Guía de manejo obstétrico y del recién nacido en madre aloinmunizada / Guidelines for the obstetric management of an alloimmune mother and her newborn / Guia de manejo obstétrico e neonatal em mães aloimunizadas

Resumen: La aloinmunización es una respuesta biológica frente a la exposición de antígenos no propios. La gestación, las transfusiones de hemocomponentes, los trasplantes de órganos sólidos y células hematopoyéticas, así como el consumo de drogas intravenosas exponen a las pacientes al desarrollo de aloanticuerpos antieritrocitarios. El hallazgo de los mismos debe cumplir con las instancias diagnósticas para identificar la probabilidad de estar asociados a enfermedad hemolítica feto neonatal (EHFN) y su oportuna derivación a policlínica de alto riesgo obstétrico (ARO) para su correcto seguimiento. Es fundamental que sean los laboratorios de inmunohematología de los servicios de hemoterapia y medicina transfusional los encargados de los estudios diagnósticos de aloinmunización eritrocitaria(1). En este sentido hemos elaborado esta guía con el objetivo de protocolizar de manera multidisciplinaria el manejo de las embarazadas aloinmunizadas y sus recién nacidos.

Abstract: Alloimmunization is the biological response to exposure to non-HLA antigens. Pregnancy, transfusion of blood components, solid organ and hematopoietic cell transplantation, as well as intravenous drug use expose patients to the development of anti-erythrocyte antibodies. When the latter are found, they must match diagnostic criteria to identify the potential association to hemolytic disease of the fetus and newborn (HDFN) and its timely referral to the high-risk obstetric risk polyclinic for due follow-up. It is of the essence for erythrocyte alloimmunization diagnostic tests to be carried out by the immunohematology laboratories of the Hemotherapy and Transfusional Medicine services. To that end, we have prepared these guidelines with the purpose of providing a multidisciplinary protocol for the handling of maternal alloimmunization and alloimmunization of the newborn.

Resumo: A aloimunização é uma resposta biológica à exposição a antígenos não próprios. A gravidez, as transfusões de hemocomponentes, os transplantes de órgãos sólidos e células hematopoiéticas, bem como o uso de drogas intravenosas expõem os pacientes ao desenvolvimento de anticorpos antieritrocitários. O achado destes deve obedecer a critérios diagnósticos para identificar a doença e a probabilidade de estarem associados a doença hemolítica feto neonatal (DHPN) e seu encaminhamento oportuno para uma unidade de alto risco obstétrico para acompanhamento adequado. É fundamental que os laboratórios de imuno-hematologia dos serviços de Hemoterapia e Medicina Transfusional se encarreguem dos estudos diagnósticos da aloimunização eritrocitária. Elaboramos este guia com o objetivo de estabelecer um protocolo multidisciplinar para o manejo de gestantes aloimunizadas e seus recém-nascidos.

Frecuencia de fenotipos del sistema Rh en donantes voluntarios de sangre / Frequency of Rh system phenotypes in voluntary blood donors / Frequência de fenótipos do sistema Rh em doadores de sangue voluntários

El sistema Rh es altamente polimórfico y está relacionado con la producción de aloanticuerpos y la enfermedad hemolítica del recién nacido. Los antígenos codificados por los genes RHD y RHCE forman el fenotipo Rh que es característico en cada población. Las variantes RHCE no han sido identificadas en la población ecuatoriana y así constituyen un riesgo de aloinmunización durante el embarazo o en transfusiones de componentes sanguíneos incompatibles. Prueba de ello es el estudio realizado en Ecuador que determinó una aloinmunización del 0,27%. Los anticuerpos con mayor frecuencia pertenecían al sistema Rh, resultados que motivaron la realización del presente estudio. Se analizaron un total de 1.298 muestras de donantes de sangre provenientes de 22 provincias ecuatorianas. Para la fenotipificación se utilizaron antisueros comerciales de la casa BIORAD y células de fenotipo conocido para el control de calidad interno, y se identificaron 20 fenotipos del sistema Rh distribuidos de forma heterogénea en las 22 provincias; el más frecuente fue Rz/R0. En donantes con fenotipo D débil el más común fue el R2/r, mientras que en los donantes Rh(D) negativo fue el fenotipo r/r. Estos datos demuestran la variedad de fenotipos en la población ecuatoriana y por ende la necesidad de su detección oportuna.

