Avaliação distribuição mitocondrial na maturação in vitro de oócitos bovinos de ovários com baixa e alta contagem de folículos antrais / Mitochondrial distribution evaluation in vitro maturation of ovarian bovine oocytes with low and high antral follicle count

A Produção in vitro de embriões (PIVE) depende das etapas de maturação, fertilização e cultivo in vitro, sendo a maturação a etapa decisiva para o oócito atingir o estádio de mórula e blastocisto. Neste trabalho objetivou-se avaliar a qualidade de maturação in vitro, de acordo com a distribuição mitocondrial de oócitos provenientes de ovários de fêmeas de abatedouro, com baixa ou alta contagem de folículos antrais (CFA). Foram aspirados 243 ovários dos quais se selecionou 334 oócitos perante de cinco repetições para cada grupo. Os ovários foram separados em dois grupos: 1-baixa CFA (n=19), 2-alta CFA (n= 53) e os oócitos recuperados corados com a sonda MitoTracker Red. Os dados obtidos foram analisados pelo teste não paramétrico exato de Fisher (α=5%) mediante o software Statistical Analysis System for Windows (SAS Inst., Inc., Cary, NC).Em relação a localização das mitocôndrias o presente trabalho apresentou diferenças (p<0,001) entre oócitos imaturos e maturados, o que é desejável. Oócitos maturados apresentaram maior porcentagem de mitocôndrias dispersas no citoplasma e oócitos imaturos na periferia, independente do grupo experimental (baixa e alta CFA). Em oócitos imaturos, não houve diferença (p=0,1542) na localização das mitocôndrias entre os grupos baixa e alta CFA. No entanto, o grupo baixa CFA, após a maturação, apresentou menor quantidade de oócitos com mitocôndrias na periferia em relação aos de alta CFA (p = 0,0355), indicando melhor aquisição de competência desses oócitos para PIVE.

In vitro embryo production (PIVE) depends on the stages of maturation, fertilization and in vitro cultivation, being the decisive stage for the oocyte to reach the morula and blastocyst stage. This study aimed to evaluate the quality of in vitro maturation, according to the mitochondrial distribution of oocytes from ovaries of slaughter females with low or high antral follicle count (CFA). A total of 243 ovaries were aspirated from which 334 oocytes were selected for five replicates for each group. The ovaries were separated into two groups: 1-low CFA (n = 19) 2-high CFA (n = 53) and stained with the Mito Traker Red probe. Data obtained were analyzed by Fisher's exact nonparametric test ( α= 5%) using the Statistical Analysis System for Windows software (SAS Inst., Inc., Cary, NC). Regarding the location of mitochondria, the present study showed significant differences (p <0.001) between immature and mature oocytes, which is desirable. Mature oocytes had a higher percentage of dispersed mitochondria in the cytoplasm and immature oocytes in the periphery, regardless of the experimental group (low and high CFA). In immature oocytes, there was no difference (p = 0.1542) in the location of mitochondria between the low and high CFA groups. However, the oocytes of the low CFA group, after maturation, presented smaller number of oocytes with mitochondria in the periphery compared to the high CFA (p = 0.0355), indicating for this parameter a better competence of these oocytes for PIVE.

Avaliação distribuição mitocondrial na maturação in vitro de oócitos bovinos de ovários com baixa e alta contagem de folículos antrais / Mitochondrial distribution evaluation in vitro maturation of ovarian bovine oocytes with low and high antral follicle count

