Use of Antifreeze Protein from Tenebrio molitor (TmAFP) in Vitrification of In Vitro-Produced Bovine Embryos: An Ultrastructural Study.

The objective of this study was to evaluate the effects of different concentrations of antifreeze protein (AFP) extracted from the larva of the beetle, Tenebrio molitor (TmAFP), on vitrification of in vitro-produced bovine embryos. In vitro-produced blastocysts were divided into three experimental groups and vitrified using a cryotop. TmAFP was added to the equilibrium solution (ES) and vitrification solution (VS) at a concentration of 0 ng/mL (control), 500 ng/mL (500TmAFP), or 1000 ng/mL (1000TmAFP). Vitrification was carried out by first placing the blastocysts in ES for 2 minutes (7.5% ethylene glycol [EG] and 7.5% dimethyl sulfoxide [DMSO]). The blastocysts were then transferred to VS (15% EG and 15% DMSO) and promptly deposited on a cryotop stem and submerged in liquid nitrogen. Warming was carried out in three steps with decreasing sucrose concentrations. After warming, the blast cells were cultured for 24 hours for subsequent survival analysis and ultrastructural evaluation. There was a significant difference in the survival rate and expansion in the 500TmAFP group compared with the other groups. The ultrastructural analysis revealed intracellular lesions in all vitrified embryos; however, the embryos of the 500TmAFP and 1000TmAFP groups showed fewer cytoplasmic lesions compared with the control group. Taken together, addition of TmAFP can mitigate cellular changes that involve organelles and cellular components essential for proper functioning and improve the viability of warmed and vitrified in vitro-produced bovine embryos.

Erliquiose transmitida aos cães pelo carrapato marrom (Rhipicephalus sanguineus) / Ehrlichiosis transmitted to dogs by tick brown (Rhipicephalus sanguineus)

Os animais da espécie canina representam aqueles que estão mais ligados ao homem, seja pelo apelo sentimental quando utilizados como animais de companhia, ou quando são empregados para serviço e/ou pesquisa. Entretanto, as doenças transmitidas pelos carrapatos, como a erliquiose, vêm causando grandes prejuízos econômicos e na saúde desses animais. Além destas questões, o protocolo estabelecido, o uso indiscriminado de medicamentos por parte dos proprietários que os utilizam como método preventivo provoca resistência às substâncias, gerando dificuldades no tratamento dessa patologia. Ao discorrer sobre o assunto, objetivou-se abordar o tema como forma de contribuir para um melhor conhecimento da biologia dessa doença, bem como a tomada de decisão na adoção de medidas de controle, prevenção e cura.(AU)

The canine species represent those who are more connected to the man, either by the sentimental appeal when used as pets or when they are em­ployed to service and/or research. However, diseases transmitted by ticks such as ehrlichiosis is causing a great economic loss and to the health of these animals. In addition to these issues, the established protocol, the indiscriminate use of drugs by the owners who use them as a preventive method, causes resistance to these substances, implying in difficulties in the treatment of this pathology. To discuss the subject, the objective of addressing the theme is a way of contributing to a better knowledge of the biology of this disease, as well as the decision on the adoption of control, prevention and cure measures.(AU)

Proteínas do plasma seminal de caprinos relacionadas com o índice pluviométrico e a qualidade do sêmen / Proteins of goat seminal plasma related with precipitation index and semen quality

O objetivo deste estudo foi identificar as proteínas do plasma seminal de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil que estão relacionadas ao índice pluviométrico e à qualidade do sêmen. O sêmen foi obtido pelo método de vagina artificial a partir de três reprodutores e foi avaliado quanto aos parâmetros macroscópicos e microscópicos. O perfil de proteínas do plasma seminal foi realizado por eletroforese bidimensional. Os parâmetros volume do sêmen, integridade do acrossoma e proteínas totais evidenciaram diferença significativa (P<0,05) entre os períodos de alto (1,7mL, 90,3% e 372μg mL-1,respectivamente) e baixo (1,2mL, 80,3% e 494μg mL-1, respectivamente) índice pluviométrico. Foram detectados, nos períodos de alto e baixo índice pluviométrico, 47 e 49 spots de proteínas com massa molecular relativa de 4 a 106kDa e de 15 a 97kDa e ponto isoelétrico de 3,00 a 8,96 e de 4,48 a 9,83, respectivamente. Apenas no período de alto índice pluviométrico foram observados os grupo de proteínas de 13kDa e 45kDa. Conclui-se que o sêmen de caprinos da raça Alpina Americana criados na região Nordeste do Brasil apresenta-se com melhor qualidade quando colhido no período de alto índice pluviométrico, o que pode ser atribuído à presença das proteínas de 13kDa e 45kDa.

