Spread analysis of glanders in the state of Piauí, northeastern Brazil.

Brazil is strategic in controlling neglected zoonoses, such as glanders, in its territory. Among the Brazilian states, Piauí is a strategic state for the spread of the disease in the country. The present study aimed to evaluate the spatial and temporal distribution of official cases of glanders in Piauí between 2015 and 2022. The glanders cases were located in the municipalities of the north and central-north mesoregions, mainly in Campo Maior, Teresina and Altos. The highest incidence risk (IR) occurred in of Altos (IR = 257.9), Sussuapara (IR = 158.4), and Teresina (IR = 157.7). A primary cluster was formed with a relative risk of 14.88 between 2019 and 2022, encompassing 34 municipalities in the north and central-north regions. In Piauí, glanders is well localized, with the potential for spread across borders. This is the first study demonstrating the distribution of reported cases of glanders in the state of Piauí.

Glanders Diagnosis in an Asymptomatic Mare from Brazil: Insights from Serology, Microbiological Culture, Mass Spectrometry, and Genome Sequencing.

This manuscript elucidates the occurrence of glanders in an asymptomatic mare from Brazil presenting positive Burkholderia mallei antibody titers. The diagnosis was established through a multi-pronged approach encompassing microbiological culture, mass spectrometry, and genome sequencing. The outbreak occurred in 2019 in Tatuí, São Paulo, Brazil, and the infected mare, despite displaying no clinical symptoms, had multiple miliary lesions in the liver, as well as intense catarrhal discharge in the trachea. Samples were collected from various organs and subjected to bacterial isolation, molecular detection, and identification. The strain was identified as B. mallei using PCR and confirmed by MALDI-TOF mass spectrometry. Whole-genome sequencing revealed a genome size of 5.51 Mb with a GC content of 65.8%, 5871 genes (including 4 rRNA and 53 tRNA genes), and 5583 coding DNA sequences (CDSs). Additionally, 227 predicted pseudogenes were detected. In silico analysis of different genomic loci that allow for differentiation with Burkholderia pseudomallei confirmed the identity of the isolate as B. mallei, in addition to the characteristic genome size. The BAC 86/19 strain was identified as lineage 3, sublineage 2, which includes other strains from Brazil, India, and Iran. The genome sequencing of this strain provides valuable information that can be used to better understand the pathogen and its epidemiology, as well as to develop diagnostic tools for glanders.

Historical highlights regarding glanders, from 2007 to 2017, in the state of Maranhão, Brazil / Destaques históricos do mormo, de 2007 a 2017, no estado do Maranhão, Brasil

Glanders is an infectious disease of equids caused by Burkholderia mallei, a facultative intracellular non-mobile Gram-negative bacterium that can be transmitted to other animals and humans. This study described glanders cases reported in the state of Maranhão, located within an Amazon-Cerrado transition region in northeastern Brazil, from 2007 to 2017. A database in an electronic spreadsheet (Microsoft Excel 2010) was developed containing information on the number of positive animals according to age, sex, purpose, year and month, municipality and mesoregion of origin of the animal. The descriptive analyzis was performed on data provided by the State Agency for Agricultural and Livestock Protection of the state of Maranhão (AGED), and by the official private laboratory. As the database did not have information data about negative animals, possible risk factors could not be evaluated. Among the total of 62,555 equids were evaluated by means of the complement fixation test (CFT), 59,036 were horses, 2,981 mules and 538 donkeys. Thirty-five samples (0.06%) reacted in the CFT. Five additional samples were by the western blot technique and three of them were positive. All the reactive horses (Equuscaballus) were from rural areas. Results presented here indicate that glanders may be endemic in the state of Maranhão and is a public health concern.

