ABSTRACT
We have investigated the presence of genomic and replicative RNA strands of hepatitis C virus in liver and serum. Eleven patients with proven chronic hepatitis C, received Interferon a2a 4,5 MU, three times a week during six months. RT-PCR was used with sense primer to detect the replicative strand and an antisense primer to identify genomic strand. Before treatment, genomic strands were present in liver and serum of all patients. Replicative strands were present in liver and serum in five and six cases, respectively. Seven out of eleven responded to treatment. In responders, genomic strands were absent in liver of 3 cases (43%) and replicative strands in liver of 4 (57%). In plasma genomic and replicative strands were absent in 5 (71%) and 7 (100%), respectively. In all non responders, genomic strands in liver and plasma remained present. Replicative strands in liver and plasma were present in 100% and 25%, respectively. Knodell score improved in 5 out of 7 responders and remained unchanged in 3 out of 4 non responders. In 2 out of 4 responders with genomic and replicative strands in liver, Knodell score remained unchanged or worse. In all non responders, genomic and replicative strands in liver were present and Knodell score remained unchanged or worse. Genomic and replicative strands in plasma tended to be negative after treatment in responders. Genomic strands in plasma remained present in non responders. Conversely, genomic and replicative strands in liver were present in all non responders. It seems to exist a relationship between genomic and replicative strands in liver and the same or worse Knodell score. After a follow up, it will be possible to determined whether responders who still present viral RNA in liver would be prone to a relapse.
Subject(s)
Genome, Viral , Hepacivirus/genetics , Hepatitis C/virology , RNA, Viral/analysis , Adolescent , Adult , Base Sequence , Female , Hepacivirus/physiology , Hepatitis C/blood , Hepatitis C/therapy , Humans , Interferons/therapeutic use , Liver/virology , Male , Middle Aged , Molecular Sequence Data , Virus ReplicationABSTRACT
En este ensayo se trató de correlacionar la evolución clínica e histológica de un grupo de pacientes tratados con IFN, con la presencia del RNA genómico y replicativo del HCV en plasma y tejido hepático. Se estudiaron 11 pacientes con hepatitis crónica "C" diagnosticada por elevación de transaminasas durante los últimos 6 meses, anti-HCV positivo "(Elisa II)", y cuadro histológico compatible. En todos ellos se efectuó biopsia hepática y extracción de sangre en paralelo, inmediatamente antes y después de finalizar el tratamiento con 4.5 millones de IFN Alfa2a administrado 3 veces por semana, durante 6 meses. El tecijo hepático se almacenó a-80§c y el plasma a-20§c hasta su procesamiento. La extracción de RNA se realizó a partir de 100microliter de plasma y de 20mg de tejido hepático con isotiocianato de guanidinio (Chomcznski). La transcripción reversa se llevó a cabo "primers" sense o antisense para detectar la hélice replicativa (-) o genómica (+) respectivamente. El cDNA de la región 5' no codificante fue amplificado por el sistema "nested". Antes del tratamiento los 11 pacientes evidenciaron la presencia de la hélice genómica en tecijo hepático y plasma. En cambio la hélice replicativa se detectó en 5 casos en hígado, 7 pacientes se revelaron como respondedores y 4 como no respondedores. En los pacientes respondedores las hélices genómica y replicativa en hígado desaparecieron en un 43 por ciento y 57 por ciento respectivamente, y en plasma se observó un descenco del 71 por ciento para la hélice genómica y de un 100 por ciento para la hélice replicativa. En los 4 pacientes no respondedores la hélice genómica permaneció en tecijo hepático y plasma, en cambio la replicativa se mantuvo en tejido hepático y se negativizó en un 75 por ciento en plasma. El índice de Knodell, que determina el estadío histológico, disminuyó en 5 de lo 7 respondedores y permaneció igual en 3 de los 4 no respondedores...