The aim of this study was to identify proteins in seminal plasma of goats raised in the Northeast of Brazil relatedwith precipitation index and semen quality. Semen was obtained from three bucks and evaluated to the microscopic and macroscopic parameters. The profile of seminal plasma proteins was performed by analysis of two-dimensional electrophoresis. Volume, acrosome integrity and total proteins had significant difference (P<0.05) between the periods of high (1.7mL, 90.3% and 372g mL-1, respectively) and low (1.2mL, 80.3% and 494μgmL-1, respectively) precipitation index. It was detected during high and low precipitation index, 47 and 49 spots of proteins with molecular weight of 4 to 106kDa and 15 to 97kDa, and isoelectric point of 3.00 to 8.96, and 4.48 to 9.83, respectively. Only in the period of high precipitation index were observed groups of proteins with 13kDa and 45kDa. It can be concluded that semen of Alpine American goats raised in the Northeast of Brazil has best quality when obtained in the period of high precipitation index, which can be attributed to the presence of protein with 13kDa and 45kDa.

Aspectos críticos da congelação do sêmen caprino / Critic aspects of the goat semen cryopresevation

Esta revisão teve como objetivo abordar os principais fatores que podem interferir no sucesso da congelação do sêmen caprino, como variação individual, estacionalidade reprodutiva, centrifugação para retirada do plasma seminal, adição de diluentes e crioprotetores, e curva de refrigeração, visando aumentar o conhecimento das necessidades destas células durante o processo de congelação e possibilitar o desenvolvimento de protocolos de congelação mais eficientes. (AU)

This review had the objective to discuss the main factors that can interfere on the success of the goat semen frozen, like as individual variation, reproductive seasonality, centrifugation to take off the seminal plasma, the diluent and cryoprotector addition, and cool curve, aiming to increase the knowledge of the necessities of these cells during the freezing process and to possibility the development of the freezing protocols more efficient. (AU)

Aspectos críticos da congelação do sêmen caprino / Critic aspects of the goat semen cryopresevation

Esta revisão teve como objetivo abordar os principais fatores que podem interferir no sucesso da congelação do sêmen caprino, como variação individual, estacionalidade reprodutiva, centrifugação para retirada do plasma seminal, adição de diluentes e crioprotetores, e curva de refrigeração, visando aumentar o conhecimento das necessidades destas células durante o processo de congelação e possibilitar o desenvolvimento de protocolos de congelação mais eficientes.

This review had the objective to discuss the main factors that can interfere on the success of the goat semen frozen, like as individual variation, reproductive seasonality, centrifugation to take off the seminal plasma, the diluent and cryoprotector addition, and cool curve, aiming to increase the knowledge of the necessities of these cells during the freezing process and to possibility the development of the freezing protocols more efficient.

Avaliação microbiológica do sêmen fresco e congelado de reprodutores caprinos / Microbiological evaluation of buck fresh and frozen semen

Objetivou-se avaliar a flora microbiana no sêmen fresco e congelado de reprodutores caprinos, assim como a eficácia dos antibióticos estreptomicina, penicilina e gentamicina, na viabilidade de doses de sêmen congeladas. Foram utilizados 25 reprodutores de diferentes raças, submetidos a duas colheitas de sêmen através do método da vagina artificial, após higiene da região prepucial. A primeira colheita do sêmen foi realizada visando o exame microbiológico e a segunda teve como objetivo proceder a congelação, após diluição em leite desnatado, utilizando penicilina + estreptomicina (A1), gentamicina(A2) ou sem antibiótico (A3). Ao proceder a avaliação microscópica no sêmen fresco, evidenciou-se média de 87,92 ± 7,76 % de motilidade individual progressiva (MIP) e 4,96 ± 0,20 de vigor espermático. Em relação à avaliação bacteriana, constatou-se principalmente bactérias do gênero Staphylococcus spp e Bacillus sp. Após a congelação do sêmen, não foram evidenciadas diferenças (P>0,05) entre os grupos quantoa MIP e vigor espermático. Entretanto, na avaliação microbiológicapós-descongelação, a bactéria do gênero Staphylococcus spp esteve presente na maioria das amostras. Observou-se também que a gentamicina (13,3mg/mL) apresentou melhor atividade antimicrobianano processo de congelação do sêmen, concluindo-se que pode ser o antibiótico usado na congelação do sêmen de reprodutores caprinos.(AU)