O mormo é uma doença infecciosa de equídeos causada por Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa intracelular, não móvel e facultativa que pode ser transmitida a outros animais e humanos. O objetivo deste estudo foi descrever os casos de mormo relatados no estado do Maranhão, em uma região de transição Amazônia-Cerrado do Nordeste do Brasil, no período de 2007 a 2017. Um banco de dados em uma planilha eletrônica (Microsoft Excel 2010) foi desenvolvido contendo informações sobre o número de animais positivos de acordo com a idade, sexo, finalidade, ano, mês, municípios e mesorregiões de origem do animal. A análise descritiva foi realizada sobre os dados fornecidos pela Agência Estadual de Defesa Agropecuária do Estado do Maranhão (AGED), e pelo laboratório privado oficial. Como o banco de dados não possui informações sobre animais negativos, possíveis fatores de risco não puderam ser avaliados. Entre o total de 62.555 equídeos foram avaliados com o teste de fixação do complemento (CFT), 59.036 eram cavalos, 2.981 mulas e 538 jumentos. Trinta e cinco (0,06%) amostras reagiram ao CFT. Cinco amostras adicionais foram testadas pela técnica de western blot e três foram positivas. Todos os animais positivos foram cavalos (Equus caballus) da área rural. Os resultados indicam que o mormo pode ser endêmico no estado do Maranhão e uma preocupação de saúde pública.

Identification of management factors associated with glanders's occurrence in equids in Brazilian Northeast region / Identificação dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo em equídeos no Nordeste do Brasil

Glanders is a contagious zoonotic infectious disease characterized by an acute or chronic condition that mainly affects equids and is caused by Burkholderia (B.) mallei. From January 2005 to December 2017, 697 farms with positive cases of this disease were registered in Brazil, with the Northeast region accounting for 61.4% (428/697) of the total number of cases. This study conducted an epidemiological study of B. mallei infections that occurred in farms in the states of Pernambuco, Paraíba, Ceará and Alagoas. For this purpose, investigative questionnaires were applied to six farms where there were outbreaks of glanders and 11 farms where there were no reports of glanders between 2017 and 2021, and statistical analysis of the factors associated with the occurrence of glanders in Northeastern Brazil was performed. Factors such as the purpose of rearing (P = 0.023), lack of information on disease transmission modes (P = 0.034), failure to carry out periodic tests for glanders diagnosis (P = 0,029), no request for glanders tests prior to the purchase of new animals periodic tests for glanders diagnosis (P = 0.029), not requiring a negative test for glanders in the acquisition of animals (P = 0.06), use of extensive breeding systems(P = 0.027), and poor stall hygiene were associated with disease occurrence (P = 0.001). Understanding the factors related to the occurrence of glanders in the Northeast Region of Brazil helps to establish management measures that minimize bacteria transmission, thereby reducing the number of cases in the region and economic losses associated with glanders.

O mormo é uma doença infectocontagiosa, zoonótica, de caráter agudo ou crônico, que acomete principalmente os equídeos, causado por Burkholderia (B.) mallei. De janeiro de 2005 até dezembro de 2017, 697 focos da doença foram registrados no Brasil, sendo que a região Nordeste detém 61,4% (428/697) do total de focos. Objetivou-se realizar um estudo epidemiológico da infecção por Burkholderia mallei em propriedades nos estados de Pernambuco, Paraíba, Ceará e Alagoas. Para tal foi aplicado questionário investigativo em seis fazendas onde houve caso de Mormo e 11 fazendas em que não houve relato entre 2007 e 2011 e realizada análise estatística dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo no Nordeste do Brasil. Observou-se associação significativa para as seguintes variáveis: objetivo da criação (comércio, esporte e trabalho nas fazendas) (P = 0,023); ausência de informação sobre as formas de transmissão da bactéria (P = 0,034); não realização de exames periódicos para o diagnóstico do mormo (P = 0,029); exigência de exame negativo na compra de equinos (P = 0,06); utilização do sistema de criação extensivo (P = 0,027) e deficiência de higienização das baias (P = 001). Os resultados obtidos devem ser utilizados na implementação de medidas de manejo que minimizem o risco de transmissão da bactéria, reduzindo os casos da doença na região e as perdas econômicas com o mormo.

Identification of management factors associated with glanders's occurrence in equids in Brazilian Northeast region / Identificação dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo em equídeos no Nordeste do Brasil

