[Use of polymerase chain reaction for the diagnosis of central nervous system infections]. / Utilización de la reacción en cadena de la polimerasa para el diagnóstico de infecciones del sistema nervioso central.

In the present work, the polymerase chain reaction (PCR) assay and his variants RT-PCR and Multiplex PCR were applied for the detection of specific sequences of Enterovirus, Human Herpes viruses (Herpes simple virus, Human Herpes virus type 6, Cytomegalovirus, Epstein Barr virus, and Varicella Zoster), Human Immunodeficiency virus, Toxoplasma gondii, Mycobacterium tuberculosis and Mycoplasma pneumoniae in patients' cohorts grouped by medical suspicion of meningoencephalitis. Of 326 samples of processed cerebrospinal fluid (CSF), 93 samples (28.5%) were positive for the different infectious agents. In the group of patients with clinical diagnosis of viral meningoencephalitis (n=212), there was obtained a whole of 73 positive samples (34.4%), of which 37 patients were positive to Enterovirus (50.7%), 19 were positive to VHS (26%) and 10 patients (13.7%) were positive to CMV. Other viral agents as VZV, EBV and HVH6 were detected in minor frequency. The 114 remaining samples were analyzed applying specific PCR to each pathogen for strict medical indication, being able to detect the presence of Human Immunodeficiency Virus (40%), Mycoplasma pneumoniae (40%), Toxoplasma gondii (14%) and Mycobacterium tuberculosis (12%) in CSF samples. The results obtained in this study demonstrate the convenience of the application of the molecular assays in the laboratory diagnosis of the meningoencefalitis of different etiology. Besides this, it is also a very valuable tool for the clinical management of the patients and for the execution of the epidemiological studies.

Utilización de la reacción en cadena de la Polimerasa para el diagnóstico de infecciones del sistema nervioso central / Use of Polymerase chain reaction for the diagnosis of central nervous system infections

En el presente trabajo se aplicó el ensayo de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y sus variantes RT-PCR y Multiplex PCR para la detección de secuencias específicas de Enterovirus, Herpesvirus humanos (Virus Herpes simple y Virus Herpes tipo 6, Citomegalovirus, Epstein Barr, Varicela Zoster), Virus de Inmunodeficiencia Humana, Toxoplasma gondii, Micobacterium tuberculosis y Micoplasma pneumoniae en muestras de liquido cefalorraquídeo (LCR) de cohortes de pacientes con sospecha clínica de meningoencefalitis. De las 322 muestras de LCR procesadas, se detectaron un total de 93 muestras positivas (28,8 por ciento) para los distintos agentes infecciosos. En el grupo de pacientes con diagnóstico clínico de meningoencefalitis viral (n=212), se obtuvo un total de 73 muestras positivas (34,4 por ciento), de las cuales 37 fueron positivas a Enterovirus (50,7 por ciento), 19 a VHS (26 por ciento) y 10 pacientes (13,7 por ciento) fueron positivos a CMV. Los otros agentes virales VZV, EBV y HVH6 se encontraron en menor frecuencia. Las 110 muestras restantes de LCR se analizaron aplicando PCR específicos a cada patógeno por estricta indicación médica, pudiéndose detectar en ellas la presencia de Virus de lnmunodeficiencia Humana (40 por ciento), Micoplasma pneumoniae (40 por ciento), Toxoplasma gondii (14 por ciento) y Micobacterium tuberculosis (12 por ciento). Los resultados obtenidos en este estudio demuestran la conveniencia de la aplicación de las técnicas moleculares en el diagnóstico de laboratorio de las meningoencefalitis de diferente etiología, siendo además una herramienta muy valiosa para el manejo clínico de los pacientes y para la ejecución de estudios epidemiológicos

Cross-resistance to pyrethroid and organophosphorus insecticides induced by selection with temephos in Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) from Cuba.

A sample of Aedes aegypti (L.) from Santiago de Cuba, Cuba, with a high level of temephos resistance (19.58x at the 50% lethal concentration [LC50]), was subjected to temephos selection to evaluate the utility of this organophosphate insecticide for mosquito control. High resistance developed after six generations of selection (200.00x). Little or no cross-resistance was observed to the organophosphates, malathion and fenitrothion, but high cross-resistance was observed for the pyrethroid deltamethrin (337.5x) and the organophosphate fenthion (12.74x). Synergism tests implicated detoxifying esterases in temephos and fenthion resistance and deltamethrin resistance was associated with a cytochrome P450 monooxygenasa. Biochemical tests, polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE), and inhibition studies confirmed the presence of elevated esterase activity associated with temephos resistance. Pyrethroid resistance could be associated with a glutathione-S-transferase mechanism but not the esterases. The cross-resistance to deltamethrin from temephos selection could limit the use of both insecticides for Ae. aegypti control.

