Hemocompatibility and biofunctionality of two poly(2-(dimethylamino)ethyl methacrylate-co-poly(ethyleneglycol) copolymers.

To mask the antigenic sites of cells for cell therapies, especially for blood transfusion, we investigated the hemocompatibility of two poly(2-(dimethylamino)ethyl methacrylate-co-poly(ethyleneglycol) compared with that of the homopolymer without PEG. Our strategy relies on the potential ability of these copolymers to self-assemble at the erythrocyte surface. The cationic sequence of the copolymer should be able to interact with the glycocalyx by ionic interaction. The other sequence, based on a polyethyleneglycol moiety, should prevent both nonspecific interactions and specific recognition of the biological surface. The hemocompatibility of these copolymers was assessed by analyzing alterations in human erythrocyte membrane viscoelasticity, morphology, granularity, and aggregation. Their properties to mask ABO system and three erythrocyte glycophorin sites were investigated. No alterations in the erythrocyte morphology were observed by confocal microscopy. On the other hand, a partial masking of different specific glycophorin sites leads to future optimization of the macromolecular structures of these functionalized copolymers.

Cold-agglutinin hemolytic diseases, a rheo-optical study.

The aim of this study was to analyze the strength of red blood cells agglutination, induced by autoantibodies in patients with Cold-Agglutinin Hemolytic Disease (CAHD), and the hemorheological profile (deformability and osmotic fragility) by the utilization of rheo-optical techniques. The strength of the antigen-antibody reaction was approached by the work required to dissociate mechanically red blood cells agglutinates. It is focused on the evaluation of the qualitative adhesiveness of cell approached by the dissociation kinetics carried out in a Couette flow (erythroaggregameter). The analysis was performed by recording the increase of the reflectivity signal as the agglutinates are dissociated by shear into smaller ones. A total of eight patients aged <54 years with recent diagnostic of CAHD detected by positive Direct Anti-globulin Test (DAT) and very low RBC counts at 20 degrees C, were studied. Two parametric values were interesting: the dimensionless energy parameter and the characteristic dissociation time, which showed good correlation with hematological parameters. In conclusion, the dissociation method provides a powerful tool for estimating the qualitative adhesiveness of red blood cells agglutinated by autoantibodies in patients suffering of cold-agglutinin hemolytic disease and it would be very interesting to evaluate the severity of the disease.

A simple method for quantifying high density antigens in erythrocyte membrane by flow cytometry.

RBC flow cytometric analysis is usually used to quantify antigen content. Calibration systems enable antigen content determination by relating mean fluorescence intensity with the number of bound antibody molecules (equivalent to the number of antigen molecules). For that reason, antibodies must be used at saturating concentration, which may lead to agglutination when working with high density antigens. Then, forward scattering, side scattering and fluorescence will be increased, thus obtaining wrong results. In this work, the simple Langmuir adhesion model was applied. Flow cytometry was used to quantify GPA, a transmembrane protein present at high density on RBC. The fluorescence intensity of samples at different anti-GPA sub-saturating concentrations was measured. Sometimes, agglutinates were present and two peaks of fluorescence were observed, the principal one corresponding to isolated cells and the secondary one corresponding to agglutinated cells. In those cases, the principal peak was taken into account for the analysis. The GPA antigen content obtained for nine analyzed samples ranged from 3 to 13 x 10(5) sites per cell, which is similar to those values found in literature. Therefore, the Langmuir adsorption model enables us to determine the antigen content for the anti-GPA/GPA system on RBC membrane. This model could be used to quantify high density antigens in RBC and in other cells.

Quantification of glycophorin A and glycophorin B on normal human RBCs by flow cytometry.