The Rh system is highly polymorphic. It is related to the production of alloantibodies and the hemolytic disease of the newborn. The antigens encoded by the RHD and RHCE genes form the Rh that is characteristic for each population. The RHCE variants have not been identified in the Ecuadorian population, constituting a risk of alloimmunization during pregnancy or in transfusions of incompatible blood components. Proof of this is the study carried out in Ecuador that determined an alloimmunization of 0.27% and the antibodies, more frequently belonged to the Rh system, results that motivated the realization of the present study. A total of 1298 samples from blood donors from 22 Ecuadorian provinces were analyzed. For the phenotyping, commercial antisera from the BIORAD house were used and cells of known phenotype for internal quality control. Identifying 20 phenotypes of the Rh system distributed heterogeneously in the 22 provinces, the most frequent was Rz/R0. In donors with weak D phenotype the most common was R2/r; whereas in Rh(D) negative donors was the r/r phenotype, these data demonstrate the variety of phenotypes in the Ecuadorian population and therefore the need for their timely detection.

O sistema Rh é altamente polimórfico e está relacionado com a produção de aloanticorpos e a doença hemolítica do recém-nascido. Os antígenos codificados pelos genes RHD e RHCE formam o fenótipo de Rh, que é característico para cada população. As variantes de RHCE não foram identificados na população equatoriana constituindo um risco de aloimunização durante a gravidez ou em transfusões de componentes sanguíneos incompatíveis. Prova disso é o estudo realizado no Equador que determinou aloimunização de 0,27%. Os anticorpos com maior frequência pertenciam ao sistema Rh, resultados que motivaram a realização do presente estudo. Um total de 1298 amostras de doadores de sangue de 22 estados equatorianos foram analisadas. Utilizou-se para a fenotipificação anti-soros comerciais BIORAD e células de fenótipo conhecido para controle de qualidade interno, identificando-se 20 fenótipos do sistema Rh heterogeneamente distribuídos nos 22 estados. O mais frequente foi Rz/R0. Em doadores com fenótipo D fraco, o mais comum foi o R2/r; ao passo que nos doadores Rh (D) negativo foi o fenótipo r/r. Esses dados demonstram a variedade de fenótipos na população do Equador, e portanto a necessidade da detecção precoce dos mesmos.

Identificação de anticorpos anti-eritrocitários de baixa frequência em paciente politransfundida com beta-talassemia: relato de caso / Identification of low frequency anti-erythrocyte antibodies in chronically transfused patient with beta-thalassemia: a case report

A taxa de aloimunização eritrocitária em pacientes politransfundidos pode atingir 50%, entretanto a frequência de anticorpos clinicamente relevantes em pacientes transfundidos não é perfeitamente conhecida, estimando-se que cerca de 1% dos pacientes são sensibilizados a cada unidade de hemácias transfundidas. O objetivo deste trabalho é relatar o caso de uma paciente de 11 anos de idade, portadora de β–talassemia major, politransfundida, na qual foi detectada, em protocolo pré-transfusional, a presença de dois anticorpos antieritrocitários raros: anti-Colton b (anti-Cob ) e anti-Lutheran 14 (anti-Lu14). Para o levantamento do histórico clínico-laboratorial da paciente, foi realizada pesquisa de prontuário arquivado no sistema de arquivos de um hospital-escola no qual a paciente é acompanhada. A fenotipagem eritrocitária em pacientes politransfudidos é essencial para minimizar os riscos de complicações devido à aloimunização e estimar a disponibilidade de sangue compatível. Assim, o relato do presente caso poderá contribuir para ampliar os conhecimentos sobre a real taxa de frequência de anticorpos anti-eritrocitários raros em paciente talassêmico.

