Comparação da eficácia de dois métodos de extração para determinação do perfil lipídico de ácidos graxos do sêmen ovino por meio da Cromatografia Líquida de Alta Eficiência / Comparison of the efficacy of two extraction methods for determination of lipid fatty acids of sheep semen by high performance liquid chromatography

A indústria de lã, leite, carne e pele de ovinos tem crescido em importância e novas biotecnologias do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que estas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é causadora de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é consequente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio. Esse quadro pode ser controlado pela presença de antioxidantes no sêmen. O sêmen foi coletado pela técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi separado em duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozoide. Seus lipídios foram extraídos por dois métodosbaseados no método Folch, Lesse Stanley modificado diferentes, utilizando clorofórmio e metanol como solventes. Após foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e escolheu-se a melhor extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozoide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oleico. Dentre os dois métodos estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a Método 1.

The sheep industry for wool, milk and meat production is of increasing importance and new technologies for assessment of semen are in course for the elucidation of male infertility causes. It is well known that damage to the sperm membrane decreases semen quality. Considering that sperm membranes are composed by a phospholipid bilayer, and that lipid peroxidation is a major cause of cell damage, studieson the lipid components of semen are relevant. Lipid peroxidation is a consequence of the reaction between lipids and reactive oxygen species. This event may be reduced in the presence of antioxidants in semen. Semen was collected with an artificial vagina and, after sperm evaluation, samples were centrifuged to separate the sample into two fractions: seminal plasma and spermatozoa pellet. Both had their lipids extracted by two different methods based on Folch, Less& Stanley method modified, using chloroform e methanol as solvents. After the extraction, some esterified fatty acids were qualified and quantified for the sensitivity and specificity to the high performance liquid chromatography in order to determine the most efficient extraction technique in quantitative and qualitative aspects. Statistical analysis was performed using SAS software for Windows. The predominant saturated fatty acid in sperm under these experimental conditions was the myristic and the most abundant insaturated fatty acid in both extractions was DHA. In seminal plasma, in both methods, the prevailing fatty acid is the saturated palmitic and the unsaturated oleic. Among the methods evaluated, we obtained the best results of identification and quantification of fatty acids in Method 1.

Análise bioquímica dos líquidos fetais e citologia do fluido amniótico da fêmea de Mocó (Kerodon rupestris) / Biochemical analysis of fetal fluids and cytology of the amniotic fluid of female Mocó (Kerodon rupestris)

Foram utilizados 10 sistemas genitais femininos de mocós (Kerodon rupestris) para estabelecer parâmetros de referência relativos à osmolaridade, pH, cálcio, fósforo, uréia, creatinina, glicose e proteínas totais. Os animais foram criados em cativeiro no CEMAS (Centro de Criação de Animais Silvestres), Mossoró - RN. As fêmeas estavam da metade (30-45 dias) para o final da gestação (65-70 dias). As bolsas amnióticas e alantoideanas foram puncionadas individualmente para colheita dos líquidos fetais, que foram centrifugados e analisados posteriormente. Para o líquido amniótico, as concentrações médias em mg/dl foram: glicose = 45,87 ± 22,38; cálcio = 6,31 ± 1,24; fósforo = 1,64 ± 0,72; creatinina = 0,45 ± 0,12; uréia = 34,03 ± 5,96; proteínas totais = 31,24 ± 16,67. Para o líquido alantoideano, as concentrações médias em mg/dl foram: glicose = 59,17 ± 10,85; cálcio = 5,58 ± 0,59; fósforo = 1,27 ± 0,73; creatinina = 0,38 ± 0,38; uréia = 31,49 ± 2,28; proteínas totais = 30,70 ± 18,39. Foram observadas pequenas oscilações entre as concentrações dos parâmetros bioquímicos do fluido amniótico e alantoideano. Estas concentrações são determinadas, provavelmente, pela atividade metabólica materno-fetal. A análise das células do fluido amniótico revelou quatro tipos celulares.