BACKGROUND: The quantification of antigens and proteins on RBCs has been achieved by different approaches. Flow cytometry allows the results of the earliest studies to be to reappraised because it offers the possibility of measuring the immunofluorescence intensity of single cells and integrating the individual data of a large number of cells within a very short time. STUDY DESIGN AND METHODS: Flow cytometry was used in this work to analyze the binding of four MoAbs to glycophorin A (GPA) and glycophorin B (GPB). RBCs in their native state (nonfixed) were utilized. To avoid the agglutination problem, cells were disaggregated before measurements, dates were taken on 20,000 events on the single-cell region, and the fluorescence intensity of the principal peak present in the fluorescence histograms was used for the analysis. The quantification of sites per RBC was estimated by applying the Langmuir adhesion model. RESULTS: The numbers of GPA and GPB sites obtained for samples from healthy donors were similar to those found in the literature (1.86-4.9) x 10(5) and (0.48-1.61) x 10(5) for GPA and (0.21-1.14) x 10(5) and (0.47-0.88) x 10(5) for GPB. Differences between antibodies were found that depend on the binding site of each one. CONCLUSION: A simple method to quantify antigen sites on RBCs was developed. It could be applied whenever one antibody is assumed to bind exactly one antigen.

Frecuencia de la variante aint del antígeno A / Frecuency of aint antigen

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A, son aglutinados por la lectina de Dolichus biflorus (anti-A1), los A2 por la lectina Ulex europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son variablemente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas evaluando el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se caracterizó la actividad aglutinante de la lectina de Amaranthus hypochondriacus (específica para N-acetil-D-galactosamina) antes y después de la incubación con saliva A y frente a eritrocitos A1, Aint y A2. Se estudiaron 458 muestras, resultando 242 O (52,8 por ciento), 170 A (37,1 por ciento), 38 B (8,3 por ciento), 5 A1B (1,1 por ciento) y 3 A2B (0,7 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 138 A1 (81,2 por ciento), 23 A2 (13,5 por ciento) y 9 Aint (5,3 por ciento). La comparación de las curvas de cinética obtenidos permite diferenciar los hematíes de grupos A1, Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Este estudio es relevante, en inmunogenética poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras. (AU)

Frecuencia de la variante aint del antígeno A / Frecuency of aint antigen

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A, son aglutinados por la lectina de Dolichus biflorus (anti-A1), los A2 por la lectina Ulex europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son variablemente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas evaluando el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se caracterizó la actividad aglutinante de la lectina de Amaranthus hypochondriacus (específica para N-acetil-D-galactosamina) antes y después de la incubación con saliva A y frente a eritrocitos A1, Aint y A2. Se estudiaron 458 muestras, resultando 242 O (52,8 por ciento), 170 A (37,1 por ciento), 38 B (8,3 por ciento), 5 A1B (1,1 por ciento) y 3 A2B (0,7 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 138 A1 (81,2 por ciento), 23 A2 (13,5 por ciento) y 9 Aint (5,3 por ciento). La comparación de las curvas de cinética obtenidos permite diferenciar los hematíes de grupos A1, Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Este estudio es relevante, en inmunogenética poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras.

Hemorreología comparativa: estudios en diabéticos e hipertensos / Comparative hemorheological: study on diabetics and hypertensive patients

La medición de viscosidad plasmática y de sangre entera, determinadas en un viscosímetro rotacional, fue utilizada para verificar la existencia de anormalidaes hemorreológicas en pacientes diabéticos e hipertensos. Dichas mediciones se realizaron a distintas velocidades de corte, con lo cual se trazaron los correspondientes reogramas. Con esos datos se calcularon las correspondientes viscosidades relativas. Los resultados obtenidos, comparados con valores de los mismos parámetros obtenidos en individuos normales, permitiernon detectar comportamientos anormales, característicos de esas patologías circulatorias. Las diferencias más significativas se obtuvieron a una velocidad de corte de 5,76 seg. Se concluye que, en los pacientes diabéticos, los factores plasmáticos tienen mayor influencia en la aparición de hiperviscosidad, mientras que en los pacientes hipertensos son más influyentes los factores globulares (AU)

Hemorreología comparativa: estudios en diabéticos e hipertensos / Comparative hemorheological: study on diabetics and hypertensive patients

