Schiefer counter: An alternative method for clonogenic assay evaluation.

INTRODUCTION: Clonogenic assay evaluates the potential of cells to undergo division or generate clones following treatment with a chemical or other agent, thereby allowing the evaluation of cytotoxic and/or antiproliferative effects. Clonogenic assay analysis using traditional methods tends to be time-consuming and yield inconsistent results, whereas results from analyses conducted using automated image processing methods may be misleading or subject to misinterpretation. Thus, the aim of this work was to validate and demonstrate the applicability of a recently developed software. METHODS: Repeatability of measurements was evaluated by comparing results from 10 replicate images from a single well. To evaluate the viability of the software, results were compared with those obtained from manual counting, crystal violet optical density, and up-to-date automated methods. A clonogenic index was experimentally developed using the individual area occupied by colonies, while clone stratification was used to differentiate between antiproliferative and cytotoxic effects. RESULTS: The developed software showed to be a reliable and consistent tool for clonogenic assay evaluation, presenting a repeatability mean error of 0.79% for the number of colonies and 0.89% for the total area of colonies, as well as exhibiting a significant correlation (p < 0.05) with results obtained from widely adopted gold standard methods. The software was also able to detect an appropriate dose-dependent effect as well as a predominant cytotoxic effect of vincristine on MCF-7 cells and calculate the clonogenic index. DISCUSSION: Therefore, this software is adequate for the analysis of clonogenic assay images, differentiating between cytotoxic and antiproliferative trends.

Full-length genomic and molecular characterization of Canine parvovirus in dogs from North of Brazil.

With the objective of characterizing Canine parvovirus (CPV) from some suspected fecal samples of dogs collected from the Veterinarian Hospital in Belém city, five positive samples were found by PCR assay and an update molecular characterization was provided of the CPV-2 circulation in Belém. Through sequencing of the complete DNA sequences (NS1, NS2, VP1, and VP2 genes), the CPV-2 strain was identified as CPV-2b (Asn426Asp) circulating in Belém. The CPV-2b strain with a different change at the position Tyr324Leu was detected in all samples assessed and thus reported for the first time for the scientific community. Phylogenetic analysis indicated that Belém CPV-2b and CPV-2a strains would be related to a cluster with samples after the 1990s, suggesting that CPV-2b in Belém originated from CPV-2a circulating in Brazil after the 1990s. Potential recombination events were analyzed using RDP4 and SplitsTree4; therefore, results suggest that CPV-2 sequences here described were not potentially recombination events. Continuous monitoring and molecular characterization of CPV-2 samples are needed not only to identify possible genetic and antigenic changes that may interfere with the effectiveness of vaccines but also to bring a better understanding of the mechanisms that drive the evolution of CPV-2 in Brazil.

p-Cresyl sulfate affects the oxidative burst, phagocytosis process, and antigen presentation of monocyte-derived macrophages.

Immune system dysfunction is a common condition in chronic kidney disease (CKD). The present study investigated the effect of p-Cresyl sulfate (pCS) on human cell line U937 monocyte-derived macrophages (MDM) activity. MDM (1×106 cells/mL) were incubated with pCS (10, 25, or 50µg/mL), with or without lipopolysaccharide (LPS; 25ng/mL) and then evaluated NO production, phagocytosis and antigen-presenting molecules expression (HLA-ABC, HLA-DR, CD80 and CD86). All analyses were performed by flow cytometry. All pCS concentrations were able to increase NO production (49±12.1%, 39.8±7.75%, 43.7±11.9%, respectively) compared to untreated cells (4.35±3.34%) after 6h incubation but only the lowest concentration increased this production after 12h (82.9±8.6%, 61±7.2%, 40.8±11.7%). Combined with LPS, the same results were observed. Regarding to phagocytosis, all concentrations were able to induce bead engulfment (35.4±2.71%, 30±3.04%, 23.28±4.58%). In addition, pCS (50µg/mL) was able to increase HLA-ABC and CD80 expression, showed a slight effect on HLA-DR expression and, no difference in basal CD86 levels. pCS can induce an increased oxidative burst and phagocytosis by human macrophages while no modulation of HLA-DR or CD86 expression was induced. Together, these results suggest that pCS induces macrophage activation but interfere in antigen processing, leading to a failure in adaptive immune response in CKD.

