The 2000-2001 GEP-ISFG Collaborative Exercise on mtDNA: assessing the cause of unsuccessful mtDNA PCR amplification of hair shaft samples.

We report the results of Spanish and Portuguese working group (GEP) of International Society of Forensic Genetics (ISFG) Collaborative Exercise 2001-2002 on mitochondrial DNA (mtDNA) analysis. 64 laboratories from Spain, Portugal and several Latin-American countries participated in this quality control exercise. Five samples were sent to the participating laboratories, four blood stains (M1-M4) and a sample (M5) consisting of two hair shaft fragments. M4 was non-human (Felis catus) in origin; therefore, the capacity of the labs to identify the biological source of this sample was an integral part of the exercise. Some labs detected the non-human origin of M4 by carrying out immuno-diffussion techniques using antihuman serum, whereas others identified the specific animal origin by testing the sample against a set of animal antibodies or by means of the analysis of mtDNA regions (Cyt-b, 12S, and 16S genes). The results of the other three human blood stains (M1-M3) improved in relation to the last Collaborative Exercises but those related to hairs yielded a low rate of success which clearly contrasts with previous results. As a consequence of this, some labs performed additional analysis showing that the origin of this low efficiency was not the presence of inhibitors, but the low quantity of DNA present in these specific hair samples and the degradation. As a general conclusion the results emphasize the need of external proficiency testing as part of the accreditation procedure for the labs performing mtDNA analysis in forensic casework.

Results of the 1999-2000 collaborative exercise and proficiency testing program on mitochondrial DNA of the GEP-ISFG: an inter-laboratory study of the observed variability in the heteroplasmy level of hair from the same donor.

The Spanish and Portuguese working group (GEP) of international society for forensic genetics (ISFG) 1999-2000 collaborative exercise on mitochondrial DNA (mtDNA) included the analysis of four bloodstain samples and one hair shaft sample by 19 participating laboratories from Spain, Portugal and several Latin-American countries. A wide range of sequence results at position 16,093 of the HV1 (from T or C homoplasmy to different levels of heteroplasmy) were submitted by the different participating laboratories from the hair shaft sample during the first phase of this exercise. During the discussion of these results in the Annual GEP-ISFG 2000 Conference a second phase of this exercise was established with two main objectives: (i) to evaluate the incidence of the HV1 sequence heteroplasmy detected in Phase I across different sample types from the same donor including blood, saliva, and hair shafts, (ii) to perform a technical review of the electropherograms to evaluate the relative levels of heteroplasmies obtained by the different laboratories and also to examine the source of possible errors detected in Phase I. Anonymous review of the raw sequence data permitted the detection of three transcription errors and three errors due to methodological problems. Highly variable levels of heteroplasmy were found in the hair shaft and more stability in blood and saliva. Three laboratories found variable levels of heteroplasmy at position 16,093 across adjacent fragments from the same hair shaft. Two laboratories also described more than one heteroplasmic position from a single hair. The relevance of these findings for the interpretation of mtDNA data in the forensic context is also discussed.

Taller de anticuerpos antinucleares (ANA): una experiencia latinoamericana / Workshop on antinuclear antibodies (ANA): a latin american experience

En el Taller de Trabajo de Anticuerpos Anti-Nucleares realizado en el marco del Primer Workshop y Conferencia Latinoamericana de Autoinmunidad (1997), se analizaron 27 sueros de pacientes con distintas enfermedades reumáticas sistémicas: lupus eritematosos sistémico (n=15), artritis reumatoide (n=4), síndrome de Sjögren (n=3), enfermedad mixta del tejido conjuntivo (n=1), síndrome indiferenciado del tejido conjuntivo (n=1), polimiositis/dermatomiositis (n=2) y escleroderma (n=1) y 3 sueros de individuos normales para el estudio de ANA por inmunofluorescencia indirecta (IFI), y anticuerpos anti-Sm, anti-RNP, anti-SSA/Ro, anti-SSB/La, anti-Scl70 y anti-Jol utilizando las técnicas de Doble Difusión Radial (DDR), Enzimoinmuno Análisis (ELISA) y Western blot (WB) de origen comercial. En el estudio de ANAs por IFI se observaron 4 patrones: nuclear: moteado fino, metafase negativa (n=9); nuclear: moteado grueso, metafase negativa (n=4); nuclear: homogéneo, metafase positiva homogénea (n=10); nucleolar y nucleoplásmico, metafase positiva homogénea (n=1). En 6 sueros, incluyendo los 3 controles normales, los ANA por IFI dieron resultados negativos. Comparando los patrones observados por IFI con las especificidades obtenidas por las téncnicas de DDR, ELISA y WB, surge que los mismos fueron orientativos hacia la especificidad de los distinto anticuerpos presentes, no pudiendo descartar la presencia de ninguno de los otros anticuerpos estudiados. Por último, se compararon los resultados obtenidos por los métodos de DDR, ELISA y WB observándose que la proporción de resultados positivos para el Ac. anti-Sm por WB difiere significativamente (p<0.05) con respecto a la DDR y a uno de los equipos de ELISA utilizados

Alteración de la distribución de subpoblaciones T en la sangre periférica de pacientes con anemia severa idiopática / Changes in distribution of T subpopulations in the peripheral blood of patients with severe idiopathic anemia