La medición de viscosidad plasmática y de sangre entera, determinadas en un viscosímetro rotacional, fue utilizada para verificar la existencia de anormalidaes hemorreológicas en pacientes diabéticos e hipertensos. Dichas mediciones se realizaron a distintas velocidades de corte, con lo cual se trazaron los correspondientes reogramas. Con esos datos se calcularon las correspondientes viscosidades relativas. Los resultados obtenidos, comparados con valores de los mismos parámetros obtenidos en individuos normales, permitiernon detectar comportamientos anormales, característicos de esas patologías circulatorias. Las diferencias más significativas se obtuvieron a una velocidad de corte de 5,76 seg. Se concluye que, en los pacientes diabéticos, los factores plasmáticos tienen mayor influencia en la aparición de hiperviscosidad, mientras que en los pacientes hipertensos son más influyentes los factores globulares

Inmuno-hemo-reología: análisis termodinámico de la aglutinación eritrocitaria inmunológica / Immuno-hemo-reology: Thermodynamic analysis of immunological agglutination of erythrocites

La aglutinación inmunológica es la consecuencia de la reacción Ag-Ac que adhiere eritrocitos adyacentes. Los anticuerpos se fijan a los sitios antigénicos distribuidos sobre la superficie de la membrana eritrocitaria, actuando como anclajes moleculares para unir células adyacentes y formas aglutinadas. Una pequeña cantidad de energía es disipada durante la reacción. Si se suministra una cantidad de trabajo mecánico equivalente a la energía disipada, los aglutinatos pueden ser disociados. El trabajo mecánico es realizado por tensiones de corte generadas en un viscosímetro de tipo Couette. Se propone una nueva técnica que utiliza la retrodifusión de un haz láser para analizar la cinética de disociación de aglutinatos eritrocitarios inmunológicos, producida por cizallamiento de los aglutinatos en suspensión. La intensidad del láser, retrodifundida, aumenta en la medida que los aglutinatos son disociados por corte. El registro de la intensidad retrodifundida suministra una curva de disociación que es ajustada por una ecuación exponencial. Los parámetros que caracterizan esta ecuación muestran una buena correlación con la potencia de la aglutinación. La integración numérica de las curvas de disociación conduce a la obtención de un parámetro ED que estima la energía intercambiada en el proceso de disociación y, en consecuencia, la constante de afinidad. (AU)

Inmuno-hemo-reología: análisis termodinámico de la aglutinación eritrocitaria inmunológica / Immuno-hemo-reology: Thermodynamic analysis of immunological agglutination of erythrocites

La aglutinación inmunológica es la consecuencia de la reacción Ag-Ac que adhiere eritrocitos adyacentes. Los anticuerpos se fijan a los sitios antigénicos distribuidos sobre la superficie de la membrana eritrocitaria, actuando como anclajes moleculares para unir células adyacentes y formas aglutinadas. Una pequeña cantidad de energía es disipada durante la reacción. Si se suministra una cantidad de trabajo mecánico equivalente a la energía disipada, los aglutinatos pueden ser disociados. El trabajo mecánico es realizado por tensiones de corte generadas en un viscosímetro de tipo Couette. Se propone una nueva técnica que utiliza la retrodifusión de un haz láser para analizar la cinética de disociación de aglutinatos eritrocitarios inmunológicos, producida por cizallamiento de los aglutinatos en suspensión. La intensidad del láser, retrodifundida, aumenta en la medida que los aglutinatos son disociados por corte. El registro de la intensidad retrodifundida suministra una curva de disociación que es ajustada por una ecuación exponencial. Los parámetros que caracterizan esta ecuación muestran una buena correlación con la potencia de la aglutinación. La integración numérica de las curvas de disociación conduce a la obtención de un parámetro ED que estima la energía intercambiada en el proceso de disociación y, en consecuencia, la constante de afinidad.