Phylogeography and evolutionary history of rodent-borne hantaviruses.

Hantavirus (Family Bunyaviridae) are mostly associated to rodents and transmitted to man by inhalation of aerosolized infected excreta of these animals. The human infection by hantaviruses can lead to severe diseases such as hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) in Asia and Europe, and pulmonary syndrome (HPS) in the Americas. To determine the origin, spreading and evolutionary dynamics of rodent-borne hantaviruses, 190 sequences of nucleoprotein (N) of hantaviruses identified in 30 countries, from 1985 to 2010, were retrieved from the GenBank and analyzed using the BEAST program. Our evolutionary analysis indicates that current genetic diversity of N gene of rodent-borne hantaviruses probably was originated around 2000 years ago. Hantavirus harbored by Murinae and Arvicolinae subfamilies, probably, were originated in Asia 500-700 years ago and later spread toward Siberia, Europe, Africa and North America. Hantavirus carried by Neotominae subfamily, probably, emerged 500-600 years ago in Central America and spread toward North America. Finally, hantaviruses associated to Sigmodontinae occurred in Brazil 400 years ago and were, probably, originated from Neotominae-associated virus from northern South America. These data offer subsidies to understand the time-scale and worldwide dissemination dynamics of rodent-borne hantaviruses.

Bipartição escrotal associada à má formação prepucial em ovino Morada Nova: relato de caso / Scrotal bipartition associated with preputial malformation in sheep Morada Nova: case report

As alterações anatômicas do aparelho reprodutor masculino de ovinos são pouco relatadas, especialmente a condição de bipartição escrotal. Devido à importância do esclarecimento sobre esta alteração anatômica, objetivou-se relatar o caso de um ovino da raça Morada Nova que apresentava bipartição escrotal associada à má formação prepucial. Observou-se que essa alteração pode ocorrer como condição de adaptabilidade a climas tropicais.

The anatomical changes in the male reproductive system of sheep are rarely described, especially the scrotal bipartition condition. Due to the importance of clarification of this anatomical change, we aimed to describe a case of a Morada Nova sheep that had scrotal bipartition associated with preputial malformation. It was observed that this change may occur as a adaptability condition to tropical climates.

Atividade in vitro do extrato hidroalcoólico de Lippia sidoides Cham sobre larvas de terceiro estádio de nematódeos gastrintestinais (família Trichostrongylidae) de caprinos / In vitro activity of the hydroalcoholic extract of Lippia sidoides Cham on buoyant larvae of third-stage gastrointestinal nematodes (family Trichostrongylidae) of goats

Avaliou-se in vitro a atividade larvicida do extrato hidroalcóolico de alecrim pimenta (Lippia sidoides Cham) sobre larvas de terceiro estádio de nematoides gastrintestinais de caprinos. Os resultados encontrados demonstraram que a concentração de 500 mg mL-1 apresentou atividade efetiva e com capacidade de ação de 95,89%, demonstrando desta forma a possibilidade do uso terapêutico anti-helmíntico para esse extrato.

The in vitro larvicidal activity of the hydroalcoholic extract of rosemary pepper (Lippia sidoides Cham) was evaluated on buoyant larvae of third-stage gastrointestinal gastrointestinal nematodes of goats. The results demonstrated that the concentration of 500 mg mL-1 presented effective activity, with a capacity of action of 95.89%, thus demonstrating the possibility of anthelmintic therapeutic use for this extract.

Avaliação in vitro do extrato hidroalcoólico (EHA) de alecrim pimenta (Lippia sidoides Cham. ) sobre o desenvolvimento de ovos de nematódeos gastrointestinais (Trichostrongylidae) / In vitro evaluation of alecrim pimenta (Lippia sidoides Cham. ) hydroalcoholic extract (HAE) on the development of gastrointestinal nematode (Trichostrongylidae) eggs