The aim of this research was to evaluate the microbial flora in the fresh and frozen semen of goat reproducers, as well as the effectiveness of the antibiotics estreptomicin, penicillin and gentamicin in cryopreservation of semen. It were used 25 males of different breeds, submitted to two semen collect through the artificial vagina method after cleanliness of prepucial region. The first collection of semen aimed the microbiological exam. The second collection had as goal accomplish freezing, after dilution in skimmed milk, with penicillin+ estreptomicin (A1), gentamicin (A2) or control (A3). After microscopic evaluation, it was evidenced average of 87.92 ± 7.76% of MIP and 4.96 ± 0.20 of spermatic vigor in fresh semen. Regarding bacterin evaluation, it was verified, mostly, bacteria of the gender Sthaphylococcus spp and Bacillus sp. After semen cryopreservation, it was observed that there wasnt difference (P>0.05) among groups in MIP and spermatic vigor. However, in the microbiological evaluationof frozen-thawed semen, bacteria of Sthaphylococcus spp gender was present in great part of samples. Gentamicin (13.3mg/mL) promoted larger inhibition of the bacterial growth in the semen post-freezing, concluding that gentamicin can be the antibiotic used for freezing of goat semen.(AU)

Avaliação microbiológica do sêmen fresco e congelado de reprodutores caprinos / Microbiological evaluation of buck fresh and frozen semen

Objetivou-se avaliar a flora microbiana no sêmen fresco e congelado de reprodutores caprinos, assim como a eficácia dos antibióticos estreptomicina, penicilina e gentamicina, na viabilidade de doses de sêmen congeladas. Foram utilizados 25 reprodutores de diferentes raças, submetidos a duas colheitas de sêmen através do método da vagina artificial, após higiene da região prepucial. A primeira colheita do sêmen foi realizada visando o exame microbiológico e a segunda teve como objetivo proceder a congelação, após diluição em leite desnatado, utilizando penicilina + estreptomicina (A1), gentamicina(A2) ou sem antibiótico (A3). Ao proceder a avaliação microscópica no sêmen fresco, evidenciou-se média de 87,92 ± 7,76 % de motilidade individual progressiva (MIP) e 4,96 ± 0,20 de vigor espermático. Em relação à avaliação bacteriana, constatou-se principalmente bactérias do gênero Staphylococcus spp e Bacillus sp. Após a congelação do sêmen, não foram evidenciadas diferenças (P>0,05) entre os grupos quantoa MIP e vigor espermático. Entretanto, na avaliação microbiológicapós-descongelação, a bactéria do gênero Staphylococcus spp esteve presente na maioria das amostras. Observou-se também que a gentamicina (13,3mg/mL) apresentou melhor atividade antimicrobianano processo de congelação do sêmen, concluindo-se que pode ser o antibiótico usado na congelação do sêmen de reprodutores caprinos.

The aim of this research was to evaluate the microbial flora in the fresh and frozen semen of goat reproducers, as well as the effectiveness of the antibiotics estreptomicin, penicillin and gentamicin in cryopreservation of semen. It were used 25 males of different breeds, submitted to two semen collect through the artificial vagina method after cleanliness of prepucial region. The first collection of semen aimed the microbiological exam. The second collection had as goal accomplish freezing, after dilution in skimmed milk, with penicillin+ estreptomicin (A1), gentamicin (A2) or control (A3). After microscopic evaluation, it was evidenced average of 87.92 ± 7.76% of MIP and 4.96 ± 0.20 of spermatic vigor in fresh semen. Regarding bacterin evaluation, it was verified, mostly, bacteria of the gender Sthaphylococcus spp and Bacillus sp. After semen cryopreservation, it was observed that there wasn’t difference (P>0.05) among groups in MIP and spermatic vigor. However, in the microbiological evaluationof frozen-thawed semen, bacteria of Sthaphylococcus spp gender was present in great part of samples. Gentamicin (13.3mg/mL) promoted larger inhibition of the bacterial growth in the semen post-freezing, concluding that gentamicin can be the antibiotic used for freezing of goat semen.