ABSTRACT: Glanders is a contagious zoonotic infectious disease characterized by an acute or chronic condition that mainly affects equids and is caused by Burkholderia (B.) mallei. From January 2005 to December 2017, 697 farms with positive cases of this disease were registered in Brazil, with the Northeast region accounting for 61.4% (428/697) of the total number of cases. This study conducted an epidemiological study of B. mallei infections that occurred in farms in the states of Pernambuco, Paraíba, Ceará and Alagoas. For this purpose, investigative questionnaires were applied to six farms where there were outbreaks of glanders and 11 farms where there were no reports of glanders between 2017 and 2021, and statistical analysis of the factors associated with the occurrence of glanders in Northeastern Brazil was performed. Factors such as the purpose of rearing (P = 0.023), lack of information on disease transmission modes (P = 0.034), failure to carry out periodic tests for glanders diagnosis (P = 0,029), no request for glanders tests prior to the purchase of new animals periodic tests for glanders diagnosis (P = 0.029), not requiring a negative test for glanders in the acquisition of animals (P = 0.06), use of extensive breeding systems(P = 0.027), and poor stall hygiene were associated with disease occurrence (P = 0.001). Understanding the factors related to the occurrence of glanders in the Northeast Region of Brazil helps to establish management measures that minimize bacteria transmission, thereby reducing the number of cases in the region and economic losses associated with glanders.

RESUMO: O mormo é uma doença infectocontagiosa, zoonótica, de caráter agudo ou crônico, que acomete principalmente os equídeos, causado por Burkholderia (B.) mallei. De janeiro de 2005 até dezembro de 2017, 697 focos da doença foram registrados no Brasil, sendo que a região Nordeste detém 61,4% (428/697) do total de focos. Objetivou-se realizar um estudo epidemiológico da infecção por Burkholderia mallei em propriedades nos estados de Pernambuco, Paraíba, Ceará e Alagoas. Para tal foi aplicado questionário investigativo em seis fazendas onde houve caso de Mormo e 11 fazendas em que não houve relato entre 2007 e 2011 e realizada análise estatística dos fatores de manejo associados à ocorrência do Mormo no Nordeste do Brasil. Observou-se associação significativa para as seguintes variáveis: objetivo da criação (comércio, esporte e trabalho nas fazendas) (P = 0,023); ausência de informação sobre as formas de transmissão da bactéria (P = 0,034); não realização de exames periódicos para o diagnóstico do mormo (P = 0,029); exigência de exame negativo na compra de equinos (P = 0,06); utilização do sistema de criação extensivo (P = 0,027) e deficiência de higienização das baias (P = 001). Os resultados obtidos devem ser utilizados na implementação de medidas de manejo que minimizem o risco de transmissão da bactéria, reduzindo os casos da doença na região e as perdas econômicas com o mormo.

Pathology, microbiology, and molecular evaluation of tissues from equids serologically positive for Burkholderia mallei in Midwestern Brazil / Avaliação patológica, microbiológica e molecular em amostras de tecidos de equídeos sorologicamente positivos para Burkholderia mallei no Centro-Oeste do Brasil

Glanders is a disease caused by the bacterium Burkholderia mallei that primarily affects horses, mules and donkeys. The disease can cause lesions in the skin, lungs and several other organs. However, it often manifests as an asymptomatic disease. In Brazil, serological tests of high sensitivity and specificity are used to assist in the detection of antibodies against B. mallei and to contribute to the control of the disease. However, due to the mandatory euthanasia of seroreactive animals, equids with positive serology for B. mallei and asymptomatic generated great conflicts between breeders, veterinarians and diagnostic laboratories. This study clarifies the limitations of complementary diagnostic tests for detecting B. mallei. It describes the clinical, morphological and laboratory findings in 24 equines from different municipalities in the Mato Grosso State, Brazil, which reacted to the complement fixation test and were positive in the western blotting test for glanders. Data and tissue samples were collected from 24 horses for histological, microbiological and molecular analysis. In 23 horses, no clinical signs, morphological alterations, microbiological isolation, or molecular detection would characterize B. mallei infection. On the other hand, samples from an asymptomatic horse without lesional alterations showed sequence amplification compatible with B. mallei in the PCR. Considering that the infection by B. mallei is subject to the application of animal sanitary defense measures and that, by international requirement and national legislation, the serological results are tools that should support the sanitation procedures for the error of the bacteria in the Mato Grosso State, Brazil.

Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderia mallei que acomete primariamente cavalos, mulas e burros. A doença pode causar lesões na pele, pulmões e em diversos outros órgãos, entretanto frequentemente manifesta-se como uma enfermidade assintomática. No Brasil são utilizados testes sorológicos de elevada sensibilidade e especificidade para auxiliar na detecção de anticorpos contra B. mallei e contribuir para controle da doença. Porém, devido à obrigatoriedade da eutanásia de animais sororeagentes, os equídeos com sorologia positiva para B. mallei e assintomáticos geraram grandes embates entre criadores, médicos-veterinários e laboratórios de diagnóstico. Este trabalho esclarece as limitações dos testes diagnósticos complementares para detecção de B. mallei e descreve os achados clínicos, morfológicos e de exames laboratoriais em 24 equídeos, procedentes de diferentes municípios do estado de Mato Grosso, Brasil, que reagiram ao teste de fixação de complemento e foram positivos no teste de "western blotting" para mormo. Foram colhidos dados e amostras de tecidos de 24 equídeos para análise histológica, microbiológica e molecular. Em 23 equídeos não existiam sinais clínicos, alterações morfológicas, isolamento microbiológico ou detecção molecular que caracterizassem infecção por B. mallei. Por outro lado, amostras de um cavalo assintomático e sem alterações lesionais apresentaram amplificação de sequência compatível com B. mallei na PCR. Considerando que a infecção por B. mallei é passível da aplicação de medidas de defesa sanitária animal e que por exigência internacional e da legislação nacional, os resultados sorológicos são ferramentas que devem amparar os procedimentos de saneamento para erradicação da bactéria no estado de Mato Grosso, Brasil.

Molecular characterization of Burkholderia mallei strains isolated from horses in Brazil (2014-2017).

Glanders is an infectious zoonosis caused by Burkholderia (B.) mallei that mainly affects equids. The objective of this work was to provide additional knowledge on the diversity of the strains circulating in Brazil. Six Burkholderia mallei isolates obtained during necropsies of glanderous horses between 2014 and 2017 in two different states (Pernambuco and Alagoas) were analyzed by polymerase chain reaction-high-resolution melting (PCR-HRM). While four strains (9902 RSC, BM_campo 1, BM_campo 3 and UFAL2) clustered in the L3B2 branch, which already includes the Brazilian 16-2438_BM#8 strain, two strains (BM_campo 2.1 and BM_campo 2.2) clustered within the L3B3sB3 branch, which mostly includes older isolates, from Europe and the Middle East. Whole genome sequencing of two of these strains (UFAL2 and BM_campo 2.1), belonging to different branches, confirmed the HRM typing results and refined the links between the strains, including the description of the L3B3Sb3Gp1SbGp1 genotype, never reported so far for contemporary strains. These results suggest different glanders introduction events in Brazil, including a potential link with strains of European origin, related to colonization or trade.

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.(AU)

O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.(AU)

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

ABSTRACT: Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.

RESUMO: O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.

Monitoring the outbreak of equine glanders in Alagoas, Brazil: Clinical, immunological, molecular, and anatomopathological findings / Monitoramento de surtos de mormo nos equídeos em Alagoas, Brasil: achados clínicos, imunológicos, moleculares e anatomopatológico

Glanders is an infectious and often lethal zoonotic disease of equines caused by the bacterium, Burkholderia mallei. This condition is characterized by respiratory, lymphatic, and cutaneous lesions. In this study, we monitored the development of clinical symptoms in animals naturally infected with B. mallei across different equine breeds and also isolated and characterized the disease-causing bacteria. We studied two official glanders outbreaks in the state of Alagoas, Brazil. During the outbreaks, we performed clinical and immunological follow-up of the animals, as well as euthanasia and anatomopathological examination. We also collected diagnostic materials for isolative, phenotypic, molecular, and biological testing. We did not observe any clinical patterns of glanders among animals infected with the same strain of B. mallei. Based on our results, we suggest that early diagnosis of infection should be made through highly sensitive and specific immunoassays. In asymptomatic but positive test cases, we confirmed the importance of conducting pathological, microbiological, and molecular examinations.

