[Immunophenotyping by spectral cytometry reveals a profile of lymphopenia associated with deregulation with an increase in effector memory lymphocytes in a patient with a mutation in the ITPR3 gene]. / Inmunofenotipo por citometría espectral, revela un perfil de linfopenia asociado a desregulación con aumento de linfocitos de memoria efectora en paciente con mutación en el gen ITPR3.

BACKGROUND: Variants in intracellular calcium transport genes have been associated with syndromic immunodeficiencies with a SCID phenotype. CASE REPORT: Seven-year-old girl of non-consanguineous parents, in Cartagena-Colombia. At two months of age, he presented hematochezia and was diagnosed with alimentary proctolitis without improvement with restriction to milk, wheat and eggs, and malnutrition developed. At eight months, a colon biopsy shows chronic lymphoid hyperplasia, presenting with anemia, eosinophilia, but total and specific IgE to normal foods. After four years, the Immunology Service found her asymptomatic, nutritionally recovered and without allergic sensitization, but eosinophilia and elevated calprotectin persisted, suggesting an early-onset inflammatory bowel disease. Immunoglobulins were normal, lymphocyte populations with CD3, CD4 and CD8 lymphopenia. At six years old, she presented atopic dermatitis, still had elevated calprotectin and was lymphopenic. Immunophenotyping by spectral cytometry using Cytek®cFluor®Immunoprofiling-Kit14 showed lymphopenia and CD4/CD8 inversion. Naïve CD4+ and CD8+ T lymphocytes were decreased, while T-CD8+CD45RA-CCR7- and T-CD8+CD45RA+CCR7- effector memory populations were expanded. Effector and central memory CD4+ T-lymphocytes were also increased1 (Image 1). The exome revealed a heterozygous variant in the ITPR3 gene (carrier father), c.7571G>A, p.(Arg2524His); predictors classify it as having a potential eliminating effect. CONCLUSIONS: The clinical features and immunophenotype of this candidate variant differ from others related to intracellular calcium transport. They are functional studies necessary to validate their causality. A patient with a potentially deleted variant presents an immunophenotype with CD3 lymphopenia and persistent lymphocyte activation.

ANTECEDENTES: Las variantes en genes del transporte de calcio intracelular han sido asociadas a inmunodeficiencias sindrómicas con un fenotipo IDCG. REPORTE DE CASO: Niña de siete años, de padres no consanguíneos, en Cartagena-Colombia. A los dos meses de vida, presenta hematoquecia y se diagnostica con proctolitis alimentaria sin mejoría con restricción a leche, trigo y huevo, desarrollando desnutrición. A los ocho meses, una biopsia de colon muestra hiperplasia linfoide crónica, cursa con anemia, eosinofilia, pero IgE total y específica a alimentos normales. A los cuatro años, el Servicio de Inmunología la encuentra asintomática, recuperada nutricionalmente y sin sensibilización alérgica, pero persiste eosinofilia y calprotectina elevada, sugiriendo una enfermedad inflamatoria intestinal de inicio temprano. Las inmunoglobulinas fueron normales, poblaciones linfocitarias con linfopenia CD3, CD4 y CD8. A los seis años, presenta dermatitis atópica, sigue con calprotectina elevada y linfopénica. El inmunofenotipo por citometría espectral mediante Cytek®cFluor®Immunoprofiling-Kit14, mostró linfopenia e inversión CD4/CD8. Los linfocitos T-vírgenes CD4+ y CD8+ estaban disminuidos, en cambio las poblaciones de memoria efectora T-CD8+CD45RA-CCR7- y T-CD8+CD45RA+CCR7­ estaban expandidas. Los linfocitos T-CD4+ de memoria efectora y central, también estaban aumentados1 (Imagen 1). El exoma reveló una variante heterocigótica en el gen ITPR3 (padre portador), c.7571G>A, p.(Arg2524His); los predictores la clasifican como de potencial efecto deletéreo. CONCLUSIONES: La clínica y el inmunofenotipo de esta variante candidata difiere de otras relacionadas con el transporte del calcio intracelular. Son necesarios estudios funcionales para validar su causalidad. Una paciente con una variante potencialmente deletérea, presenta un inmunofenotipo con linfopenia CD3 y activación persistente de los linfocitos.

[Characterization of asthma phenotypes in children of the tropics]. / Caracterización de fenotipos de asma en niños del trópico.

OBJECTIVE: Determine the main asthma phenotypes in a population of asthmatic children in Cartagena, Colombia. METHODS: 107 children (7 to 17 years old) with a previous diagnosis of asthma were recruited. Biomarkers of T2 inflammation were evaluated by measuring FeNO, eosinophil count in peripheral blood by hemocytometry, and determination of specific IgE to mite allergens by ELISA. The study was approved by the ethics committee of the University of Cartagena (SGR, Grant BPIN2020000100405). RESULTS: The average age of patients was 10,9 years. 19,6% of the children did not show elevation of any of the T2 inflammation biomarkers evaluated (FeNO<20ppb, eos<300/ul, negative specific IgE), so they were considered patients with non-allergic asthma (non-T2). 71,9% of all patients were sensitized to at least one allergen, this phenotype was considered allergic asthma. 30,8% of the patients presented the three elevated biomarkers (FeNO>20ppb + eos >300/ul + positive specific IgE), this phenotype was classified as high T2 allergic asthma. A moderate correlation (Spearman rho=0,44, p<0,0001) was found between FeNO values and eosinophil counts. CONCLUSION: In this study, the following phenotypes were found: allergic asthma, high T2 asthma, and non-allergic asthma. Most patients presented a type 2 inflammatory phenotype with allergic sensitization. In addition to the measurement of specific IgE, the use of FeNO and eosinophil count in peripheral blood help to accurately determine those patients with high T2 asthma phenotypes.