Evolución de la resistencia a insecticidas en Culex quinquefasciatus (Díptera: Culicidae) en un área de La Habana / Course of insecticide resistance in Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) in a region of La Habana

The use of malathion to control mosquitoes in Cuba during 7 years until 1986 selected 2 resistance mechanisms: that of elevated activity of nonspecific esterases and that of altered acetylcholinesterase (Ache) in Culex quinquefasciatus (Say). In Havana, specifically in the area under study (Quibú River), malathion was replaced by cypermethrin in 1987 and cycles of treatment with cypermethrin have been intensively used since 1987 up to now when the populations of Aedes or Culex increase. In Culex quinquefasciatus (Say) from the Quibú River the resistance levels, mainly to malathion, declined significantly from 1986 to 1997. An increase of resistance to pyrethroid was observed during that period of 11 years. The mechanism of elevated esterases rose to a frequency of 1 and there was also an increase in the frequency of the mechanism of Ache. The esterase B1, responsible for the resistance to malathion, but not to pyrethroid, was selected in this population until 1986. Starting from the use of pyrethroid for the control in this area, 2 new phenotypes of esterases named A6 and B6, apparently related to pyrethroid resistance, were selected.

Evolución de la resistencia a insecticidas en Culex quinquefasciatus (Díptera: Culicidae) en un área de La Habana / Evolution of the resistance to insecticides in Culex quinquefasciatus (Dipteral: Culicidae) in an area of Havana

El uso de malation para el control de mosquitos en Cuba durante 7 años hasta 1986 seleccionó 2 mecanismos de resistencia, el de elevada actividad de esterasas no específicas y la acetilcolinesterasa alterada (Ache) en Culex quinquefasciatus (Say). En La Habana, específicamente en el área de estudio (Río Quibú), el malation fue reemplazado por cipermetrina en 1987, y ciclos de tratamiento con cipermetrina han sido usados desde 1987 hasta la fecha en forma de radiobatida cuando se incrementan las poblaciones de Aedes o Culex. En Culex quinquefasciatus (Say) del Río Quibú, los niveles de resistencia declinaron significativamente desde 1986 hasta 1997, sobre todo a malation, no resultó así para los piretroides, donde se observó un incremento de la resistencia durante este período de 11 años. El mecanismo de esterasas elevadas se incrementó a una frecuencia de 1 al igual que hubo un incremento en la frecuencia del mecanismo de Ache. Hasta 1986 se seleccionó en esta población la esterasa B1, responsable de la resistencia a malation, pero no a piretroides. A partir del uso de piretroides para el control en esta área se seleccionaron 2 nuevos fenotipos de esterasas, nombradas A6 y B6, en apariencia relacionadas con la resistencia a piretroides(AU)

Selección de una cepa de Culex quinquefasciatus resistente a lambdacialotrina y su espectro de resistencia cruzada a otros insecticidas

Se seleccionó una cepa de campo de Culex quinquefasciatus resistente al insecticida piretroide lambdacialotrina, con el objetivo de poder utilizarla como cepa de referencia en el laboratorio, en los estudios de bioquímica y genética de la resistencia; evaluar la utilidad de este insectivida para el control de mosquitos en Cuba y determinar la resistencia cruzada a insectividas organofosforados, piretroides y un carbamato. Se obtuvo una alta resistencia a lambdacialotrina después de 6 generaciones de presión de selección. Se observó baja o ninguna resistencia cruzada a otros piretroides (deltametrina y cipermetrina), a un carbamato (propoxur) y a los insecticidas organofosforados (clorpirifos y metil-pirimifos); sin embargo, se observó una alta resistencia cruzada a malatión (organofosforado).

A field strain of Culex quinquefasciatus resistant to pyrethroid lambda-cyhalothrin insecticide was selected to be used as a reference strain in the laboratory for conducting studies of biochemistry and genetics of resistance, to evaluate the utility of this insecticide for the control of mosquitoes in Cuba, and to determine the cross resistance to organophosphate insecticides, pyrethroids and a carbamate. A hig resistance to lambdacyhalothrin was obtained after 6 generations of selective pressure. Lowe or no cross resistance to other pyrethroids (deltamethrin and cyper-methrin), to a carbamate (propoxur) and to the organophosphate insecticides (clorpirifos and methyl-pyrimifos) was observed. A high cross resistance to malathion (organophosphate) was detected.

Estudio de la resistencia en una cepa de Culex quinquefasciatus, procedente de Medellín, Colombia

