Association of MICA and HLA-B alleles with leprosy in two endemic populations in Brazil.

Leprosy is a prevalent disease in Brazil, which ranks as the country with the second highest number of cases in the world. The disease manifests in a spectrum of forms, and genetic differences in the host can help to elucidate the immunopathogenesis. For a better understanding of MICA association with leprosy, we performed a case-control and a family-based study in two endemic populations in Brazil. MICA and HLA-B alleles were evaluated in 409 leprosy patients and in 419 healthy contacts by PCR-SSOP-Luminex-based technology. In the familial study, analysis of 46 families was completed by direct sequencing of all exons and 3'/5'untranslated regions, using the Ilumina MiSeq platform. All data were collected between 2006 and 2009. Statistical analysis was performed using the Chi-square or Fisher's exact test together with a multivariate analysis. Family-based association was assessed by transmission disequilibrium test (TDT) software FBAT 2.0.4. We found associations between the haplotype MICA*002-HLA-B*35 with leprosy in both the per se and the multibacillary (MB) forms when compared to healthy contacts. The MICA allele *008 was associated with the clinical forms of paucibacillary (PB). Additionally, MICA*029 was associated with the clinical forms of MB. The association of MICA*029 allele (MICA-A4 variant) with the susceptibility to the MB form suggests this variant for the transmembrane domain of the MICA molecule may be a risk factor for leprosy. Two MICA and nine HLA-B variants were found associated with leprosy per se in the Colônia do Prata population. Linkage disequilibrium analysis revealed perfect linkage disequilibrium (LD) between HLA-B markers rs2596498 and rs2507992, and high LD (R2  = .92) between these and the marker rs2442718. This familial study demonstrates that MICA association signals are not independent from those observed for HLA-B. Our findings contribute the knowledge pool of the immunogenetics of Hansen's disease and reveals a new association of the MICA*029 allele.

Association of MICA and HLA­B alleles with leprosy in two endemic populations in Brazil

Leprosy is a prevalent disease in Brazil, which ranks as the country with the second highest number of cases in the world. The disease manifests in a spectrum of forms, and genetic differences in the host can help to elucidate the immunopathogenesis. For a better understanding of MICA association with leprosy, we performed a case­control and a family­based study in two endemic populations in Brazil. MICA and HLA­B alleles were evaluated in 409 leprosy patients and in 419 healthy contacts by PCR­SSOP­Luminex­based technology. In the familial study, analysis of 46 families was completed by direct sequencing of all exons and 3'/5'untranslated regions, using the Ilumina MiSeq platform. All data were collected between 2006 and 2009. Statistical analysis was performed using the Chi­square or Fisher's exact test together with a multivariate analysis. Family­based association was assessed by transmission disequilibrium test (TDT) software FBAT 2.0.4. We found associations between the haplotype MICA*002­HLA­B*35 with leprosy in both the per se and the multibacillary (MB) forms when compared to healthy contacts. The MICA allele *008 was associated with the clinical forms of paucibacillary (PB). Additionally, MICA*029 was associated with the clinical forms of MB. The association of MICA*029 allele (MICA­A4 variant) with the susceptibility to the MB form suggests this variant for the transmembrane domain of the MICA molecule may be a risk factor for leprosy. Two MICA and nine HLA­B variants were found associated with leprosy per se in the Colônia do Prata population. Linkage disequilibrium analysis revealed perfect linkage disequilibrium (LD) between HLA­B markers rs2596498 and rs2507992, and high LD (R2 = .92) between these and the marker rs2442718. This familial study demonstrates that MICA association signals are not independent from those observed for HLA­B. Our findings contribute the knowledge pool of the immunogenetics of Hansen's disease and reveals a new association of the MICA*029 allele(AU).