O mormo é uma enfermidade infectocontagiosa e frequentemente letal, aguda ou crônica, caracterizada por lesões respiratórias, linfáticas e cutâneas em equídeos, porém de caráter zoonótico. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento dos sinais clínicos e de lesões em animais infectados naturalmente por B. mallei em diferentes propriedades de criação de equídeos, e isolar e caracterizar a bactéria causadora da doença. Foram estudados dois focos oficiais para o mormo no estado de Alagoas. Realizou-se o acompanhamento clinico e imunológico dos animais nos focos, eutanásia e exame anatomopatológico dos animais, além de colheita de material para diagnóstico através de técnicas de isolamento, fenotípicas, moleculares e prova biológica. Neste estudo não se observou um padrão clínico para o diagnóstico do mormo em animais infectados com a mesma cepa de B. mallei. O diagnóstico precoce da infecção deve ser realizado por meio de testes imunológicos de elevada sensibilidade e especificidade. Nos casos assintomáticos e positivos nos testes oficiais é importante a realização do exame anatomopatológico, microbiológico e molecular.

Systematic monitoring of glanders-infected horses by complement fixation test, bacterial isolation, and PCR.

Glanders is an equine zoonosis caused by Burkholderia mallei that is responsible for considerable economic loss. Complement fixation testing (CFT) using warm or cold incubation are recommended by the OIE, but many routinely used detection tests may present misleading results. To increase accuracy of glanders diagnosis and establish an appropriate protocol in collaboration with the National Equine Health Program, seven horses positive for glanders kept in isolation in Brazil were examined fortnightly by CFT, microbiological screening, and molecular testing. Warm and cold serologies with USDA and c.c.Pro antigens, respectively, were performed on 132 samples using the US Department of Agriculture protocol. The warm and cold serologies showed, respectively,12.9% and 17.3% seroreactive, 85.7% and 65.2% non-reactive, 0.8% and 3% inconclusive, and 0% and 2.3% anticomplementary. The agreement of CFT protocols was moderate. Of 213 clinical samples submitted to selective culture (167 nasal swabs, 5 ocular swabs, 3 lymph node punctures, and 38 tissue samples from four horses that died), 1.9% tested positive for B. mallei. Fourteen samples and one nasal swab (7%) tested positive with PCR. Cold CFT with the USDA and c.c.Pro antigens, in combination with PCR to increase sensitivity, may be useful for diagnosis of chronic glanders.

Clinical repercussions of Glanders (Burkholderia mallei infection) in a Brazilian child: a case report

Abstract Glanders is a relatively unknown zoonotic disease caused by Burkholderia mallei. This bacterium affect solipeds and humans, and can be used as a biological warfare. Glanders is characterized as an occupational disease. We report the case of an 11-year-old boy who was presented to an emergency department with chest pain and dyspnea. He evolved into septic shock, pneumonia, and multiple abscesses. B. mallei was found in the exudate culture. Human infection is rare and difficult to confirm. The knowledge on glanders is important for differential diagnosis from other serious illnesses causing pneumonia and multiple abscesses.

Sinais clínicos em equídeos naturalmente infectados por Burkholderia mallei no estado de Alagoas: relato de caso / Clinical Signs in equids naturally infected by Burkholderia mallei in the state of Alagoas: case report / Signos Clínicos en équidos infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el estado de Alagoas: reporte de caso

Há alguns anos o mormo chegou a ser considerado erradicado no Brasil pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), porém tem ganhado importância devido ao aumento no número de casos nos últimos anos em todos os estados brasileiros. Os sinais clínicos foram reconhecidos desde que a doença foi registrada pela primeira vez por Hipócrates e Aristóteles e as formas de manifestação da doença são prepatente, hiperaguda, aguda e crônica. Objetivou-se relatar os achados clínicos de equídeos naturalmente infectados com mormo em propriedades consideradas foco pela Agência de Defesa e Inspeção Agropecuária de Alagoas - ADEAL e pelo MAPA no estado de Alagoas. Os sinais clínicos observados nos animais acometidos foram, apatia, dispneia estertorosa, nódulos linfáticos infartados (aumentados), expectoração nasal mucopurulenta bilateral em 3/16 dos animais observados, 1/16 animal apresentou a forma crônica evidenciada pelo edema de membro posterior esquerdo, com presença de lesões ulceradas, linfagite disseminada, expectoração de secreção nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptise) e dispneia severa. Por fim os sinais clínicos e achados macroscópicos observados nos animais naturalmente infectados por Burkholderia mal/ei no estado de Alagoas corroboram com o descrito na literatura veterinária e para que haja o controle e a não disseminação da doença, animais positivos devem ser eutanasiados e propriedades foco devem ser interditadas.(AU)