The rate of erythrocyte alloimmunization in tranfusion-dependent patients can reach 50%, although the frequency of clinically relevant antibodies in transfused patients is not fully known, it is estimated that about 1% of patients are sensitized to each unit of transfused RBCs. The aim of this study is to report the case of an 11-year-old girl with β-thalassemia major, chronically transfused, which was detected in pre-transfusion protocol, the presence of two rare anti-erythrocyte antibodies: anti-Colton b (anti-Cob ) and anti-Lutheran 14 (anti-Lu14). To survey the clinical and laboratory patient history, research records filed in the archives of the university hospital in which the patient is monitored system was performed. The phenotyping erythrocyte in multitransfused patients is essential to decrease the risk of complications due to alloimmunization and estimate the availability of compatible blood. Thus, the report of this case may contribute to increase knowledge about of the real frequency of uncommon anti-erythrocyte antibodies in thalassemic patients.

Human neutrophil alloantigens systems

Neutrophil alloantigens are involved in a variety of clinical conditions including immune neutropenias, transfusion-related acute lung injury (TRALI), refractoriness to granulocyte transfusions and febrile transfusion reactions. In the last decade, considerable progress has been made in the characterization of the implicated antigens. Currently, seven antigens are assigned to five human neutrophil antigen (HNA) systems. The HNA-1a, HNA-1b and HNA-1c antigens have been identified as polymorphic forms of the neutrophil Fcγ receptor IIIb (CD16b), encoded by three alleles. Recently, the primary structure of the HNA-2a antigen was elucidated and the HNA-2a-bearing glycoprotein was identified as a member of the Ly-6/uPAR superfamily, which has been clustered as CD177. The HNA-3a antigen is located on a 70-95 kDa glycoprotein; however, its molecular basis is still unknown. Finally, the HNA-4a and HNA-5a antigens were found to be caused by single nucleotide mutations in the αM (CD11b) and αL (CD11a) subunits of the leucocyte adhesion molecules (β2 integrins). Molecular and biochemical characterization of neutrophil antigenshave expanded our diagnostic tools by the introduction of genotyping techniques and immunoassays for antibody identification. Further studies in the field of neutrophil immunology will facilitate the prevention and management of transfusion reactions and immune diseases caused by neutrophil antibodies.

Os aloantígenos de neutrófilos estão associados a várias condições clínicas como neutropenias imunes, insuficiência pulmonar relacionada à transfusão (TRALI), refratariedade à transfusão de granulócitos, e reações transfusionais febris. Na última década, foi observado considerável progresso na caracterização dos aloantígenos envolvidos nestas condições clínicas. Atualmente sete antígenos estão incluídos em cinco sistemas de antígenos de neutrófilo humano (HNA). Os antígenos HNA-1a, HNA-1b e HNA-1c foram identificados como formas polimórficas do receptor Fcγ RIIIb (CD16b), codificados por três alelos. Recentemente, a estrutura primária do antígeno HNA-2a foi elucidada e a glicoproteína carreadora do antígeno foi identificada como um membro da superfamília Ly-6/uPARe designada como CD177. O antígeno HNA-3a está localizadoem uma glicoproteína de 70-90 kDa, entretanto sua base molecular ainda é desconhecida. Finalmente, os antígenos HNA-4ae HNA-5a são resultantes de mutações de um único nucleotídeo nas subunidades αM (CD11b) and αL (CD11a) das moléculas de adesão de leucócitos (β2 integrinas). A caracterização molecular e bioquímica dos antígenos neutrofílicos permitiu a expansão das ferramentas diagnósticas pela introdução de técnicas de genotipagem e imunoensaios para a identificação de anticorpos. Novos estudos envolvendo a imunologia de granulócitos serão de grande valor para a prevenção e tratamento de reações transfusionais e doenças imunes causadas por aloanticorpos de neutrófilos.