Estudio de la variante aint del antígeno A / Study of a antigen aint variant

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A1 son aglutinados por la lectina de Ulex Europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son débilmente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas. Se evaluó el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se estudiaron 557 muestras, resultando 285 O (51,1 por ciento), 216 A (38,8 por ciento), 45 B (8,1 por ciento), 8 A1B (1,4 por ciento) y 3 A2B (0,6 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 173 A1, (80,2 por ciento), 31 A2 (14,3 por ciento) y 12 Aint (5,5 por ciento). Se observó, en las curvas de cinética, diferencia de reacción entre los hematíes de grupo A1 Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Importa señalar que el valor de este estudio es relevante, en Inmunogenética Poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras (AU)

Estudio de la variante aint del antígeno A / Study of a antigen aint variant

Se definen como A intermedio (Aint) los hematíes que comparten caracteres con A1 y A2. Existen diferencias cualitativas y cuantitativas en los epitopes A. Los hematíes A1 son aglutinados por la lectina de Ulex Europaeus (anti-H), en tanto los hematíes Aint son débilmente aglutinados por ambas de manera inesperada. Se realizó una búsqueda de individuos Aint en una población hospitalaria de acuerdo con la reacción con las lectinas mencionadas. Se evaluó el proceso de aglutinación producida mediante una técnica cinética. Se estudiaron 557 muestras, resultando 285 O (51,1 por ciento), 216 A (38,8 por ciento), 45 B (8,1 por ciento), 8 A1B (1,4 por ciento) y 3 A2B (0,6 por ciento). Las muestras A se subdividieron en 173 A1, (80,2 por ciento), 31 A2 (14,3 por ciento) y 12 Aint (5,5 por ciento). Se observó, en las curvas de cinética, diferencia de reacción entre los hematíes de grupo A1 Aint y A2. Nuestros resultados concuerdan con observaciones previas sobre la marcada heterogeneidad de los hematíes Aint. El reconocimiento de de variantes débiles del grupo A reviste importancia cuando se presentan reacciones transfusionales hemolíticas y en la práctica forense. Importa señalar que el valor de este estudio es relevante, en Inmunogenética Poblacional, por su contribución al conocimiento del mestizaje con poblaciones negras

Influencia del colesterol en membrana sobre la deformabilidad y la fragilidad osmótica eritrocitarias / Variation of erythrocyte deformability and osmotic fragility with cholesterol

La incorporación de colesterol (hemisuccinato de colesterol) a la membrana eritrocitaria afecta sus propiedades reológicas. Esta influencia ha sido evaluada a través de dos parámetros reológicos característicos de la membrana celular: la deformabilidad celular y la fragilidad osmótica. Para ello se aplicaron dos técnicas ambas basadas en el fenómeno de difracción láser, cada una de las cuales presenta diferente sensibilidad de respuesta. Se aplicaron dos protocolos de incubación (12 h a 25ºC el primero y 12 h a 25ºC + 12 h a 37ºC el segundo); en cada uno de ellos se fue variando la cantidad de colesterol incorporado, expresado como Tasa Colesterol/Proteína (Tcp = 0,18 a 0,83). La alteración de las propiedades reológicas de la membrana eritr

Influencia del colesterol en membrana sobre la deformabilidad y la fragilidad osmótica eritrocitarias / Variation of erythrocyte deformability and osmotic fragility with cholesterol

La incorporación de colesterol (hemisuccinato de colesterol) a la membrana eritrocitaria afecta sus propiedades reológicas. Esta influencia ha sido evaluada a través de dos parámetros reológicos característicos de la membrana celular: la deformabilidad celular y la fragilidad osmótica. Para ello se aplicaron dos técnicas ambas basadas en el fenómeno de difracción láser, cada una de las cuales presenta diferente sensibilidad de respuesta. Se aplicaron dos protocolos de incubación (12 h a 25ºC el primero y 12 h a 25ºC + 12 h a 37ºC el segundo); en cada uno de ellos se fue variando la cantidad de colesterol incorporado, expresado como Tasa Colesterol/Proteína (Tcp = 0,18 a 0,83). La alteración de las propiedades reológicas de la membrana eritrocitaria producida por la incorporación de colesterol se traduce por una reducción de la deformabilidad celular y por un aumento de la fragilidad osmótica. Se observó que tanto la deformabilidad como la fragilidad, aparecen en relación inversa a la concentración de colesterol incorporado. Sin embargo, deben considerarse que tipos diferentes de deformación se aplican en cada técnica: transformación a esferocito en la fragilidad osmótica y cisallamiento en la deformabilidad