A few years ago the glanders came to be considered eradicated in Brazil by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), but has gained importance due to the increase in the number of cases in recent years in ali Brazilian states. The clinical signs were recognized since the disease was first recorded by Hippocrates and Aristotle and the forms of the disease manifestation are prepatente, hyperacute, acute and chronic. This study aimed to report the clinical findings of equids naturally infected with glanders properties considered focus by the Defense Agency and Agriculturallnspection of Alagoas - ADEAL and the ap in the state of Alagoas. The clinical signs observed in animais affected were, apathy, dyspnea stertorous, infarcted Iymph nodes (increased), expectoration mucopurulent bilateral nasal in 3/16 of animais observed, 1/16 animal presented the chronic form evidenced by edema in the left posterior limb, with the presence of ulcerated lesions, linfagite disseminated, the expectoration of nasal secretion serosanguinolenta bilateral (hemoptysis) and severe dyspnea. Finally, the clinical signs and macroscopic findings observed in animais naturally infected by Burkholderia mallei in Alagoas state corroborate with the previously described in the literature on veterinary and for which there is no control and the spread of the disease, positive animais should be euthanized and focus should be interditadas properties.(AU)

Hace unos anos el Muermo llegó a ser considerado erradicado en Brasil por el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAPA), pero ha adquirido mayor importancia debido al aumento en el número de casos en los últimos anos en todos los estados brasilenos. Los signos clínicos fueron reconocidos desde que la enfermedad fue grabado por primera vez por Hipócrates y Aristóteles y las formas de las manifestaciones de la enfermedad son prepatente, Hiperaguda, aguda y crónica. Este estudio tiene como objetivo informar los hallazgos clínicos de équidos infectados naturalmente con el Muermo consideran propiedades focus por Ia Agencia de Defensa e Inspección Agrícola de Alagoas - ADEAL Y el MAPA en el estado de Alagoas. Los signos clínicos observados en los animales afectados fueron, apatía, disnea estertorosa, ganglios linfáticos infartados (aumento), expectoración nasal mucopurulento bilateral en 3/16 (tres/dieciséis) de animales observados, 1/16 (uno/dieciséis) animal presentado Iaforma crónica evidenciada por edema en la extremidad posterior izquierda, con la presencia de lesiones ulceradas, linfagite difundido, la expectoración de secreción nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptisis) y disnea severa. Por último, los signos clínicos y los hallazgos macroscópicos observados en los animales infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el Estado de Alagoas corroborar con las descritas previamente en la literatura sobre veterinaria y para los cuales no hay control y la propagación de la enfermedad, los animales positivos deben ser sacrificados y el enfoque debe ser interditadas propiedades.(AU)

Sinais clínicos em equídeos naturalmente infectados por Burkholderia mallei no estado de Alagoas: relato de caso / Clinical Signs in equids naturally infected by Burkholderia mallei in the state of Alagoas: case report / Signos Clínicos en équidos infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el estado de Alagoas: reporte de caso

Há alguns anos o mormo chegou a ser considerado erradicado no Brasil pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), porém tem ganhado importância devido ao aumento no número de casos nos últimos anos em todos os estados brasileiros. Os sinais clínicos foram reconhecidos desde que a doença foi registrada pela primeira vez por Hipócrates e Aristóteles e as formas de manifestação da doença são prepatente, hiperaguda, aguda e crônica. Objetivou-se relatar os achados clínicos de equídeos naturalmente infectados com mormo em propriedades consideradas foco pela Agência de Defesa e Inspeção Agropecuária de Alagoas - ADEAL e pelo MAPA no estado de Alagoas. Os sinais clínicos observados nos animais acometidos foram, apatia, dispneia estertorosa, nódulos linfáticos infartados (aumentados), expectoração nasal mucopurulenta bilateral em 3/16 dos animais observados, 1/16 animal apresentou a forma crônica evidenciada pelo edema de membro posterior esquerdo, com presença de lesões ulceradas, linfagite disseminada, expectoração de secreção nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptise) e dispneia severa. Por fim os sinais clínicos e achados macroscópicos observados nos animais naturalmente infectados por Burkholderia mal/ei no estado de Alagoas corroboram com o descrito na literatura veterinária e para que haja o controle e a não disseminação da doença, animais positivos devem ser eutanasiados e propriedades foco devem ser interditadas.