Immune checkpoints in leprosy: immunotherapy as a feasible approach to control disease progression

Leprosy remains a health problem in several countries. Current management of patients with leprosy is complex and requires multidrug therapy. Nonetheless, antibiotic treatment is insufficient to prevent nerve disabilities and control Mycobacterium leprae. Successful infectious disease treatment demands an understanding of the host immune response against a pathogen. Immune-based therapy is an effective treatment option for malignancies and infectious diseases. A promising therapeutic approach to improve the clinical outcome of malignancies is the blockade of immune checkpoints. Immune checkpoints refer to a wide range of inhibitory or regulatory pathways that are critical for maintaining self-tolerance and modulating the immune response. Programmed cell-death protein-1 (PD-1), programmed cell death ligand-1 (PD-L1), cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4, and lymphocyte-activation gene-3 are the most important immune checkpoint molecules. Several pathogens, including M. leprae, are supposed to utilize these mechanisms to evade the host immune response. Regulatory T cells and expression of co-inhibitory molecules on lymphocytes induce specific T-cell anergy/exhaustion, leading to disseminated and progressive disease. From this perspective, we outline how the co-inhibitory molecules PD-1, PD-L1, and Th1/Th17 versus Th2/Treg cells are balanced, how antigen-presenting cell maturation acts at different levels to inhibit T cells and modulate the development of leprosy, and how new interventions interfere with leprosy development.

Identificação dos alelos HLA-DQB1*01 em pacientes hansenianos mitsuda negativos / Identification of HLA-DQB1*01 alleles in mitsuda negative leprosy patients

A proposta deste estudo foi identificar os alelos que codificam o HLA-DQ1 envolvidos na ausência de resposta imune celular em 60 pacientes hansenianos (50LL e 10BL) Mitsuda negativos. Os resultados obtidos mostraram a presença do alelo HLA-DQB1*0501 em 48.30% dos pacientes, seguido do HLA-DQB1*0602 em 31.66%, ambos subtipos do fenótipo HLA-DQB1*01. Apesar do predomínio destes alelos, não se pode afirmar que eles sejam os responsáveis pela ausência de resposta ao teste de Mitsuda. Sugerimos mais estudos neste segmento para a confirmação dos resultados.

The purpose of this study was to identify the gene encoding HLA-DQ1 involved in the absence of cellular immune response in 60 Mitsuda negative leprosy patients (50LL and 10BL). The results showed the presence of HLA-DQB1*0501 in 48.30% of patients, followed by HLA-DQB1*0602 in 31.66%, both subtypes of the phenotype HLA-DQB1*01. Despite the prevalence of these alleles, we can not say that they are responsible for the lack of response to the Mitsuda antigen. We suggest further studies to confirm the results.

IFNG +874 T>A single nucleotide polymorphism is associated with leprosy among Brazilians

Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae, a low virulence mycobacterium, and the outcome of disease is dependent on the host genetics for either susceptibility per se or severity. The IFNG gene codes for interferon-γ (IFN-γ), a cytokine that plays a key role in host defense against intracellular pathogens. Indeed, single nucleotide polymorphisms (SNPs) in IFNG have been evaluated in several genetic epidemiological studies, and the SNP +874T>A, the +874T allele, more specifically, has been associated with protection against infectious diseases, especially tuberculosis. Here, we evaluated the association of the IFNG locus with leprosy enrolling 2,125 Brazilian subjects. First, we conducted a case-control study with subjects recruited from the state of São Paulo, using the +874 T>A (rs2430561), +2109 A>G (rs1861494) and rs2069727 SNPs. Then, a second study including 1,370 individuals from Rio de Janeiro was conducted. Results of the case-control studies have shown a protective effect for +874T carriers (OR(adjusted) = 0.75; p = 0.005 for both studies combined), which was corroborated when these studies were compared with literature data. No association was found between the SNP +874T>A and the quantitative Mitsuda response. Nevertheless, the spontaneous IFN-γ release by peripheral blood mononuclear cells was higher among +874T carriers. The results shown here along with a previously reported meta-analysis of tuberculosis studies indicate that the SNP +874T>A plays a role in resistance to mycobacterial diseases(AU)

[Comparative study between the Mitsuda test and the human leukocyte antigens in leprosy patients]. / Estudo comparativo entre reação de Mitsuda e antígenos leucocitários humanos em pacientes hansenianos.

