Obtenção e caracterização de imunógeno conjugado de lipopolissacarídeo de Pseudomonas aeruginosa e albumina bovina / Obtainment and characterization of an immunogenic conjugate of Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide and bovine serum albumin

A Pseudomonas aeruginosa é agente etiológico de infecções oportunistas, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Suas características inerentes em desenvolver resistência aos mais variados tipos de antibacterianos a torna um ponto crítico no controle de infecções. Em animais, os problemas com multirresistência ocorrem principalmente em casos de otite, cistite, úveo-conjuntivite, endometrite e mastite, não havendo vacina comercialmente disponível. No intuito de melhorar a imunogenicidade desse antígeno, foi testada a técnica de conjugação do lipopolissacarídeo (LPS) de P. aeruginosa à albumina bovina (BSA) por aminação redutiva direta utilizando .-periodato de sódio. A conjugação foi avaliada por cromatografia de gel-permeação, dosando-se açúcar e proteína totais, e tanto o LPS quanto a BSA foram identificados em proporções semelhantes. A imunização de camundongos com a vacina conjugada LPS-BSA conferiu títulos de anticorpos aglutinantes contra P. aeruginosa inferiores aos obtidos com a mistura de LPS e BSA livres. Foram 65% e 86% menores na 6ª e na 10ª semanas após o procedimento de hiperimunização, respectivamente. Isto indica que a reação de conjugação resultou em um produto imunogênico, porém, sua qualidade precisará ser melhorada.

Pseudomonas aeruginosa is an etiologic agent of opportunistic infections mainly in immunocompromised patients. Its inherent feature of developing resistance to a wide range of antibacterial agents make it a critical point in infection control. In animals, problems with multidrug resistance occur in otitis, cystitis, uveo-conjunctivitis, endometritis and mastitis, and there is no commercially available vaccine. With the aim of improving its immunogenicity, the lipopolysaccharide (LPS) antigen was coupled to bovine serum albumin (BSA) with .-periodate as the reductive agent. The conjugation was evaluated by gel-permeation chromatography, by quantitating total sugar and protein, and both LPS and BSA were detected in similar proportions. The immunization of mice with LPS-BSA conjugate vaccine resulted in an agglutinating antibody response against P. aeruginosa lower than that obtained for a mixture of free LPS and BSA. They were 65% and 86% lower in the 6th and 10th weeks after the hyperimmunization procedure, respectively. This indicates that the conjugation reaction resulted in an immunogenic product, however its quality should be improved.

OBTENÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE IMUNÓGENO CONJUGADO DE LIPOPOLISSACARÍDEO DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA E ALBUMINA BOVINA

ABSTRACT Pseudomonas aeruginosa is an etiologic agent of opportunistic infections mainly in immunocompromised patients. Its inherent feature of developing resistance to a wide range of antibacterial agents make it a critical point in infection control. In animals, problems with multidrug resistance occur in otitis, cystitis, uveo-conjunctivitis, endometritis and mastitis, and there is no commercially available vaccine. With the aim of improving its immunogenicity, the lipopolysaccharide (LPS) antigen was coupled to bovine serum albumin (BSA) with .-periodate as the reductive agent. The conjugation was evaluated by gel-permeation chromatography, by quantitating total sugar and protein, and both LPS and BSA were detected in similar proportions. The immunization of mice with LPS-BSA conjugate vaccine resulted in an agglutinating antibody response against P. aeruginosa lower than that obtained for a mixture of free LPS and BSA. They were 65% and 86% lower in the 6th and 10th weeks after the hyperimmunization procedure, respectively. This indicates that the conjugation reaction resulted in an immunogenic product, however its quality should be improved.

RESUMO A Pseudomonas aeruginosa é agente etiológico de infecções oportunistas, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Suas características inerentes em desenvolver resistência aos mais variados tipos de antibacterianos a torna um ponto crítico no controle de infecções. Em animais, os problemas com multirresistência ocorrem principalmente em casos de otite, cistite, úveo-conjuntivite, endometrite e mastite, não havendo vacina comercialmente disponível. No intuito de melhorar a imunogenicidade desse antígeno, foi testada a técnica de conjugação do lipopolissacarídeo (LPS) de P. aeruginosa à albumina bovina (BSA) por aminação redutiva direta utilizando .-periodato de sódio. A conjugação foi avaliada por cromatografia de gel-permeação, dosando-se açúcar e proteína totais, e tanto o LPS quanto a BSA foram identificados em proporções semelhantes. A imunização de camundongos com a vacina conjugada LPS-BSA conferiu títulos de anticorpos aglutinantes contra P. aeruginosa inferiores aos obtidos com a mistura de LPS e BSA livres. Foram 65% e 86% menores na 6ª e na 10ª semanas após o procedimento de hiperimunização, respectivamente. Isto indica que a reação de conjugação resultou em um produto imunogênico, porém, sua qualidade precisará ser melhorada.