A few years ago the glanders came to be considered eradicated in Brazil by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), but has gained importance due to the increase in the number of cases in recent years in ali Brazilian states. The clinical signs were recognized since the disease was first recorded by Hippocrates and Aristotle and the forms of the disease manifestation are prepatente, hyperacute, acute and chronic. This study aimed to report the clinical findings of equids naturally infected with glanders properties considered focus by the Defense Agency and Agriculturallnspection of Alagoas - ADEAL and the ap in the state of Alagoas. The clinical signs observed in animais affected were, apathy, dyspnea stertorous, infarcted Iymph nodes (increased), expectoration mucopurulent bilateral nasal in 3/16 of animais observed, 1/16 animal presented the chronic form evidenced by edema in the left posterior limb, with the presence of ulcerated lesions, linfagite disseminated, the expectoration of nasal secretion serosanguinolenta bilateral (hemoptysis) and severe dyspnea. Finally, the clinical signs and macroscopic findings observed in animais naturally infected by Burkholderia mallei in Alagoas state corroborate with the previously described in the literature on veterinary and for which there is no control and the spread of the disease, positive animais should be euthanized and focus should be interditadas properties.

Hace unos anos el Muermo llegó a ser considerado erradicado en Brasil por el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAPA), pero ha adquirido mayor importancia debido al aumento en el número de casos en los últimos anos en todos los estados brasilenos. Los signos clínicos fueron reconocidos desde que la enfermedad fue grabado por primera vez por Hipócrates y Aristóteles y las formas de las manifestaciones de la enfermedad son prepatente, Hiperaguda, aguda y crónica. Este estudio tiene como objetivo informar los hallazgos clínicos de équidos infectados naturalmente con el Muermo consideran propiedades focus por Ia Agencia de Defensa e Inspección Agrícola de Alagoas - ADEAL Y el MAPA en el estado de Alagoas. Los signos clínicos observados en los animales afectados fueron, apatía, disnea estertorosa, ganglios linfáticos infartados (aumento), expectoración nasal mucopurulento bilateral en 3/16 (tres/dieciséis) de animales observados, 1/16 (uno/dieciséis) animal presentado Iaforma crónica evidenciada por edema en la extremidad posterior izquierda, con la presencia de lesiones ulceradas, linfagite difundido, la expectoración de secreción nasal serosanguinolenta bilateral (hemoptisis) y disnea severa. Por último, los signos clínicos y los hallazgos macroscópicos observados en los animales infectados naturalmente por Burkholderia mallei en el Estado de Alagoas corroborar con las descritas previamente en la literatura sobre veterinaria y para los cuales no hay control y la propagación de la enfermedad, los animales positivos deben ser sacrificados y el enfoque debe ser interditadas propiedades.

First molecular characterisation of a Brazilian Burkholderia mallei strain isolated from a mule in 2016.

We present the first molecular characterisation based on MLVA and SNP analysis of a strain of Burkholderia mallei isolated from a mule found dead in Brazil in 2016.

Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos / Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae

Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.(AU)

The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.(AU)

Produção e purificação parcial de PPD-maleína para diagnóstico do mormo em equídeos / Partially purified malleo-proteins production for glanders diagnosis in Equidae

Objetivou-se com este estudo produzir e purificar parcialmente a PPD-maleína a partir de amostras de Burkholderia mallei isoladas de equídeos no Brasil com potencial para uso no diagnóstico do mormo. As linhagens de B. mallei fenotipicamente caracterizadas e de virulência comprovada foram inoculadas em caldo Dorset-Henley para crescer e metabolizar. Em seguida, as proteínas foram separadas por precipitação com ácido tricloroacético e precipitadas com sulfato de amônia. As PPDs-maleínas foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios foi eficaz no desenvolvimento da hipersensibilidade do tipo tardia e consequentemente na identificação de animais verdadeiro positivos e exclusão dos verdadeiro negativos, sendo uma possibilidade em potencial para utilização no diagnóstico do mormo.

The objective of this study was to produce and partially purify Malleo-protein from Burkholderia mallei samples isolates from Equidae in Brazil with potential for use in the diagnosis of glanders. The strain B. mallei phenotypically characterized and proven virulent was inoculated into broth Dorset-Henley to grow and metabolize. The proteins were separated by trichloroacetic acid precipitation and amonium sulfate precipitation. The PPD mallein was concentrated 1.0mg/mL and biologically tested in guinea pigs. It was effective in the development of delayed-type hypersensitivity and consequently to identify true-positive animals and to exclude of true negatives. There is the possibility for potential use in the glanders diagnosis in Equidae.

