Antibiotic microbial assay using kinetic-reading microplate system / Ensaio microbiano antibiótico utilizando cinética de leitura de microplacas sistema

The aim of this study was to determine the optimal experimental conditions to develop a methodology for microbiological assay of apramycin employing microplate and kinetic reading mode, and to validate the developed method, through evaluation of parameters of selectivity, linearity, linear range, limits of detection and quantification, accuracy and precision. The turbidimetric assay principle is simple: the test solution is added to a suspension of test microorganism in culture media, the mixture is incubated under appropriate conditions and the microbial growth is measured by photometric reading. Microplate with kinetic reading mode employed in antibiotic assay is of considerable interest since it allows reduction of material and analysis time and enables a large number of samples to be analyzed simultaneously, with automated reading and calculating. Established conditions considered the standard-curve of apramycin at concentrations from 5.0 to 35.0 μg mL-1, and tryptic soy broth inoculated with 5 percent Escherichia coli (ATCC 8739) suspension. Satisfactory results were obtained with 2 hours of incubation. The developed method showed appropriate selectivity, linearity in the range from 5.0 to 35.0 μg mL-1, limits of detection and quantification of 0.1 and 0.4 μg mL-1, respectively, as well as satisfactory accuracy (recuperation = 98.5 percent) and precision (RSD = 6.0 percent). Microplate assay combined the characteristics of microbiological (evaluation of antibiotic activity against sensitive test microorganism) and physico-chemical (operationally straightforward and faster results) assays.

O objetivo deste trabalho é determinar as condições experimentais ideais para o desenvolvimento de metodologia para a dosagem microbiológica de apramicina empregando microplacas e modo de leitura cinético e validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, limite de detecção e quantificação, exatidão e precisão. O ensaio turbidimétrico é simples: a solução-teste é adicionada à suspensão de microrganismo-teste em meio de cultura, a mistura é incubada em condições apropriadas e o crescimento microbiano é medido por meio de leitura fotométrica. O emprego de método de microplacas com leitura cínética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizados. As condições estabelecidas abrangem curva-padrão de apramicina com concentrações entre 5 e 35 μg/mL, e emprego de meio de cultura caldo de triptona-soja inoculado com Escherichia coli (ATCC 8739) na proporção de 5 por cento. Foram obtidos resultados satisfatórios após 2 horas de incubação. O método desenvolvido apresentou especificidade e seletividade adequadas, linearidade na faixa de 5 a 35 μg/mL, limite de detecção e quantificação de 0,1 e 0,4 μg/mL, respectivamente, exatidão (recuperação = 98,5 por cento) e precisão (DPR = 6,0 por cento) satisfatórias. O ensaio em microplaca agrega características dos ensaios microbiológicos (avaliação da atividade do antibiótico frente a microrganismo-teste sensível) e físico-químicos (facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados).

Determination of apramycin in oral soluble powder by a HPLC method using pre-column derivatization with o-phthalaldehyde and UV detection / Determinação da apramicina em pó solúvel oral por um método de HPLC utilizando pré-coluna de derivação com o de detecção de ftalaldeído e UV

A high-performance liquid chromatographic method employing pre-column derivatization with o-phthalaldehyde (OPA) and 2-mercaptoacetic acid was developed for the determination of apramycin, an aminoglycoside antibiotic used in veterinary medicine, in the oral soluble powder form. The chromatographic separation was done by ion-pair HPLC using a C18 reversed-phase column, Synergy Hydro (150 mm x 4.6 mm x 4 µm) and mobile phase composed of 0.005 mol/L sodium octanosulfonate in a mixture of acetonitrile: water: acetic acid (45:55:2) (v/v/v) with a flow rate of 1.0 mL/min; the UV detector was operated at 332 nm. The developed method was validated according to official compendia guidelines, having demonstrated robustness, selectivity and linearity for the concentration range of 0.02 to 0.05 mg/mL, precision (with RSD < 2.0 percent both for intra and inter-day precision) accuracy (average recuperation of 99.33 percent) and detectivity (quantification and detection limits of 0.08 and 0.02 µg/mL, respectively). Three batches of commercial apramycin oral soluble powder were analyzed by both the proposed method and the official microbiological method, where all the results obtained were in the acceptable range (95 percent to 105 percent of labeled value of apramycin). Both methods were statistically compared by the t test, which yielded no significant differences (α = 0.05) thereby confirming the equivalence of the methods.