A Produção in vitro de embriões (PIVE) depende das etapas de maturação, fertilização e cultivo in vitro, sendo a maturação a etapa decisiva para o oócito atingir o estádio de mórula e blastocisto. Neste trabalho objetivou-se avaliar a qualidade de maturação in vitro, de acordo com a distribuição mitocondrial de oócitos provenientes de ovários de fêmeas de abatedouro, com baixa ou alta contagem de folículos antrais (CFA). Foram aspirados 243 ovários dos quais se selecionou 334 oócitos perante de cinco repetições para cada grupo. Os ovários foram separados em dois grupos: 1-baixa CFA (n=19), 2-alta CFA (n= 53) e os oócitos recuperados corados com a sonda MitoTracker Red. Os dados obtidos foram analisados pelo teste não paramétrico exato de Fisher (α=5%) mediante o software Statistical Analysis System for Windows (SAS Inst., Inc., Cary, NC).Em relação a localização das mitocôndrias o presente trabalho apresentou diferenças (p<0,001) entre oócitos imaturos e maturados, o que é desejável. Oócitos maturados apresentaram maior porcentagem de mitocôndrias dispersas no citoplasma e oócitos imaturos na periferia, independente do grupo experimental (baixa e alta CFA). Em oócitos imaturos, não houve diferença (p=0,1542) na localização das mitocôndrias entre os grupos baixa e alta CFA. No entanto, o grupo baixa CFA, após a maturação, apresentou menor quantidade de oócitos com mitocôndrias na periferia em relação aos de alta CFA (p = 0,0355), indicando melhor aquisição de competência desses oócitos para PIVE.(AU)

In vitro embryo production (PIVE) depends on the stages of maturation, fertilization and in vitro cultivation, being the decisive stage for the oocyte to reach the morula and blastocyst stage. This study aimed to evaluate the quality of in vitro maturation, according to the mitochondrial distribution of oocytes from ovaries of slaughter females with low or high antral follicle count (CFA). A total of 243 ovaries were aspirated from which 334 oocytes were selected for five replicates for each group. The ovaries were separated into two groups: 1-low CFA (n = 19) 2-high CFA (n = 53) and stained with the Mito Traker Red probe. Data obtained were analyzed by Fisher's exact nonparametric test ( α= 5%) using the Statistical Analysis System for Windows software (SAS Inst., Inc., Cary, NC). Regarding the location of mitochondria, the present study showed significant differences (p <0.001) between immature and mature oocytes, which is desirable. Mature oocytes had a higher percentage of dispersed mitochondria in the cytoplasm and immature oocytes in the periphery, regardless of the experimental group (low and high CFA). In immature oocytes, there was no difference (p = 0.1542) in the location of mitochondria between the low and high CFA groups. However, the oocytes of the low CFA group, after maturation, presented smaller number of oocytes with mitochondria in the periphery compared to the high CFA (p = 0.0355), indicating for this parameter a better competence of these oocytes for PIVE.(AU)

Avaliação morfológica e nuclear de oócitos bovinos imaturos, obtidos de ovários com e sem a presença de corpo lúteo / Morphological evaluation and nuclear oocytes immature, obtained from ovarian with and without the body presence luteum

A produção in vitro de embriões (PIVE) é uma biotecnologia que possibilita principalmente o rápido aumento no número de descendentes com mérito genético superior. Atualmente o Brasil é líder mundial na PIVE e grande parte desse sucesso deve-se às inúmeras pesquisas realizadas nessa área. A seleção de oócitos de boa qualidade para essa técnica é determinante para obtenção de embriões de qualidade e satisfatórios índices de prenhez. Desta forma, esse trabalho teve como objetivo avaliar oócitos, obtidos de ovários com e sem a presença de corpo lúteo (CL), de acordo com a classificação morfológica e nuclear, afim de identificar a possível influência do CL na viabilidade dos oócitos. Foram coletados ovários de abatedouro e separados em dois grupos, com e sem CL. Os folículos foram aspirados, e os oócitos obtidos foram selecionados, classificados e em seguida corados com Hoechst 33342 e avaliados sob microscópio de epifluorescência, para avaliação nuclear. Realizou-se análise descritiva de cada tratamento com relação a classificação morfológica e nuclear. Os resultados obtidos foram analisados através de testes não-paramétricos, sendo o efeito do corpo lúteo verificado por meio do teste Qui-quadrado (2) (R core Team, 2013). Concluiu-se que a presença de CL não influencia na qualidade de oócitos imaturos, do ponto de vista quantitativo, morfológico e nuclear.(AU)