Uso da genotipagem de grupos sanguíneos na elucidação de casos inconclusivos na fenotipagem eritrocitária de pacientes atendidos na Fundação Hemominas / Blood group genotyping to solve inconclusive phenotyping cases of patients from the Hemominas Foundation

A determinação do perfil de antígenos eritrocitários em doadores de sangue e pacientes que recebem transfusão sanguínea é importante na prevenção de aloimunização. Pacientes recentemente transfundidos ou com anemia hemolítica autoimune nem sempre conseguem ser fenotipados, e para estes casos a genotipagem vem se apresentando como uma ferramenta auxiliar na tipagem sanguínea. Neste estudo foram padronizadas técnicas de PCR alelo específicas ou de PCR-RFLP para a genotipagem dos alelos de grupos sanguíneos Rh (RHD, RHCE*C/c, RHCE*E/e), Kell (KEL*1/KEL*2), Kidd (JK*A/JK*B) e Duffy (FY*A/FY*B e FY*B(-33T>C)), importantes na medicina transfusional. Elas foram empregadas com sucesso para a tipagem de 36 pacientes que não puderam ser fenotipados ou que apresentaram resultados inconclusivos na fenotipagem eritrocitária. Vinte destes pacientes eram aloimunizados por diferentes antígenos, sendo o anticorpo anti-E o mais frequente (55 por cento). O uso da genotipagem também mostrou-se útil na identificação de anticorpos irregulares. Por sua precisão, facilidade de execução e viabilidade de custo, as técnicas para tipagem de DNA para estes sistemas sanguíneos foram implantadas em nosso Serviço a partir de 2007 e vêm sendo usadas na prática transfusional, contribuindo para aumento da segurança dos pacientes cronicamente transfundidos ou com anemia hemolítica autoimune, como, por exemplo, pacientes com anemia falciforme. Além disso, ela vem permitindo o melhor uso de unidades de sangue com fenótipos menos frequentes na nossa população de doadores de sangue.

The determination of the blood group antigen profile of blood donors and transfusion patients is important to avoid alloimmunization. The knowledge of blood group polymorphisms acquired over the last few years has permitted the development of molecular methods that are able to predict blood group phenotypes. For patients who have recently been transfused or those who present with autoimmune hemolytic anemia, genotyping is an important tool in blood typing. We used molecular biology (allele-specific PCR and PCR-RFLP) to genotype Rh (RHD, RHCE*C/c, RHCE*E/e), Kell (KEL*1/KEL*2), Kidd (JK*A/JK*B) and Duffy (FY*A/FY*B and FYB(-33T>C)) alleles and solved the inconclusive blood types of 36 patients. Twenty patients had developed irregular antibodies of different red blood cell antigens, most frequently anti-E (55 percent). The definition of irregular antibodies was feasible by genotyping. Due to their accuracy, simplicity and economic viability, these tests have been used in the clinical practice in our Institution since 2007, contributing to the management of chronically transfused patients. Additionally, these tests allow a better use of less common blood units related to the ethnicity of the blood donor population.

Freqüência de anticorpos irregulares em politransfundidos no Hemocentro Regional de Uberaba-MG, de 1997 a 2005 / Frequency of irregular antibodies in multiple-transfused patients at the Regional Blood Bank of Uberaba, from 1997 to 2005