Subject(s)
Adolescent , Adult , Middle Aged , Humans , Male , Female , Genome, Viral , Hepacivirus/genetics , Hepatitis C/genetics , RNA/blood , Base Sequence , Biopsy, Needle , Chronic Disease , Liver/pathology , Hepacivirus/physiology , Hepatitis C/pathology , Hepatitis C/therapy , Interferons/therapeutic use , Molecular Sequence Data , Polymerase Chain Reaction , Transcription, Genetic , Virus ReplicationABSTRACT
We have investigated the presence of genomic and replicative RNA strands of hepatitis C virus in liver and serum. Eleven patients with proven chronic hepatitis C, received Interferon a2a 4,5 MU, three times a week during six months. RT-PCR was used with sense primer to detect the replicative strand and an antisense primer to identify genomic strand. Before treatment, genomic strands were present in liver and serum of all patients. Replicative strands were present in liver and serum in five and six cases, respectively. Seven out of eleven responded to treatment. In responders, genomic strands were absent in liver of 3 cases (43
) and replicative strands in liver of 4 (57
). In plasma genomic and replicative strands were absent in 5 (71
) and 7 (100
), respectively. In all non responders, genomic strands in liver and plasma remained present. Replicative strands in liver and plasma were present in 100
and 25
, respectively. Knodell score improved in 5 out of 7 responders and remained unchanged in 3 out of 4 non responders. In 2 out of 4 responders with genomic and replicative strands in liver, Knodell score remained unchanged or worse. In all non responders, genomic and replicative strands in liver were present and Knodell score remained unchanged or worse. Genomic and replicative strands in plasma tended to be negative after treatment in responders. Genomic strands in plasma remained present in non responders. Conversely, genomic and replicative strands in liver were present in all non responders. It seems to exist a relationship between genomic and replicative strands in liver and the same or worse Knodell score. After a follow up, it will be possible to determined whether responders who still present viral RNA in liver would be prone to a relapse.
ABSTRACT
En este ensayo se trató de correlacionar la evolución clínica e histológica de un grupo de pacientes tratados con IFN, con la presencia del RNA genómico y replicativo del HCV en plasma y tejido hepático. Se estudiaron 11 pacientes con hepatitis crónica "C" diagnosticada por elevación de transaminasas durante los últimos 6 meses, anti-HCV positivo "(Elisa II)", y cuadro histológico compatible. En todos ellos se efectuó biopsia hepática y extracción de sangre en paralelo, inmediatamente antes y después de finalizar el tratamiento con 4.5 millones de IFN Alfa2a administrado 3 veces por semana, durante 6 meses. El tecijo hepático se almacenó a-80ºc y el plasma a-20ºc hasta su procesamiento. La extracción de RNA se realizó a partir de 100microliter de plasma y de 20mg de tejido hepático con isotiocianato de guanidinio (Chomcznski). La transcripción reversa se llevó a cabo "primers" sense o antisense para detectar la hélice replicativa (-) o genómica (+) respectivamente. El cDNA de la región 5 no codificante fue amplificado por el sistema "nested". Antes del tratamiento los 11 pacientes evidenciaron la presencia de la hélice genómica en tecijo hepático y plasma. En cambio la hélice replicativa se detectó en 5 casos en hígado, 7 pacientes se revelaron como respondedores y 4 como no respondedores. En los pacientes respondedores las hélices genómica y replicativa en hígado desaparecieron en un 43 por ciento y 57 por ciento respectivamente, y en plasma se observó un descenco del 71 por ciento para la hélice genómica y de un 100 por ciento para la hélice replicativa. En los 4 pacientes no respondedores la hélice genómica permaneció en tecijo hepático y plasma, en cambio la replicativa se mantuvo en tejido hepático y se negativizó en un 75 por ciento en plasma. El índice de Knodell, que determina el estadío histológico, disminuyó en 5 de lo 7 respondedores y permaneció igual en 3 de los 4 no respondedores...(AU)