmissible venereal tumor: morphological features and biochemical evidence

Fragmentos de tumor venéreo transmissível canino (TVTC) de ocorrência natural, com localizaçäo genital, foram obtidos de cinco animais, machos, adultos, sem raça definida. "Imprints" da superfície de corte em lâmina de microscopia foram fixadas em metanol, coradas pelo Giemsa e submetidas à avaliaçäo citológica. Os fragmentos foram fixados e processados rotineiramente para inclusäo em parafina e coloraçäo com HE e Shorr, para confirmaçäo histológica do tumor e identificaçäo da apoptose. Outros fragmentos foram envolvidos com papel alumínio e acondicionados dentro de frascos de vidro em gelo seco, para serem processados no mesmo dia, visando à extraçäo de DNA e eletroforese em gel de agarose. Análises cito e histológica do TVTC mostraram a distribuiçäo e o padräo celular e tecidual característicos dessa neoplasia, sobressaindo-se a presença de vacúolos claros, bem definidos no citoplasma à análise citológica. Pela coloraçäo com Shorr pôde-se identificar células retraídas, com aumento da acidofilia citoplasmática e condensaçäo da cromatina nuclear, às vezes com fragmentaçäo do núcleo e das células, caracterizando apoptose. A coloraçäo pelo Shorr mostrou ser mais eficiente na distinçäo de células apoptóticas do que a coloraçäo por HE. A eletroforese de DNA em gel de agarose demonstrou a fragmentaçäo internucleossômica do genoma, que pôde ser reconhecida pelo clássico "padräo em escada"