Foi desenvolvido um método por cromatografia líquida alta eficiência empregando derivatização pré-coluna com o-ftalaldeído (OPA) e ácido mercaptoacético para determinação de apramicina, um antibiótico aminoglicosídeo de uso veterinário, em pó oral solúvel. A separação cromatográfica foi feita por fase reversa com pareamento iônico utilizando-se coluna Synergy Hydro C18 (150 x 4,6 mm x 4 µm) e fase móvel composta por octanossulfonato de sódio 0,005 mol/L em mistura de acetonitrila:água:ácido acético nas proporções 45:55:2 (v/v/v), numa vazão de 1.0 mL/min; efetuou-se detecção por UV a 332 nm. O método foi validado de acordo com os compêndios oficiais e demonstrou robustez, seletividade, linearidade na faixa de 0,02 a 0,05 mg/mL, precisão (com DPR < 2,0 por cento tanto para a precisão intra-dia quanto para a precisão inter-dia), exatidão (recuperação média de 99,33 por cento) e detectabilidade (limite de quantificação e de detecção iguais a 0,08 e 0,02 µg/mL, respectivamente). Analisaram-se 3 lotes de apramicina pó oral solúvel pelo método proposto e pelo método microbiológico oficial e todos os resultados obtidos estavam dentro do limite de aceitação (95 por cento-105 por cento valor rotulado de apramicina). Ambos os métodos foram comparados estatisticamente pelo teste t, não sendo encontradas diferenças significativas entre eles para α=0,05, sendo os dois equivalentes.

Effects of the antibiotics and zinc oxide on piglets ration intake after weaning and on diarrhea incidence / Efeitos de antibióticos e óxido de zinco sobre o consumo de ração de leitões após o desmame e ocorrência de diarréia

The experiment was conducted to evaluate the use of tilmicosin plus apramicin and tilmicosine associated or no with zinc oxide on feed intake of weaned piglets (21 days) and their effects on performance until 35 days of age. They were used farmers, denominated A and B, where were evaluated 191 and 209 animals, respectively. The treatments were: T1 ration with tilmicosin (200 ppm) plus zinc oxide (2550 ppm); T2 ration with tilmicosin (200 ppm) plus apramicin (100 ppm) and T3 ration with zinc oxide (2550 ppm). They were evaluated the daily weight gain, daily feed intake, feed:gain ratio, diarrhea incidence, pneumonia incidence and mortality rate. It was used a randomized block design with 6 replicates in farmer A and 7 replicates in farmer B. The means were analyzed by Tukey test. It is observed, only to farmer A, a lower feed intake and weight gain to T3 treatment compared to T2 (P0.05) among treatments to farmer A and B. The use of tilmicosin associated or no with zinc oxide in rations of weaned piglets did not determine negative effects on feed intake and on performance. The drugs used are efficient to control of diarrhea.

O experimento foi conduzido visando avaliar o uso da tilmicosina mais apramicina e da tilmicosina associada ou não ao óxido de zinco, sobre o consumo de ração de leitões recém-desmamados (21 dias) e seus efeitos no desempenho até os 35 dias de idade. Foram utilizadas duas granjas, denominadas A e B, envolvendo 191 animais e 209 animais, respectivamente. Os tratamentos estabelecidos foram: T1- ração com tilmicosina (200 ppm) + óxido de zinco (2550 ppm); T2 - ração com tilmicosina (200 ppm) + apramicina (100 ppm) e T3 ração com óxido de zinco (2550 ppm). Foram avaliados o ganho diário de peso, o consumo diário de ração, a conversão alimentar, a ocorrência de diarréias, incidência de pneumonias e a taxa de mortalidade. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, com 3 tratamentos e 6 repetições por tratamento para a granja A e com 7 repetições para a granja B, sendo as médias comparadas pelo teste de Tukey. Na granja A somente observou-se piora no consumo de ração e no ganho de peso do tratamento T3 em relação a T2 (p 0,05). Para todos os outros parâmetros avaliados não foram observadas diferenças (p > 0,05) entre os tratamentos, tanto para granja A quanto para a granja B. A utilização de tilmicosina associado ou não ao óxido de zinco em rações de leitões recém-desmamados não determinou efeitos negativos sobre o consumo e o desempenho. As drogas usadas são ef