Atualmente a fito medicina vem sendo usada no controle de diversas doenças parasitárias particularmente as parasitoses gastrointestinais. Objetivou-se com este estudo avaliar a eficácia do extrato hidroalcoólico (EHA) de Lippia sidoides Cham sobre o desenvolvimento de ovos de nematódeos gastrointestinais. O efeito ovicida foi determinado através de análise probabilística, modelo logístico, utilizados os softwares R versão 2.2.1 e EPI6. Foram obtidos ovos embrionados em fezes de cabras naturalmente infectadas com nematóides Trichostrongylidae e o número de ovos fecais foi determinado usando-se a técnica modificada de McMaster. Cinquenta μL da suspensão contendo 40 ovos foram transferidas a placas de poliestireno e incubadas com 12 concentrações diferentes do EHA sendo avaliada durante 72 horas a temperatura ambiente. Os resultados demonstraram diferentes eficácias para o fito medicamento com menor taxa de desenvolvimento de ovos na concentração de 500 mg mL-1 . Conclui-se que o EHA pode ter papel importante sobre o desenvolvimento in vitro de ovos de nematóides gastrintestinais, revelando atividade ovicida.

Phytomedicine has been currently used in the control of several parasitic diseases, particularly gastrointestinal ones. The aim of this study was to evaluate the efficacy of the hydroalcoholic extract (HAE) from Lippia sidoides Cham. on the development of gastrointestinal nematode eggs. The ovicidal effect was determined through probabilistic analysis, logistic model, by using the programs R version 2.2.1 and Epi InfoTM 6. Embryonated eggs were obtained from feces of goats naturally infected with Trichostrongylidae nematodes and the fecal egg count was determined by using the modified McMaster technique. Fifty microliters of the suspension containing 40 eggs were transferred to polystyrene plates and incubated with 12 different HAE concentrations, and evaluations were performed during 72h at room temperature. The results demonstrated different efficacy of extracts, with lower egg development rate at 500 mg mL-1. In conclusion, HAE may play an important role on the in vitro development of gastrointestinal nematode eggs, indicating ovicidal activity.

Antimicrobial activity of alkaloidal fraction from barks of Himatanthus lancifolius.

The alkaloidal fraction from Himatanthus lancifolius barks demonstrated a broad-spectrum in vitro antimicrobial activity for most of the Gram (+) and Gram (-) tested microorganisms.

Morfo-anatomia das folhas da nespereira Eriobotrya japonica Lindl., Rosaceae / Leaf morpho-anatomy of loquat Eriobotrya japonica Lindl., Rosaceae

Eriobotrya japonica, Rosaceae, é uma espécie conhecida popularmente como nespereira, cujas folhas são empregadas na medicina tradicional como agente hipoglicemiante e no tratamento de doenças da pele. O presente trabalho objetivou caracterizar morfo-anatomicamente as folhas, a fim de fornecer subsídios farmacognósticos ao controle de qualidade da droga vegetal e taxonômicos à família. O material botânico foi fixado e submetido às técnicas usuais de microscopia ótica e eletrônica de varredura. As folhas são simples, alternas, lanceoladas, de limbo inteiro e margem denteada. A epiderme foliar é uniestratificada e revestida por cutícula espessada e levemente estriada. Tricomas tectores unicelulares longos são encontrados em ambas as faces, sendo numerosos na abaxial. A folha é hipoestomática, revelando estômatos anomocíticos. O mesofilo é dorsiventral e os feixes vasculares de pequeno porte são colaterais e podem apresentar extensão de bainha. A nervura principal possui formato biconvexo e o pecíolo circular, sendo ambos percorridos por feixes vasculares anficrivais. Foram observados idioblastos contendo cristais de oxalato de cálcio, mucilagem e compostos fenólicos.

The leaves of Eriobotrya japonica , Rosaceae, popularly known as loquat, are used in folk medicine for their hypoglycemic properties and to treat cutaneous diseases. The aim of this work was to study the leaf morpho-anatomy of the drug for pharmacognostic and taxonomic purposes. The botanical material was prepared for the usual optical and scanning microtechniques. The leaves are simple, alternate and lanceolate, with entire blade and dentate margins. The epidermis is uniseriate and coated by a thick and slightly striated cuticle. Both surfaces are hairy, particularly the lower, with long unicellular non-glandular trichomes. Anomocytic stomata occur exclusively on the lower surface. The mesophyll is dorsiventral and the small bundles are collateral and may present sheath extensions. The midrib has got biconvex shape and the petiole round contour, both showing amphicrival bundles. Idioblasts containing calcium oxalate crystals, mucilage and phenolic compounds were observed.