The in vitro embryo production (IVP) is a biotechnology that primarily enables the rapid increase in the number of offspring with superior genetic merit . Currently, Brazil is the world leader in IVP and much of this success is due to the extensive research carried out in that area. The selection of good quality oocytes for this technique is critical to obtaining quality embryos and satisfactory pregnancy rates. Thus, this study aimed to assess oocytes obtained from ovaries with and without the presence of corpus luteum (CL), according to the morphological and nuclear classification, in order to identify the possible influence of CL on the viability of oocytes. They were collected from slaughterhouse ovaries and separated into two groups, with and without CL. Follicles were aspirated and the oocytes were selected, ranked, and then stained with Hoechst 33342 and evaluated by epifluorescence microscope for nuclear evaluation. A descriptive analysis of each treatment with respect to morphological and nuclear classification. The results were analyzed using non-parametric tests, with the effect of the corpus luteum verified using the chisquare test (χ2) (R Core Team, 2013). It was concluded that the presence of CL does not influence the quality of immature oocytes, from the quantitative and morphological nuclear standpoint.(AU)

Avaliação morfológica e nuclear de oócitos bovinos imaturos, obtidos de ovários com e sem a presença de corpo lúteo / Morphological evaluation and nuclear oocytes immature, obtained from ovarian with and without the body presence luteum

A produção in vitro de embriões (PIVE) é uma biotecnologia que possibilita principalmente o rápido aumento no número de descendentes com mérito genético superior. Atualmente o Brasil é líder mundial na PIVE e grande parte desse sucesso deve-se às inúmeras pesquisas realizadas nessa área. A seleção de oócitos de boa qualidade para essa técnica é determinante para obtenção de embriões de qualidade e satisfatórios índices de prenhez. Desta forma, esse trabalho teve como objetivo avaliar oócitos, obtidos de ovários com e sem a presença de corpo lúteo (CL), de acordo com a classificação morfológica e nuclear, afim de identificar a possível influência do CL na viabilidade dos oócitos. Foram coletados ovários de abatedouro e separados em dois grupos, com e sem CL. Os folículos foram aspirados, e os oócitos obtidos foram selecionados, classificados e em seguida corados com Hoechst 33342 e avaliados sob microscópio de epifluorescência, para avaliação nuclear. Realizou-se análise descritiva de cada tratamento com relação a classificação morfológica e nuclear. Os resultados obtidos foram analisados através de testes não-paramétricos, sendo o efeito do corpo lúteo verificado por meio do teste Qui-quadrado (2) (R core Team, 2013). Concluiu-se que a presença de CL não influencia na qualidade de oócitos imaturos, do ponto de vista quantitativo, morfológico e nuclear.

The in vitro embryo production (IVP) is a biotechnology that primarily enables the rapid increase in the number of offspring with superior genetic merit . Currently, Brazil is the world leader in IVP and much of this success is due to the extensive research carried out in that area. The selection of good quality oocytes for this technique is critical to obtaining quality embryos and satisfactory pregnancy rates. Thus, this study aimed to assess oocytes obtained from ovaries with and without the presence of corpus luteum (CL), according to the morphological and nuclear classification, in order to identify the possible influence of CL on the viability of oocytes. They were collected from slaughterhouse ovaries and separated into two groups, with and without CL. Follicles were aspirated and the oocytes were selected, ranked, and then stained with Hoechst 33342 and evaluated by epifluorescence microscope for nuclear evaluation. A descriptive analysis of each treatment with respect to morphological and nuclear classification. The results were analyzed using non-parametric tests, with the effect of the corpus luteum verified using the chisquare test (χ2) (R Core Team, 2013). It was concluded that the presence of CL does not influence the quality of immature oocytes, from the quantitative and morphological nuclear standpoint.