In this study, we aimed to compare the Mitsuda skin test with the alleles HLA-DR2/HLA-DR3 and HLA-DQ1, in relation to the clinical forms of leprosy in 176 patients (50 TT, 50 LL and 76 B). The results obtained did not reveal any association between the Mitsuda reaction and the HLA alleles in the clinical forms isolated. However, when analyzed according to Mitsuda test response, a significant association was found between patients with negative Mitsuda reaction and HLA-DQ1 (p=0.002). No association was observed between positive Mitsuda reaction and the HLA-DR2/DR3 alleles. We concluded that the allele HLA-DQ1 has an important participation when there is no response to the Mitsuda test. We suggest that more specific studies should be developed on this allele.

Estudo comparativo entre reação de Mitsuda e antígenos leucocitários humanos em pacientes hansenianos / Comparative study between the Mitsuda test and the human leukocyte antigens in leprosy patients

Neste estudo, propomos comparar o teste cutâneo de Mitsuda e os alelos HLA-DR2/HLA-DR3 e HLA-DQ1 relacionados com as formas clínicas da hanseníase em 176 pacientes (50 TT, 50 LL e 76 B). Os resultados obtidos não revelaram associação entre reação de Mitsuda e os alelos HLA nas formas clínicas isoladas; no entanto, quando analisados de acordo com a resposta ao teste de Mitsuda, associação significativa foi encontrada entre os pacientes Mitsuda negativos e HLA-DQ1 (p=0,002). Não foi observada associação entre reação de Mitsuda positiva e alelos HLA-DR2/DR3. Concluímos que existe importante participação do alelo HLA-DQ1 na ausência de resposta ao teste de Mitsuda. Sugerimos estudos mais específicos para este alelo.

In this study, we aimed to compare the Mitsuda skin test with the alleles HLA-DR2/HLA-DR3 and HLA-DQ1, in relation to the clinical forms of leprosy in 176 patients (50 TT, 50 LL and 76 B). The results obtained did not reveal any association between the Mitsuda reaction and the HLA alleles in the clinical forms isolated. However, when analyzed according to Mitsuda test response, a significant association was found between patients with negative Mitsuda reaction and HLA-DQ1 (p=0.002). No association was observed between positive Mitsuda reaction and the HLA-DR2/DR3 alleles. We concluded that the allele HLA-DQ1 has an important participation when there is no response to the Mitsuda test. We suggest that more specific studies should be developed on this allele.

Identificação dos alelos HLA de classe I e classe II em pacientes co-infectados com hanseniase e aids / Identification of HLA alleles clas I and class II in co-infected patients with leprosy and aids

O complexo HLA tem sido amplamente estudado, na tentativa de elucidar os mecanismos que levam ao direcionamento da forma clínica na hanseníase. Foram observadas associações positivas dos alelos HLA-DR2 e HLA-DR3, com a forma tuberculóide (HT) e do alelo HLA-DQ1, com a forma virchoviana (HV). Em relação ao HIV os alelos de classe I, HLA-B35 e HLA-Cw4 parecem estar mais fortemente associados com a deterioração imunológica e com a aceleração da progressão para a aids e os alelos HLA-A1, HLA-B8, HLA-B27, HLA-Cw7 e os de classe II, HLA-DR3 e HLA-DQ2 com a progressão lenta da doença. Por não haver nenhum dado na literatura descrevendo a participação dos alelos HLA em indivíduos co-infectados com hanseníase e HIV, o presente estudo teve como objetivo avaliar a freqüência dos alelos HLA de Classe I e II (locus A, B, C, DR e DQ) em pacientes co-infectados, atendidos no Instituto Lauro de Souza Lima de Bauru. Foi possível observar que a presença de alelos descritos na literatura como associados com rápida progressão da aids parece não influenciar no espectro clínico da hanseníase. Embora a infecção pelo HIV cause profundos danos no sistema imune, não houve direcionamento para a forma virchoviana multibacilar como se poderia esperar. Estudos abrangendo maior casuística devem ser conduzidos para que os resultados sejam mais informativos uma vez que a co-infecção HIV/M.leprae é um evento importante em área endêmica para ambas as doenças.