Morphological aspects of the capybara stomach (Hydrochaeris hydrochaeris): gross and microscopic structure.

The digestive system of the capybara has been investigated because of its coprofagia habits, important for their absorptive activity. These species present differences in terms of gastrointestinal morphological characters when compared with other rodents. Macroscopiclly, the stomach of the capybara is constituted of the following parts: cardiac, pyloric, body, fundic and gastric diverticulum. It presents two curvatures, one big and another small. Externally, the presence of gastric bands (tenias) is observed. With regards to the volumetric view, the gastric capacity varies from 850 to 2010 ml, with an average of 1498.57 ml. So, the stomach of this animal can be classified as a simple stomach, in the format of a curved sack and similar to an inverted letter 'J'. The gastric mucous membrane presents a surface filled by numerous tortuous gastric folds and longitudinally distributed along all its extension. The mucous tunic also possesses recesses located among the successive gastric folds, which were denoted as gastric parts with numerous openings described as gastric pits. In the cardiac part, a glandular epithelium with cardiac glands is noticed containing a lot of parietal and mucous neck cells. The fundic part, body and gastric diverticulum contain proper gastric glands with main, parietal and mucous neck cells. Finally, the pyloric part has pyloric glands with two cellular types, mucous neck and parietal cells.

Os arranjos configurados pela artéria celíaca no pato doméstico (Cairina moshata) / The arrangements configured by the coeliac artery in the domestic duck (Cairina moshata)

Mediante esta pesquisa, estudamos os arranjos configurados pela artéria celíaca em 30 patos domésticos Cairina moshata, sendo 20 machos e 10 fêmeas. Foi realizada a injeçäo de látex corado no sistema arterial e depois as peças foram fixadas em soluçäo aquosa de formol a 10 por cento para posterior dissecaçäo dos vasos arteriais. A artéria celíaca nasce isoladamente da aorta descendente e fornece a artéria proventricular dorsal e a artéria esofágica e a seguir continua-se como tronco de dois outros ramos: esquerdo e direito. O ramo esquerdo emite um vaso que vasculariza a porçäo ventral do proventrículo (artéria proventricular ventral) e porçäo terminal do esôfago e, a seguir, fornece 3 ramos que vascularizam a face lateral esquerda e a margem cranial da moela ou ventrículo, bem como a junçäo pilórica na sua porçäo cranial. Do vaso destinado à margem cranial da moela, surgem artérias ao lobo hepático esquerdo em número de 1 em 5 preparaçöes (16,6 por cento ñ 6,8), 2 em 14 peças (46,66 por cento ñ 9,1) ou 3 em 8 peças (26,66 por cento ñ 8,1). O ramo direito envia inicialmente as artérias esplênicas cujo número foi de 2 em 6 preparaçöes (20 por cento ñ 7,3), 3 em 12 peças (40 por cento ñ 8,9), 4 em 8 peças (26,6 por cento ñ 8,1), 5 em 3 peças (10 por cento ñ 5,5) e 6 em 1 preparaçäo (3,33 por cento ñ 3,3). Em seguida, emite colaterais ao lobo hepático direito que foram em número de 2 em 21 preparaçöes (70 por cento ñ 8,4) ou 3 em 9 preparaçöes (30 por cento ñ 8,4). Ainda, o ramo direito emite artérias endereçadas ao ceco esquerdo em número de 2 em 17 preparaçöes (56,66 por cento ñ 9,1) ou 3 em 13 casos (43,33 por cento ñ 9,1). O ramo direito origina ainda 3 vasos endereçados à face lateral direita da moela (ventrículo), à margem caudal e à junçäo pilórica em sua porçäo mais caudal. A seguir, o ramo direito da artéria celíaca continua-se como artéria parncreaticoduodenal que supre o pâncreas e as porçöes ascendente e descendente do duodeno

Os arranjos configurados pelas artérias mesentéricas cranial e caudal no pato doméstico (Cairina moshata) / The arrangements configured by the cranial and caudal mesenteric arteries in the domestic duck (Cairina moshata)