Para conocer el estado de la resistencia en una cepa de Culex quinquefasciatus, procedente de una localidad de la ciudad de Medellín, Colombia, se determinaron los niveles de susceptibilidad y/o resistencia a 5 insecticidas organofosforados (malatión, metil-pirimifos, clorpirifos, temefos y fentión), 4 piretroides (cipermetrina, deltamemetrina, permetrina y lambdacialotrina) y un carbamato (propoxur). Se observó resistencia a todos los insecticidas organofosforados, aunque con valores relativamente menores para metil-pirimifos y fentión. No se encontró resistencia a los piretroides lambdacialotrina y cipermetrina, ni al carbamato propoxur, insecticidas que pueden ser muy útiles para el control de mosquitos de Colombia. Se demostró mediante el uso del sinergista piperonil butóxico que las oxidasas de función múltiple desempeñaron una función importante en la resistencia a los insecticidas organofosforados y piretroides. El uso del S.S.S. tributil fosfotritiado reveló que la sobreproducción de esterasas inespecíficas constituyó un mecanismo de resistencia para los insecticidas organofosforados, excepto metil-pirimifos y para los piretroides excepto lambdacialotrina. Este resultado debe tenerse en cuenta en las estrategias que se vayan a usar para el control de Culex quinquefasciatus de Colombia. Estos 2 mecanismos de resistencia no son responsables de la resistencia al carbamato propoxur. El análisis electroforético reveló la presencia de las esterasas B1, A6 y B6, que presumimos tienen una función importante en la resistencia.

The levels of susceptibility and/or resistance to 5 organophosphate insecticides (malathion, methyl-pyrimifos, clorpirifos, temephos and fenthion), 4 pyrethroids (cypermethrin, deltamethrin, permethrin and lambda-cyhalothrin), and a carbamate (propoxur) were deternmined in order to know the state of resistance in a strain of Culex quinquefasciatus from a locality of the city of Medellín, Colombia. Resistance to all organophosphate insecticeides, though with relatively lower values for methyloirimifos and fenthion, was observed. No resistance to lambda-cyhalothrin and cypermethrin or to propoxur was found. These insecticides may be useful for the control of mosquitoes in Colombia. It was demonstrated by using the piperonil butoxide sinergist that the oxidases of multiple function played an important role in the resistance to organophosphate insecticides and pyrethroids. The utilization of S.S.S. tributyl phosphotritiate revealed that the superproduction of unspecific esterases was a mechanism of resistance to organophosphate insecticides, except methyl-pirimifos and for perythroids, exceptlambda-cyhalothrin. This result should be taken into consideration for the strategies to be used to control Culex quinquefasciatus in Colombia. These two mechanism of resistance are not responsible for the resistance to propoxur. The electrophoretic analysis showed the presence of esterases B1, A6 and B6, which seem to have an important function in resistance.

Estudio de la resistencia en una cepa de Culex quinquefasciatus, procedente de Medellín, Colombia / Resistance study in a strain of Culex quinquefasciatus from Medellín, Colombia

Para conocer el estado de la resistencia en una cepa de Culex quinquefasciatus, procedente de una localidad de la ciudad de Medellín, Colombia, se determinaron los niveles de susceptibilidad y/o resistencia a 5 insecticidas organofosforados (malatión, metil-pirimifos, clorpirifos, temefos y fentión), 4 piretroides (cipermetrina, deltamemetrina, permetrina y lambdacialotrina) y un carbamato (propoxur). Se observó resistencia a todos los insecticidas organofosforados, aunque con valores relativamente menores para metil-pirimifos y fentión. No se encontró resistencia a los piretroides lambdacialotrina y cipermetrina, ni al carbamato propoxur, insecticidas que pueden ser muy útiles para el control de mosquitos de Colombia. Se demostró mediante el uso del sinergista piperonil butóxico que las oxidasas de función múltiple desempeñaron una función importante en la resistencia a los insecticidas organofosforados y piretroides. El uso del S.S.S. tributil fosfotritiado reveló que la sobreproducción de esterasas inespecíficas constituyó un mecanismo de resistencia para los insecticidas organofosforados, excepto metil-pirimifos y para los piretroides excepto lambdacialotrina. Este resultado debe tenerse en cuenta en las estrategias que se vayan a usar para el control de Culex quinquefasciatus de Colombia. Estos 2 mecanismos de resistencia no son responsables de la resistencia al carbamato propoxur. El análisis electroforético reveló la presencia de las esterasas B1, A6 y B6, que presumimos tienen una función importante en la resistencia (AU)

Selección de una cepa de Culex quinquefasciatus resistente a lambdacialotrina y su espectro de resistencia cruzada a otros insecticidas / Selection of a strain of Culex quinquefasciatus resistant to lambdacyhalothrin and it spectrum of cross resistance to other insectices

Se seleccionó una cepa de campo de Culex quinquefasciatus resistente al insecticida piretroide lambdacialotrina, con el objetivo de poder utilizarla como cepa de referencia en el laboratorio, en los estudios de bioquímica y genética de la resistencia; evaluar la utilidad de este insectivida para el control de mosquitos en Cuba y determinar la resistencia cruzada a insectividas organofosforados, piretroides y un carbamato. Se obtuvo una alta resistencia a lambdacialotrina después de 6 generaciones de presión de selección. Se observó baja o ninguna resistencia cruzada a otros piretroides (deltametrina y cipermetrina), a un carbamato (propoxur) y a los insecticidas organofosforados (clorpirifos y metil-pirimifos); sin embargo, se observó una alta resistencia cruzada a malatión (organofosforado) (AU)