A fenotipagem eritrocitária pré-transfusional é um importante procedimento para aumentar a segurança das transfusões sangüíneas, sendo realizada rotineiramente no Hemocentro Regional de Uberaba-MG (HRU) desde 1996. O presente trabalho tem como objetivo geral avaliar a freqüência de anticorpos antieritrocitários irregulares em politransfundidos, de 1997 a 2005. Através de estudo retrospectivo foram levantados dados no arquivo do HRU de todos os pacientes aloimunizados, realizou-se análise estatística descritiva e comparam-se as proporções pelo teste "Z". Dos 23.220 transfundidos no período, com média de 5,7 transfusões por paciente, observou-se a ocorrência de aloimunização em 173 (0,75 por cento). Os sistemas Rh e Kell juntos tiveram freqüência superior a 70 por cento. A proporção do anti-D foi significativamente maior nas mulheres (p<0,05) e não houve diferença no sistema Rh entre brancos e não-brancos. Quanto à faixa etária, 70 por cento tinham mais de 30 anos. Dos 73 pacientes que tiveram a doença de base registrada, 39,73 por cento eram portadores de anemias agudas, 31,51 por cento de anemias crônicas e 28,77 por cento de doenças oncológicas ou onco-hematológicas. Aproximadamente 70 por cento dos anticorpos foram identificados até a décima transfusão. A baixa ocorrência da aloimunização no HRU reforça a importância da fenotipagem eritrocitária para todos os pacientes dependentes de transfusões crônicas, bem como da sua implantação na rotina de todos os serviços de hemoterapia.

Testing of the pre-transfusional blood phenotype, which has been carried out at the Regional Blood Bank in Uberaba since 1996, is an important procedure to improve safety of blood transfusions. This study aims to describe the frequency of irregular red blood cell antibodies in multiple-transfused patients from 1997 to 2005. In a retrospective study, data from all alloimmunized patients were collected from the blood bank files. Descriptive statistical analysis was performed and a comparison of proportions was made using the Z test. Alloimmunization was observed in 173 (0.75 percent) of the 23,220 transfused patients, with an average of 5.7 transfusions per patient. The frequency of the Rh and Kell systems jointly was over 70 percent. The proportion of anti-D was significantly higher in women (p<0.05) and no difference was noted in the Rh system between Caucasians and non-Caucasians. Seventy percent (70 percent) of the patients were over 30 years of age. Out of the 73 patients with registered diseases, 39.73 percent had acute anemias, 31.51 percent chronic anemias and 28.77 percent oncological or onco-hematologic diseases. Approximately 70 percent of antibodies were discovered before the 10th transfusion. The low frequency of alloimmunization observed at the Regional Blood Bank of Uberaba reinforces the importance of pre-transfusional blood phenotype screening for all multiple-transfused patients as well as its adoption as a common practice in all hemotherapy center.

Post-transfusion red cell alloimmunisation in patients with acute disorders and medical emergencies

Alloimmunisation following red cell transfusion is a complication in patients with chronic diseases requiring multiple transfusions. The aim of this study was to determine the frequency of alloimmunisation, to identify involved alloantibodies, to establish risk factors and to quantify the alloimmunisation risk in patients with acute disorders who received red cell transfusion at the Instituto Dr. José Frota from January 1999 to January 2001. Of the 5,690 recipients who received 16,547 units of red blood cells, 4,025 were men and 1,665 were women. Recipients with previous alloimmunisation or with time of hospital stay less than one week were excluded (n = 501). Red cell alloantibodies were detected in 120 recipients (2.1 percent): 60 men (1.49 percent) and 60 women (3.60 percent). Alloimmunisation was 2.4 fold more frequent in women and 93.33 percent of the women were pregnant prevously. The average number of units transfused in the alloimmunised recipients was 4.68: 4.97 units in men and 4.40 units in women. In non-alloimmunised recipients the average was 2.87 units and the risk of alloimmunisation was 0.83 percent: 0.59 percent in men and 1.44 percent in women. The most frequent allo-antibodies were: anti-E (18.25 percent) and anti-D (16.06 percent) from a total of 137 allo-antibodies detected. The median time for detection of allo-antibodies was 20.88 days. The risk of alloimmunisation detected was high considering the average number of units transfused. The age of recipients and the longer life expectancy increase the probability of further transfusion requirements in this group. Our findings point out the necessity of modifications in the current medical transfusion support indication, including in patients with acute disorders in order to prevent alloimmunisation.