Mediante esta pesquisa estudamos os arranjos configurados pelas artérias mesentéricas cranial e caudal em 30 patos domésticos, 20 machos e 10 fêmeas. Foi realizada a injeçäo de látex 650 corado no sistema arterial e a seguir as peças foram fixadas em soluçäo aquosa de formol a 10 por cento para posteriormente serem dissecadas. A artéria mesentérica cranial nasce como um vaso ímpar da aorta descendente à altura da 6ª e 7ª costelas, em situaçäo imediatamente caudal à artéria celíaca. Junto à junçäo íleo-ceco-cólica, subdivide-se basicamente em 3 ramos: o primeiro emite um vaso destinado ao colonreto, anastomosando-se com a artéria mesentérica caudal. O segundo ramo se comporta como tronco para as artérias jejunais, sendo que o número delas varia de 8 a 20. Finalmente, o terceiro ramo destina-se às porçöes principal e final do ceco direito e também ao íleo, vascularizando-os. No atinente ao comportamento da artéria mesentérica caudal, observamos que ela nasce como um vaso ímpar, a partir da aorta descendente, à altura das porçöes caudais dos rins. A artéria mesentérica caudal, na totalidade das peças examinadas, divide-se em 2 ramos: um cranial, que, por sua vez, emite 2 vasos menores para o mesorreto e um ramo caudal, que vasculariza a porçäo terminal do reto, bolsa cloacal e a cloaca

Pesquisa anatômica da glândula pineal em capivaras (Hydrochoerus hydrochoeris) / Anatomical study of the pineal gland in capybara (Hydrochoerus hydrochoeris)

A glândula pineal foi estudada macro e microscopicamente em 19 capivaras (Hydrochoerus hydrochoeris) jovens e adultas, fêmeas e machos. A pineal, presente em todos os espécimes, estava localizada entre o cérebro e o cerebelo, e era formada por uma base com dois pedúnculos, uma haste e um ápice. A glândula localizava-se no teto do III ventrículo, próximo ao colículo rostral, mostrando-se esbranquiçada ou acastanhada. O ápice continha uma cavidade. O comprimento médio da glândula na base foi de 1,3 mm; 1,2 mm; 2,0 mm na sua haste e ápice respectivamente. Revestida por uma cápsula de tecido conjuntivo contendo, pelo menos em parte do seu contorno, vasos sangüíneos, o parênquima pineal mostrou pinealócitos com grânulos nucleares e células intersticiais

A segmentaçäo arterial do baço da capivara (Hydrochoerus hydrochoeris) / The arterial segments in capybara spleen (Hydrochoerus hydrochoeris)

Os autores estudaram, através do método da dissecaçäo, a ramificaçäo da artéria esplênica no baço de 28 capivaras (Hydrochoerus hydrochoeris), jovens e adultas, machos e fêmeas. O número de segmentos arteriais da capivara varia de 5 a 16, mais freqüentemente 10. O número de lobos no baço varia de 3 a 7. Existe uma correlaçäo entre lobos e segmentos. Um baço acessório aparece em 21,4 por cento dos casos

Artérias e segmentos anátomo-cirúrgicos da glândula adrenal em fetos de búfalos (Bubalus bubalis) / Arteries and anatomic-surgical segments of the adrenal glands in fetuses of buffaloes (Bubalus bubalis)

As artérias e os segmentos anátomo-cirúrgicos das glândulas adrenais em 30 fetos de búfalos foram estudados mediante o preenchimento do sistema arterial de cada animal com látex-Neoprene corado e dissecaçäo. Verificou-se que à direita, a glândula é irrigada por nove vasos diferentes, e à esquerda por oito fontes diversas. O número de segmentos anátomo-cirúrgicos variou de cinco a 11, sendo que à direita o número mais freqüente foi de três (60,0 por cento) e à esquerda três ou quatro (63,3 por cento)

Pesquisa anatômica sobre a ramificaçäo e a disposiçäo das artérias e veias da placenta de bovinos azebuados / Patterns of branching of the placental vessels in Zebu bovines