Estudo de associação entre antígenos leucocitários humanos e doença de Jorge Lobo / Study of the association between human leukocyte antigens and Jorge Lobo's disease

A doença de Jorge Lobo é uma micose cutânea/subcutânea de evolução crônica, causada pelo fungo Lacazia loboi. Devido às características epidemiológicas e poucos estudos relacionados aos aspectos imunológicos dessa doença, o objetivo do trabalho foi investigar uma possível associação das especificidades HLA de classe II em 21 pacientes portadores da doença de Jorge Lobo, comparando com indivíduos sadios de mesma etnia. As tipificações HLA foram realizadas pelo método de PCR-SSP. O resultado não revelou qualquer tipo de associação entre os antígenos HLA e doença de Jorge Lobo. Embora sem significância estatística, foi observada a diminuição da freqüência do antígeno HLA-DR7 no grupo dos pacientes em relação aos controles (0 por cento x 18 por cento), sugerindo uma associação negativa (protetora) entre HLA-DR7 e doença de Jorge Lobo. Contudo, estudos devem ser continuados, objetivando melhor entendimento nos mecanismos envolvidos na suscetibilidade e/ou proteção dessa doença.

[Study of the association between human leukocyte antigens and Jorge Lobo's disease]. / Estudo de associação entre antígenos leucocitários humanos e doença de Jorge Lobo.

Jorge Lobo's disease is a cutaneous/subcutaneous mycosis with a chronic course, caused by the fungus Lacazia loboi. Considering its epidemiology and the few studies on immunological aspects of this disease, the objective of the present study was to investigate a possible association between HLA class II specificities in 21 Jorge Lobo's disease patients, by comparing them with healthy individual of the same ethnic group. HLA typing was performed using PCR-SSP method. The result did not show any association between HLA antigens and Jorge Lobo's disease. Although not statistically significant, a decreased frequency of HLA-DR7 was observed in the patients compared to the controls (0% x 18%). This suggests a negative association (protective) between HLA-DR7 and Jorge Lobo's disease. Further studies, however, are needed for a better understanding of the susceptibility and/or protection mechanisms involved.

Estudo Comparativo entre reação de mitsuda e fenotipagem HLA em pacientes hansenianos

