ABSTRACT
Objective: Considering the absence of data on genotyping of <i>T. pallidum</i> in Brazil, We aimed at study its strains and resistance to macrolides in genital ulcers suggestive of syphilis.Methods: Men with genital ulcers suggestive of syphilis were invited to participate. Samples were collected with a dry cotton swab and immersed in 0.9% NaCl solution. The detection was done by PCR amplification of a 260 bp of the tpp47 gene. PCR product was analyzed by electrophoresis in 2% agarose gel containing 0.05% ethidium bromide. Positive PCR samples were analyzed by MLST (sequencing of chromosomal loci TP0136, TP0548, and TP0705). Mutation A2058G and A2059G on the 23S rRNA gene was evaluated by nested PCR. DNA sequencing was analyzed using the Bioedit software (Tom Hall, USA). Genotyping was performed using the online platform PubMLST (Grillová scheme). Results: All subjects were residents of Porto Alegre and ranged from 19 to 66 years old. Of the 43 samples, 32 were T. pallidum PCR positive. Thirty strains were available for genotyping and belonged to either the Clonal Complex SS14-like (73.3%) or Nichols-like (20%). Three complete MLST profiles were identified (1.3.1;9.7.3 and 28.7.3), and a new allele (x.x.11) at the locus TP0705 was identified in one sample. Only one sample did not have the 2058 mutation in the 23S rRNA gene.Conclusion: Our study identified genetic diversity in <i>T. pallidum</i> DNA using MLST with allele variants for TP0136, TP0548, and TP0705, including a new allele, the only sample characterized as genotypic susceptible to macrolides. All the others (over 95%) samples presented the A2058G mutation in the 23S rRNA gene, which causes resistance to macrolides. Improving local understanding of T. pallidum is crucial to effective prevention and care.
Objetivo: Considerando la ausencia de datos sobre la epidemiología molecular de Treponema pallidum en Brasil, apuntamos a la detección y genotipado de cepas de T. pallidum y resistencia al macrólido en úlceras genitales clínicamente sugestivas de sífilis.Métodos: Se invitó a participar a hombres mayores de 18 años de una clínica pública de ITS. Las muestras de exudado se recogieron con un hisopo de algodón seco y se sumergieron en una solución de NaCl al 0,9%. La detección de T. pallidum se realizó mediante amplificación por PCR de 260 pb del gen tpp47 y el producto de la PCR se analizó mediante electroforesis en gel de agarosa al 2% que contenía bromuro de etidio al 0,05%. Las muestras de PCR positivas se analizaron mediante MLST (secuenciación de los loci cromosómicos TP0136, TP0548 y TP0705). La mutación A2058G y A2059G en el gen 23S rRNA se evaluó mediante PCR anidada. El análisis de la secuenciación del ADN se realizó mediante el software Bioedit (Tom Hall, EE. UU.). El genotipado se realizó utilizando la plataforma en línea PubMLST utilizando el esquema Grillová.Resultados: Todos los sujetos eran residentes de Porto Alegre y tenían entre 19 y 66 años. De las 43 muestras, 32 fueron positivas por PCR para T. pallidum. Treinta cepas estaban disponibles para el genotipado y pertenecían al Complejo Clonal SS14 (73,3%) y al Nichols (20%). Se identificaron tres perfiles MLST completos (1.3.1, 9.7.3 y 28.7.3) y se identificó un nuevo alelo (x.x.11) en el locus TP0705 en una muestra; la única muestra con secuenciación de calidad no tenía el 2058. Mutación en el gen 23S rRNA.Conclusión: Nuestro estudio identificó una diversidad genética en el ADN de T. pallidum utilizando MLST con variantes alélicas para TP0136, TP0548 y TP0705, incluyendo un nuevo alelo, la única muestra caracterizada como genotípica susceptible a macrólidos. El resto de muestras (más del 95%) presentaron la mutación A2058G en el gen 23S rRNA, que provoca resistencia a los macrólidos. Introducción de técnicas moleculares, además de mejorar el conocimiento local de la estructura poblacional de sífilis y T. pallidum y mejorar la calidad de la prevención y atención.
Objetivo: Considerando a ausência de dados sobre a epidemiologia molecular do Treponema pallidum no Brasil, objetivamos a detecção e genotipagem de cepas de T. pallidum e resistência ao macrolídeo em úlceras genitais clinicamente sugestivas de sífilis.Métodos: Foram convidados a participar homens maiores de 18 anos de uma clínica pública de IST. As amostras de exsudato foram coletadas com cotonete seco e imersas em solução de NaCl 0,9%. A detecção de T. pallidum foi feita por amplificação por PCR de 260 pb do gene tpp47 e o produto da PCR foi analisado por eletroforese em gel de agarose a 2% contendo brometo de etídio a 0,05%. As amostras de PCR positivas foram analisadas por MLST (sequenciamento dos loci cromossômicos TP0136, TP0548 e TP0705). As mutações A2058G e A2059G no gene 23S rRNA foram avaliadas por nested PCR. A análise do sequenciamento de DNA foi realizada utilizando o software Bioedit (Tom Hall, EUA). A genotipagem foi realizada na plataforma online PubMLST utilizando o esquema Grillová.Resultados: Todos os sujeitos eram residentes de Porto Alegre e tinham idade entre 19 e 66 anos. Das 43 amostras, 32 foram positivas para PCR para T. pallidum. Trinta cepas estavam disponíveis para genotipagem e pertenciam ao Complexo Clonal SS14-like (73,3%) e ao Nichols-like (20%). Três perfis completos de MLST foram identificados (1.3.1, 9.7.3 e 28.7.3), e um novo alelo (x.x.11) no locus TP0705 foi identificado em uma amostra, a única amostra com sequenciamento de qualidade não possuía o 2058 mutação no gene 23S rRNA.Conclusão: Nosso estudo identificou uma diversidade genética no DNA de T. pallidum usando MLST com variantes alélicas para TP0136, TP0548 e TP0705, incluindo um novo alelo, única amostra caracterizada como genotípica suscetível a macrolídeos. Todas as demais amostras (mais de 95%) apresentaram a mutação A2058G no gene 23S rRNA, que causa resistência aos macrolídeos. Introdução de técnicas moleculares, além de melhorar a compreensão local da estrutura populacional da sífilis e do T. pallidum e melhorar a qualidade da prevenção e atenção.