OBJETIVO: Determinar los fenotipos principales de asma en una población de niños asmáticos en Cartagena, Colombia. MÉTODOS: Se reclutaron 107 niños (entre 7 y 17 años), con diagnóstico previo de asma. Se evaluaron biomarcadores de inflamación T2 mediante la medición de FeNO, conteo de eosinófilos en sangre periférica mediante hemocitometría, y la determinación de IgE específica a alergenos de ácaros mediante ELISA. El estudio fue aprobado por el Comité de Ëtica de la Universidad de Cartagena (SGR, Grant BPIN2020000100405). RESULTADOS: La edad media de los pacientes fue de 10,9 años. El 19,6% de los niños no mostró elevación de ninguno de los biomarcadores de inflamación T2 evaluados (FeNO<20 ppb, eos<300/ul, IgE específica negativa), por lo que se consideraron como pacientes con asma no alérgica (no-T2). El 71,9% de todos los pacientes estaban sensibilizados al menos a un alergeno considerándose este fenotipo como asma alérgica. El 30,8% de los pacientes presentaron los tres biomarcadores elevados (FeNO>20 ppb + eos >300/ul + IgE específica positiva), clasificando este fenotipo como asma alérgica T2 alta. Se encontró una correlación moderada (Spearman rho=0,44, p<0,0001) entre los valores de FeNO y los conteos de eosinófilos. CONCLUSIÓN: En este estudio se encontraron los siguientes fenotipos de asma alérgica: asma T2 alta y asma no alérgica. La mayoría de los pacientes presentó un fenotipo inflamatorio tipo 2 con sensibilización alérgica. Además de la medición de la IgE específica, el uso del FeNO y los conteos de eosinófilos en sangre periférica ayudan a determinar con mayor exactitud a aquellos pacientes con fenotipos de asma T2 alto.

[Circulating populations of CD4+ CD25+ CD127- regulatory t lymphocytes in peripheral blood of allergic asthmatic children]. / Determinación de poblaciones circulantes en sangre periférica de linfocitos T, reguladores CD4+ CD25+ CD127-, en niños asmáticos alérgicos.

OBJECTIVE: To carry out a preliminary analysis on the Treg lymphocyte counts present in the peripheral blood of allergic asthmatic children from the city of Cartagena, Colombia, compared to healthy controls. METHODS: We compared cytometry counts of ten asthmatic patients (age 7-16 years) and seven healthy controls (6-12 years), recruited in the city of Cartagena. Peripheral blood samples were stained using Cytek's 14-color cFluor Immunoprofiling kit (Cytek® cFluor® Immunoprofiling Kit 14 Color RUO kit), and analyzed on a Northern Lights™ spectral cytometer (Cytek® Biosciences, Fremont, CA, USA), to read 50.000 events per sample. The data obtained were analyzed in SpectroFlo® and FlowJo. The study was approved by the ethics committee of the University of Cartagena (SGR, Grant BPIN2020000100405). RESULTS: The frequency of CD3+, CD4+, CD25+, CD127- Tregs was 11% of all CD4+ T cells, with a range of minimum 8,1% and maximum 17,7%. There was no significant difference in the proportion of Tregs between allergic asthmatic patients and healthy controls (P = 0,2). CONCLUSIONS: With this preliminary sample size, no significant differences were found in the Treg lymphocyte population between allergic asthmatic patients and healthy controls. The 14-color multiplexed panel is a useful tool not only to count CD3+ and CD4+ populations, but also to obtain the percentage of regulatory T cells using cell surface markers.

OBJETIVO: Realizar un análisis preliminar sobre los conteos de linfocitos Tregs presentes en sangre periférica de niños asmáticos alérgicos de la ciudad de Cartagena, comparado con controles sanos. MÉTODOS: Se compararon los conteos de citometría de diez pacientes asmáticos (entre 7 y16 años) y siete controles sanos (entre 6 y12 años), reclutados en la ciudad de Cartagena. La muestra de sangre periférica fue teñida empleando el kit de inmunofenotipo multiplexado de 14 colores de Cytek (Cytek® cFluor® Immunoprofiling Kit 14 Color), y analizada en un citómetro espectral Northern Lights™ (Cytek® Biosciences, Fremont, CA, USA), a lectura de 50.000 eventos por muestra. Los datos obtenidos fueron analizados en SpectroFlo® y FlowJo. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad de Cartagena. RESULTADOS: El panel de tinción funcionó apropiadamente y dentro de los parámetros apropiados. Se obtuvo un promedio de células Tregs CD3+, CD4+, CD25+ y CD127- del 11% de todos los CD4+ en las muestras estudiadas, con un rango de mínimo de 8,1% y un máximo de 17,7%. No hubo diferencias significativas en la proporción de linfocitos Tregs entre los pacientes asmáticos alérgicos y los controles sanos (P = 0.2). CONCLUSIONES: Con este tamaño de muestra preliminar, no se encontraron diferencias significativas en la población de linfocitos Tregs entre los pacientes asmáticos alérgicos y los controles sanos. El panel multiplexado de 14 colores es una herramienta útil no solo para derivar las poblaciones CD3+ y CD4+, sino también para obtener el porcentaje de células T reguladoras empleando marcadores de superficie celular.