A ramificaçäo e a disposiçäo das artérias e veias placentárias foram estudadas em 20 vacas da raça Nelore. Uma anastomose entre as duas artérias do funículo umbilical aparece em 75 por cento dos casos (70 por cento única e 5 por cento dupla). Os tipos de distribuiçäo vásculo-cotiledonário foram baseados nos arranjos das artérias e veias nas suas relaçöes com os cotilédones. Um cotilédone suprido por uma única artéria é drenado por múltiplas veias e, em poucos casos, as artérias e veias suprem e drenam respectivamente cotilédones dos cornos uterinos gestante e näo gestante

Distribuiçäo da veia porta no fígado da capivara (Hydrochoerus hydrochoeris) / Distribution of the portal vein in the capybara (Hydrochoerus hydrochoeris)

A veia porta no fígado da capivara divide-se em dois ramos, um direito e outro esquerdo. O direito fornece vasos destinados aos lobos medial, lateral e caudato (processo caudato), com os dois últimos em tronco (57, 1 por cento), ou apenas estes componentes (42,9 por cento). O esquerdo oferece vasos aos lobos lateral, medial e quadrado (57,1 por cento), estando os dois últimos em tronco, ou emite antes desta formaçäo ramo para o lobo medial direito (42,9 por cento). A veia porta, antes de sua divisäo inicial, recebe veias da vesícula biliar, uma (71 por cento), duas (14,2 por cento) ou três (14,2 por cento)

Veia cava caudal e óstios das veias hepáticas em bovinos da raça Nelore / The caudal vena cava and orifices of the hepatic veins in Nelore bovines

O estudo a fresco em 100 fígados de bovinos, machos, adultos, da raça Nelore, oriundos de e abatidos em Araçatuba (SP), permitiu-nos observar que o trato da veia cava caudal, em correspondência ao órgäo em questäo, varia de 12 cm a 27 cm, com uma média de 19,9 cm; a distância entre óstios das veias hepáticas direita e intermédia no trato varia de 1,5 cm a 9,0 cm, com 5,3 cm em média; o diâmetro do trato da veia cava caudal, em sua coincidência com o fígado, oscila entre 5 cm e 12,5 cm, alcançando 8,8 cm em média; os óstios das veias hepáticas menores säo contados entre 12 e 35, com maior frequência de 17 (13 por cento)

Sistema excretor do fígado de veados (Manzana americana, Blastocerus bezoarticus e Manzana simplicicornis). I. Sistematizaçäo do ramus principalis dexter / Excretory system of the liver in deers (Manzana americana, Blastocerus bezoarticus and Manzana simplicicornis). I. Ramus principalis dexter

A sistematizaçäo do ramus principalis dexter do sistema excretor do fígado foi estudada em 06 veados mateiros (Manzana americana), 01 veado catingueiro (Manzana simplicicornis) e 01 veado do rabo branco (Blastocerus bezoarticus). Foi utilizado látex Neoprene corado para o preenchimento das vias biliares, e o método empregado para a evidenciaçäo dos coletores foi o da dissecaçäo, realizada após a fixaçäo das peças com soluçäo aquosa de formol a 10 por cento. Nas três espécies estudadas o ductus choledocus resulta da reuniäo do ramus principalis dexter e do ramus principalis sinister, sem a participaçäo do ductus cysticus, pois estes animais näo possuem vesícula biliar. Nas três espécies, participam do sistema do ramus principalis dexter, sob diversos arranjos, o ramus medialis lobi dextri, o ramus dorsalis lobi dextri, o ramus processi caudati e o ramus lateralis lobi dextri

The distribution of the billiary ducts in wolves (Cerdocyon thons and Chrysocyon brachyurus)

O estudo da distribuiçäo extra e intraparenquimal dos ductos biliares dos raros "lobos brasileiros" um exemplar de "lobo guará Chrysocyon brachyurus" e 3 exemplares de "cachorro do mato" Cerdocyon thons, revelou a presença do ducto hepático, no Chrysocyon brachyurus, porém, o mesmo estava ausente nos 3 animais de outra espécie, uma vez que o ductus hepaticus dexter e o ductus hepaticus sinister convergem para o ductus cysticus (triconvergência). Um arranjo variável na distribuiçäo de outros ductos biliares foi observado nos 4 animais estudados. As semelhanças e diferenças entre estes achados com o cäo doméstico sem raça definida, Pastor Alemäo e Pequinês também estäo indicados