Influência do nível de uréia plasmático sobre parâmetros citogenéticos de machos ovinos deslanados / Plasmatic urea levels influence on citogenetic parameters of wool-less rams

O experimento foi planejado para verificar o efeito do aumento dos níveis plasmáticos de uréia, resultantes do acréscimo de uréia à dieta, sobre parâmetros citogenéticos de ovinos (Ovis aries) deslanados brasileiros, da raça Santa Inês, com idade entre 13 e 18 meses. Dezoito animais foram distribuídos a três dietas que consistiam de: dieta A - raçäo contendo níveis de nitrogênio de acordo com NRC (1985); dieta B - raçäo contendo nível de nitrogênio 133 por cento superior ao da raçäo A; e dieta C - raçäo contendo nível de nitrogênio 166 por cento superior ao da raçäo A. O aumento no nível de nitrogênio foi obtido com acréscimo de 20 e 40 g de uréia grau alimento, para os tratamentos B e C, respectivamente. A colheita de sangue para determinaçäo do nível de uréia no plasma foi semanal. Para a realizaçäo da cultura de linfócitos, para a verificaçäo do número de cromossomos e índice mitótico, 60 dias após terem sido alcançados os níveis de uréia desejados na dieta, foi coletado sangue de cada animal. O aumento dos níveis de uréia no plasma (p < 0,0001) näo afetou os parâmetros observados

Animal Cytogenetics: some modifications in the peripheral blood lymphocyte culture technique

There is an increasing need for a close interaction between cytogenetics and veterinary practice, particularly in the detection of chromosomal abnormalities which may affect fertility and animal breeding programs in agriculture. This paper reports modifications of the standard lymphocyte culture technique frequently used for karyotyping. The main modifications included, a) the exclusion of antibiotics from the culture medium, b) the use of slow homogenization to avoid bubble formation, c) the use aluminium foil covered with self-adherent PVC film to seal the culture flasks and d) incubation at 39-40§C. Blood from cattle, buffaloes, dogs and monkeys was collected into heparinized syringes and inoculated into 199 medium, containing fetal calf serum and phytohemagglutinin. After incubation at 39-40§C for 72 h, the cells were exposed to colchicine and hypotonic solution followed by fixation on slides and staining with 3 per cent Giemsa stain. A total of 1000 nuclei and 13 good quality metaphases were counted and analyzed, respectively, for each animal. The mitotic index for the different species was 5.1ñ1.0 per cent for cattle, 5.5ñ0.9 per cent for buffaloes, 2.6ñ1.1 per cent for dogs and 6.0ñ0.7 per cent for monkeys. With the modifications described, marked cell growth, good metaphase quality, and better chromosome visualization were obtained.

Effect of two ram sperm capacitating media on acrosome reaction and zona-free hamster oocyte penetration test

An in vitro zona-free hamster oocyte penetration test was utilized in 24 trials in order to evaluate the capacitation media used for ram sperm. A pool of fresh semen was collected from three crossed breed rams. Two semen drops were washed by centrifugation and incubated in high ionic strength treatment (HIS) or in a defined medium with HEPES, on heat ewe serum and heparin. After the incubation to promote capacitation, simplified triple-stain technique was used to evaluate the spontaneous acrosome reaction of the capacitated sperm. Superovulation in 96 golden hamsters was induced by PMSG and hCG. The oocytes were treated with hyaluronidase and trypsin to remove, respectively, the cumulus cells and the zona pellucida. Oocytes and capacitated sperm were incubated during 3 hours for further penetration. Then, oocytes were fixed and stained, being evaluated under phase contrast microscope. No significant statistical difference (p > 0.05) was found between media, concerning the penetration rate of the capacitated sperm and between number of sperm viable with acrosome reaction after the capacitation treatment using two different media. It was concluded that both media utilized were effective in capacitating ram sperm

Ocorrência da infecçäo causada pelo vírus da leucose bovina no estado de Säo Paulo / Occurrence of the Enzootic Bovine Leukosis infection in cattle of the state of Säo Paulo

Descreve-se a ocorrência da infecçäo pelo Vírus da Leucose Bovina (VLB) em animais pertencentes a rebanhos leiteiros, criados no estado de Säo Paulo. Examinaram-se, no período de 1986-1989, 2.708 amostras de soro sangüíneo, das quais 1.162 (42,9%) eram reagentes aos antígenos glicoprotéicos (gp 51) do VLB, utilizando-se como prova padräo a imunodifusäo dupla de Ouchterloney em placas de gel de ágar. Comprovou-se a existência de bovinos soro-reagentes aos antígenos do vírus da Leucose Bovina nos 22 municípios paulistas, onde eram criados os rebanhos que serviram de base a esta pesquisa