Ação Isolada ou Combinada de Ácidos Orgânicos e Promotor de Crescimento em Rações de Frangos de Corte

A trial was carried out to study isolated or combined effect of Apramicin (10ppm) and formic + propionic acids (0.0; 0.1 and 0.2%) supplementation in broilers diets. Acids mixtures were blended in a 1:1 ratio. A completely randomized design was utilized in a 2 x 3 x 2 factorial scheme (apramicim x organic acids x sex) with 4 replicates of 45 birds per experimental unit, with 2160-day-old Cobb chicks. Birds were fed "ad libitum". In the initial phase, the supplementation of apramicin and organic acids (0.1%) alone, increased (p 0,05) body weight gain. Combined supplementation did not promote an accumulative effect. However, apramicin in the presence of organic acids supplementation decreased feed efficiency. In the final and total phases, broilers performance parameters were not affected by treatment. Combined supplementation of apramicin and organic acids (0,1%) decreased carcass yield.

O experimento teve como objetivo verificar a ação da apramicina (10 ppm) e dos ácidos fórmico + propiônico (0,0; 0,1 e 0,2%) no desempenho de frangos de corte sexados. A mistura dos ácidos orgânicos foi de 1:1. O delineamento foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2 x 3 x 2 (apramicina x ácidos orgânicos x sexos), com 4 repetições de 45 aves por parcela, totalizando 2.160 pintos Cobb de 1 dia. As aves receberam ração à vontade. Na fase inicial, a adição da apramicina (10 ppm) e 0,1% dos ácidos orgânicos, isoladamente, melhorou o ganho de peso das aves. A adição conjunta dos produtos não promoveu ganho acumulado. Na presença da apramicina, a adição dos ácidos orgânicos piorou a conversão alimentar. Nas fases final e total, os dados de desempenho não apresentaram diferenças significativas. O rendimento de carcaça foi prejudicado com a adição conjunta da apramicina e 0,1% dos ácidos orgânicos.

Ação Isolada ou Combinada de Ácidos Orgânicos e Promotor de Crescimento em Rações de Frangos de Corte

A trial was carried out to study isolated or combined effect of Apramicin (10ppm) and formic + propionic acids (0.0; 0.1 and 0.2%) supplementation in broilers diets. Acids mixtures were blended in a 1:1 ratio. A completely randomized design was utilized in a 2 x 3 x 2 factorial scheme (apramicim x organic acids x sex) with 4 replicates of 45 birds per experimental unit, with 2160-day-old Cobb chicks. Birds were fed "ad libitum". In the initial phase, the supplementation of apramicin and organic acids (0.1%) alone, increased (p 0,05) body weight gain. Combined supplementation did not promote an accumulative effect. However, apramicin in the presence of organic acids supplementation decreased feed efficiency. In the final and total phases, broilers performance parameters were not affected by treatment. Combined supplementation of apramicin and organic acids (0,1%) decreased carcass yield.

O experimento teve como objetivo verificar a ação da apramicina (10 ppm) e dos ácidos fórmico + propiônico (0,0; 0,1 e 0,2%) no desempenho de frangos de corte sexados. A mistura dos ácidos orgânicos foi de 1:1. O delineamento foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2 x 3 x 2 (apramicina x ácidos orgânicos x sexos), com 4 repetições de 45 aves por parcela, totalizando 2.160 pintos Cobb de 1 dia. As aves receberam ração à vontade. Na fase inicial, a adição da apramicina (10 ppm) e 0,1% dos ácidos orgânicos, isoladamente, melhorou o ganho de peso das aves. A adição conjunta dos produtos não promoveu ganho acumulado. Na presença da apramicina, a adição dos ácidos orgânicos piorou a conversão alimentar. Nas fases final e total, os dados de desempenho não apresentaram diferenças significativas. O rendimento de carcaça foi prejudicado com a adição conjunta da apramicina e 0,1% dos ácidos orgânicos.