A aloimunização eritrocitária após transfusão de concentrado de hemácias é uma complicação em pacientes com doenças crônicas que necessitam de transfusões de repetição. Esse estudo objetivou determinar a freqüência de aloimunização, identificar os aloanticorpos, estabelecer os fatores de risco envolvidos e quantificar o risco de aloimunização em pacientes com condições clínicas agudas, submetidos à transfusão de concentrados de hemácias no Instituto Doutor José Frota, utilizando a técnica de gel centrifugação. Foram analisados 5.690 receptores transfundidos com 16.547 concentrados de hemácias, sendo 4.025 do sexo masculino e 1.665 do sexo feminino. Foram excluídos 501 receptores com aloimunização prévia ou tempo de permanência hospitalar inferior a uma semana. Em 120 receptores (2,1 por cento) foram detectados aloanticorpos eritrocitários, sendo 60 do sexo masculino (1,49 por cento) e 60 do sexo feminino (3,60 por cento). A aloimunização foi 2,4 vezes mais freqüente no sexo feminino, sendo que 93,33 por cento das mulheres tinham história de gestação prévia. A média transfusional nos receptores aloimunizados foi de 4,68 bolsas, sendo 4,97 bolsas nos homens e 4,40 bolsas nas as mulheres. Nos pacientes não aloimunizados a média transfusional foi de 2,87 bolsas. O risco de aloimunização foi de 0,83 por cento, sendo 0,59 no sexo masculino e 1,44 por cento no sexo feminino. Os aloanticorpos detectados com maior freqüência foram anti-E (18,25 por cento) e anti-D (16,06 por cento) de um total de 137 aloanticorpos. O tempo médio de detecção dos aloanticorpos foi de 20,88 dias. O risco de aloimunização observado foi elevado para a média transfusional de receptores. A média de idade dos pacientes e o aumento da expectativa de vida aumentam a possibilidade de que transfusões posteriores sejam necessárias, sinalizando a necessidade de modificar o atual suporte hemoterápico a esses pacientes.

Aloimunização eritrocitária em pacientes portadores de anemia falciforme / Red blood alloimmunization in sickle cell anemia patients

A anemia falciforme é uma doença hereditária na qual as moléculas de hemoglobina estão geneticamente alteradas. Ocorre quando o indivíduo herda o gene S para a hemoglobina e esta herança é homozigótica, ou seja, Hb SS. O defeito genético é devido a uma mutação no cromossomo 11 que se constitui basicamente na substituição do ácido glutâmico pela valina na posição 6 do segmento A da cadeia polipeptídica beta. Os pacientes com anemia falciforme, tem crises dolorosas pelos microinfartos decorrentes do afoiçamento in vivo, tem suscetibilidade aumentada às infecções e tem significativa diminuição de sobrevida. O tratamento das complicações é feito principalmente com hidratação por via oral e/ou endovenosa, manutenção da boa diurese e o combate à acidose e, quando este não resolve, faz-se necessário a transfusão sanguínea expondo o paciente a diversas situações indesejáveis como aloimunização provocada pela exposição do paciente à diferentes antígenos eritrocitários causando a produção de anticorpos específicos contra estes antígenos. O presente trabalho teve como objetivo determinar a prevalência de anticorpos eritrocitários irregulares em pacientes portadores de anemia falciforme. Foram testados 31 soros de pacientes do HEMONORTE e Hospital Infantil Varela Santiago (H.I.V.S.) com idades variando entre 1 e 47 anos, no período de março de 1998 a fevereiro de 1999. Estes soros foram testados pelo gel teste centrifugação Liss/Coombs para a pesquisa de anticorpo irregular (P.A.I.) e, quando positivo, utilizou-se para a identificação do anticorpo irregular (I.A.I.), o painel de hemácias em 2 meios: Liss/Coombs e Papaína. A prevalência do anticorpo irregular foi de 3,2% (anti-S), concluindo-se que este baixo índice encontrado pode ter sido devido a pouca idade dos pacientes (maioria jovens) e a realização de um tratamento baseado na hidratação, no combate a dor e na oxigenoterapia evitando-se ao máximo as transfusões.