Neste estudo propôs-se comparar o teste intradérmico de Mitsuda e os alelos HLA-DR2 /HLA -DR3 e HLA-DQ1 relacionados com as formas clínicas da hanseníase, visando contribuir para o delineamento de nova metodologia no auxílio prognóstico desta doença. Foram estudados 176 pacientes hansenianos (50 HT, 50 HV e 76 HD). A tipificação do HLA-DR e HLA -DQ foi determinada pela técnica de PCR/SSP e a reação de Mitsuda pela intradermorreação com leitura em 28 dias. Na forma HT os resultados demonstraram que a reação de Mitsuda foi positiva em todos os pacientes, sendo 16% positivo1+, 68% positivo2+ e 16% positivo3+. O diâmetro de induração variou entre 4,0 a 18,0mm, com valor médio de 7,5mm. A especificidade HLA-DR2 esteve presente em 28% dos pacientes deste grupo (24% HLA-DRB1*15 e 4% HLA-DRB1*16). A especificidade HLA-DR3 esteve presente em 16% dos pacientes (8% HLA-DRB1*17 e 8% HLA-DRB1*18), 2% apresentaram os alelos HLA-DR2 e HLA-DR3 simultâneamente, totalizando 46% da amostra estudada com o marcador. A forma HV apresentou a reação de Mitsuda negativa em todos os pacientes estudados. A especificidade do HLA-DQ1 esteve presente em 74% dos pacientes (34% HLA-DQB1*05, 28% HLA-DQB1*06 e 12% HLA-DQB1*05 e HLA-DQB1*06). No grupo HD, o padrão de leitura da reação de Mitsuda resultou em negativo em 48,7%, duvidoso 5,2%, positivo 1+ 30,3% e positivo 2+ 15,8%. O diâmentro da induração variou entre negativo a 7,5mm com valor médio de 2,4mm. Com relação aos alelos HLA, não foi possível realizar a comparação, por não se ter verificado após estudo de associação, nenhum alelo relacionado ao grupo HD. Realizou-se também análise não estratificada dos pacientes de acordo com a resposta ao teste de Mitsuda. Oitenta e cinco pacientes foram positivos para o teste de Mitsuda e destes, 43,5% possuíam o alelo HLA-DR2 ou HLA-DR3. Noventa e um pacientes tiveram reação de Mitsuda negativa, destes 65,9% apresentaram o alelo HLA-DQ1. Os dados obtidos neste estudo permitiram ...

Estudo comparativo entre reacao de Mitsuda e fenotipagem HLA em pacientes hansenianos / ?

Neste estudo propos-se comparar o teste intradermico de Mitsuda e os alelos HLA-DR2/HLA-DR3 e HLA-DQ1 relacionados com as formas clinicas da hanseniase, visando contribuir para o delineamento de nova metodologia no auxilio prognostico desta doenca. Foram estudados 176 pacientes hansenianos (50 HT, 50 HV e 76 HD). A tipificacao do HLA-DR e HLA-DQ foi determinada pela tecnica de PCR/SSP e reacao de Mitsuda pela intradermorreacao com leitura em 28 dias. Na forma HT os resultados demonstraram que a reacao de Mitsuda foi positiva em todos os pacientes, sendo 16 por cento positivo1+ 68 por cento positivo2+ e 16 por cento positivo3+. O diametro de induracao variou entre 4,0 a 18,0mm, com valor medio de 7,5mm. A especificidade HLA-DR2 esteve presente em 28 por cento dos pacientes deste grupo (24 por cento HLA-DRB1*15 e 4 porcento HLA-DRB1*16). A especificidade HLA-DR3 esteve presente 16 por cento dos pacientes (8 por cento HLA-DRB1*17 e 8 por cento HLA-DRB1*18), 2 por cento apresentaram os alelos HLA-DR2 e HLA-DR3 simultaneamente, totalizando 46 por cento da amostra estudada com o marcador. A forma HV apresentou a reacao de Mitsuda negativa em todos os pacientes estudados. A especificidade do HLA-DQ1 esteve presente em 74 por cento dos pacientes (34 por cento HLA-DQB1*05, 28 por cento HLA-DQB1*06 e 12 por cento HLA-DQB1*05 e HLA-DQB1*06). No grupo HD, o padrao de leitura da reacao de Mitsuda resultou em negativo em 48,7 por cento duvidoso 5,2 por cento positivo 1+ 30,3 por cento e positivo 2+ 15,8 por cento. O diametro da iduracao variou entre negativo a 7,5mm com valor medio de 2,4mm...