Se efectuaron estudios inmunológicos en células mononucleares de sangre periférica de 17 pacientes con diagnóstico de aplasia severa de médula ósea (AMO): a) fenotipo linfocitario; b) respuesta proliferativa a la PHA; c) valoración de la producción de interleukina 2 (IL2) y expresión del antígeno CD25 (Tac). El rango de edad fue de 4 a 25 años. De los diecisiete enfermos 15 presentaron una disminución significativa de la relación CD4/CD8 (0,72 + ou- 0,19 VN: 1,8 + ou - 0,6). La respuesta proliferativa a la PHA fue normal en el 80% y sólo 2 pacientes mostraron una respuesta disminuida. La producción de IL2 por células mononucleares estimuladas con PHA se encontró significativamente aumentada con deficiencia en la expresión del antígeno CD25. En los 2 pacientes restantes observamos una relación CD4/CD8 normal, no respuesta proliferativa a la PHA e hipoproducción de IL2. Estos datos sugieren la existencia de diferentes grupos de AMO que presentan grados de compromiso inmunológico vaiable y que podrían delinearse mediante perfiles de laboratorio. Por otra parte, la alteración en la distribución de poblaciones reguladoras, fundamentalmente a expensas de una disminución absoluta de la subpoblación CD4+ en la mayoría de nuestros pacientes, asociada a la hiperproducción de IL2 y alteración diferente de expresión del antígeno Tac sugiere la existencia de alteraciones funcionales de esta subpoblación en pacientes con AMO

Alteración de la distribución de subpoblaciones T en la sangre periférica de pacientes con anemia severa idiopática / Changes in distribution of T subpopulations in the peripheral blood of patients with severe idiopathic anemia

Se efectuaron estudios inmunológicos en células mononucleares de sangre periférica de 17 pacientes con diagnóstico de aplasia severa de médula ósea (AMO): a) fenotipo linfocitario; b) respuesta proliferativa a la PHA; c) valoración de la producción de interleukina 2 (IL2) y expresión del antígeno CD25 (Tac). El rango de edad fue de 4 a 25 años. De los diecisiete enfermos 15 presentaron una disminución significativa de la relación CD4/CD8 (0,72 + ou- 0,19 VN: 1,8 + ou - 0,6). La respuesta proliferativa a la PHA fue normal en el 80% y sólo 2 pacientes mostraron una respuesta disminuida. La producción de IL2 por células mononucleares estimuladas con PHA se encontró significativamente aumentada con deficiencia en la expresión del antígeno CD25. En los 2 pacientes restantes observamos una relación CD4/CD8 normal, no respuesta proliferativa a la PHA e hipoproducción de IL2. Estos datos sugieren la existencia de diferentes grupos de AMO que presentan grados de compromiso inmunológico vaiable y que podrían delinearse mediante perfiles de laboratorio. Por otra parte, la alteración en la distribución de poblaciones reguladoras, fundamentalmente a expensas de una disminución absoluta de la subpoblación CD4+ en la mayoría de nuestros pacientes, asociada a la hiperproducción de IL2 y alteración diferente de expresión del antígeno Tac sugiere la existencia de alteraciones funcionales de esta subpoblación en pacientes con AMO (AU)

Tratamiento del pénfigo vulcar con plasmaferesi / Treatment of pemphigus vulgaris with plasmapheresis

Se utilizó la plasmaféresis asociada a corticoides como terapéutica del pénfigo vulgar córticorresistente en 2 pacientes durante tres circunstancias clínicas, monitoreándose la evolución de los títulos de los anticuerpos intercelulares. El tratamiento produjo descenso del título de anticuerpos e indujo remisión clínica en breve plazo en las tres oportunidades. En un de los pacietnes, en el cual se mantuvo una corticoterapia a bajas dosis como tratamiento de mantenimiento, se logró una remisión sumamente prolongada. Por el contrario, el segundo paciente, que suspendió bruscamente la coricoterapia durante la mejória, evidenció recaída clínica en breve tiempo, coincidente con el ascenso de los títulos de anticuerpos. En la segunda situación clínica el uso de corticoides como terapéutica prolongada de mantenimiento permitió la remisión a largo plazo. La plasmaféres resultó ser un método eficaz en eol tratmaiento del pénfigo como adyuvante del tratamiento inmunosupresor, pudiendo reducir la morbilidad y mortalidad del tratamiento corticoide a altas dosis requerido en esta enfermedad. Se encontró correlación entre el título de anticuerpos y la actividad de la enfermedad, lo cual evidencia el rol patogénico del autoanticuerpo en la inducción de la acantolisis, y pone de relieve la utilidad de su valoración en el monitoreo de la terapéutica del pénfigo

Tratamiento del pénfigo vulcar con plasmaferesi / Treatment of pemphigus vulgaris with plasmapheresis

Se utilizó la plasmaféresis asociada a corticoides como terapéutica del pénfigo vulgar córticorresistente en 2 pacientes durante tres circunstancias clínicas, monitoreándose la evolución de los títulos de los anticuerpos intercelulares. El tratamiento produjo descenso del título de anticuerpos e indujo remisión clínica en breve plazo en las tres oportunidades. En un de los pacietnes, en el cual se mantuvo una corticoterapia a bajas dosis como tratamiento de mantenimiento, se logró una remisión sumamente prolongada. Por el contrario, el segundo paciente, que suspendió bruscamente la coricoterapia durante la mejória, evidenció recaída clínica en breve tiempo, coincidente con el ascenso de los títulos de anticuerpos. En la segunda situación clínica el uso de corticoides como terapéutica prolongada de mantenimiento permitió la remisión a largo plazo. La plasmaféres resultó ser un método eficaz en eol tratmaiento del pénfigo como adyuvante del tratamiento inmunosupresor, pudiendo reducir la morbilidad y mortalidad del tratamiento corticoide a altas dosis requerido en esta enfermedad. Se encontró correlación entre el título de anticuerpos y la actividad de la enfermedad, lo cual evidencia el rol patogénico del autoanticuerpo en la inducción de la acantolisis, y pone de relieve la utilidad de su valoración en el monitoreo de la terapéutica del pénfigo (AU)