Estudo Comparativo entre reação de mitsuda e fenotipagem HLA em pacientes hansenianos / Comparative study between the mitsuda test and the HLA phenotype in leprosy patients

Neste estudo propôs-se comparar o teste intradérmico de Mitsuda e os alelos HLA-DR2 /HLA -DR3 e HLA-DQ1 relacionados com as formas clínicas da hanseníase, visando contribuir para o delineamento de nova metodologia no auxílio prognóstico desta doença. Foram estudados 176 pacientes hansenianos (50 HT, 50 HV e 76 HD). A tipificação do HLA-DR e HLA -DQ foi determinada pela técnica de PCR/SSP e a reação de Mitsuda pela intradermorreação com leitura em 28 dias. Na forma HT os resultados demonstraram que a reação de Mitsuda foi positiva em todos os pacientes, sendo 16% positivo1+, 68% positivo2+ e 16% positivo3+. O diâmetro de induração variou entre 4,0 a 18,0mm, com valor médio de 7,5mm. A especificidade HLA-DR2 esteve presente em 28% dos pacientes deste grupo (24% HLA-DRB1*15 e 4% HLA-DRB1*16). A especificidade HLA-DR3 esteve presente em 16% dos pacientes (8% HLA-DRB1*17 e 8% HLA-DRB1*18), 2% apresentaram os alelos HLA-DR2 e HLA-DR3 simultâneamente, totalizando 46% da amostra estudada com o marcador. A forma HV apresentou a reação de Mitsuda negativa em todos os pacientes estudados. A especificidade do HLA-DQ1 esteve presente em 74% dos pacientes (34% HLA-DQB1*05, 28% HLA-DQB1*06 e 12% HLA-DQB1*05 e HLA-DQB1*06). No grupo HD, o padrão de leitura da reação de Mitsuda resultou em negativo em 48,7%, duvidoso 5,2%, positivo 1+ 30,3% e positivo 2+ 15,8%. O diâmentro da induração variou entre negativo a 7,5mm com valor médio de 2,4mm. Com relação aos alelos HLA, não foi possível realizar a comparação, por não se ter verificado após estudo de associação, nenhum alelo relacionado ao grupo HD. Realizou-se também análise não estratificada dos pacientes de acordo com a resposta ao teste de Mitsuda. Oitenta e cinco pacientes foram positivos para o teste de Mitsuda e destes, 43,5% possuíam o alelo HLA-DR2 ou HLA-DR3. Noventa e um pacientes tiveram reação de Mitsuda negativa, destes 65,9% apresentaram o alelo HLA-DQ1. Os dados obtidos neste estudo permitiram concluir que a utilização isolada da tipificação HLA não constitui uma ferramenta adequada para auxílio no prognóstico da doença, embora o emprego em conjunto das duas metodologias poderão complementar o diagnóstico da hanseníase

Estudo de associação entre antígenos HLA e reação hansênica tipo 1 ulcerada / Study of the association of HLA antigens and ulcerated type 1 leprotic reaction

Embora existam associações importantes entre antígenos HLA e várias doenças, os mecanismos de suscetibilidade permanecem obscuros e há evidências de que não esteja envolvido o mesmo loco gênico e nem seja o mesmo mecanismo que atue nas diversas doenças. Estudos de associação com pacientes que apresentam reações hansênicas, em especial naqueles com reações hansênicas tipo 1 ulcerada, não foram realizadas até hoje. O objetivo era investigar uma possível associação entre antígenos HLA da classe II e reação hansênica tipo 1 ulcerada. Antígenos HLA-A, B, DR e DQ foram determinados em 12 pacienes hanseniasnos caucasóides, sendo 11 com hanseníase tuberculóide reacional (MHTR) e um com hanseníase dimorfa reacional (MHDR). O grupo controle doi constituído por amostra da população caucasóide do Estado de São Paulo. A comparação das freqüências dos antígenos HLA entre pacientes e grupos controle não evidenciou nenhum tipo de associação. Entretanto, foi observado aumento significante na freqüência do antígeno HLA-DR2 (63,3 vs 19 por cento, p<0,05). Os resultados obtiidos não mostraram qualquer tipo de associação entre antígenos HLA e reação hansênica tipo 1 ulcerada, mas sugerem uma função dos genes do complexo HLA no direcionamento da forma clínica da hanseníase