Diagnóstico do mormo através da técnica de fixação do complemento utilizando-se diferentes antígenos e métodos de incubação

O mormo é uma doença que acomete equídeos, produzida pela Burkholderia mallei, um cocobacilo, Gram-negativo, imóvel, anaeróbio e não esporulado (YABUUCHI et al., 1992), que pode ser transmitida para o homem, e seu agente utilizado como arma biológica (ULRICH, et al, 2006). Doença reemergente no Brasil desde 1999 tem sido motivo de discussão, no que concerne ao diagnóstico sorológico. Fixação do Complemento (FC) é o exame preconizado no programa de controle e erradicação do mormo, pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (BRASIL, 2004) e pela Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) para trânsito internacional (OIE 2008). Objetiva-se com este trabalho, avaliar os resultados do Teste de Fixação do Complemento frente a dois antígenos comercialmente disponíveis utilizando dois métodos de incubação, em soros de equinos de uma propriedade em Pernambuco.

Glanders is a disease that affects equids, produced by Burkholderia mallei, a coccobacillus, gram-negative, immobile, and not sporulated anaerobic (Yabuuchi et al., 1992), which can be transmitted to humans, and his agent used as a biological weapon (Ulrich, et al, 2006). Reemerging disease in Brazil since 1999, has been the subject of discussion regarding the serological diagnosis. Complement Fixation Test (CFT) is recommended in the examination program for control and eradication of glanders by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (BRAZIL, 2004) and the World Organization for Animal Health (OIE) for international trade (OIE 2008) The Objective of this study was to evaluate the results of the Complement Fixation Test using two antigens commercially available and two methods of incubation in sera of horses from a property in Pernambuco.

Desenvolvimento e avaliação de um teste ELISA indireto para o diagnóstico sorológico do mormo em equídeos / Standardization and evaluation of an indirect ELISA for the serological diagnosis of glanders in horses

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37°C; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizou-se o Conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100%, respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8 e 10,3%, respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, conclui-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.(AU)

Glanders is an infectious-contagious disease of acute or chronic character which principally affects horses, causing enormous losses in the productive chain of this animal. To control the disease, the Ministry of Agriculture, Husbandry and Supply instituted mandatory sanitation measures in the entire national territory which include an official diagnosis through the complement fixation (CF) test, maleinization and sacrifice of the animals that are positive. Nowadays the kits used for the diagnosis of the disease are imported, making their routine application difficult and more expensive. The objective of this study was to standardize an indirect ELISA test, using the proteic extract of Burkholderia mallei isolated from a carrier horse in the state of Pernambuco. The samples were cultivated in 10% blood agar and incubated for 48h at 37°C; later, one of the isolated colonies was characterized phenotypically and genotypically and immediately cultivated in brain heart infusion (BHI) for enrichment; then it was peaked (repicada) for the Dor-set Henley medium which was incubated at 37ºC under 60rpm for eight weeks. To standardize the test the Protein G Peroxidase Sigma Conjugate was used in the dilution of 1:90.000, with serums diluted in 1:100 and the antigen in 1:400. Sixty serums were used as negative controls, tested before the CF to determine the cutting point which was 0.042nm. After establishing the standardization, 300 samples were tested, of which 99% (297) were in agreement with the results obtained in the CF. At the end, of assay presented 100% sensibility and 98.2% specificity, with predictive (preditivo) positive and negative values of 97.7% and 100% respectively. The Kappa concordance test was 0.98 and the intra and interplac repeatability were 8.8% and 10.3% respectively. From the results obtained, it is possible to affirm that the indirect ELISA test can be used as an efficient diagnosis tool. However, more essays must be carried out to consolidate the reliability of this test.(AU)

Desenvolvimento e avaliação de um teste ELISA indireto para o diagnóstico sorológico do mormo em equídeos / Standardization and evaluation of an indirect ELISA for the serological diagnosis of glanders in horses

O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37°C; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizou-se o Conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100%, respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8 e 10,3%, respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, conclui-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.

Glanders is an infectious-contagious disease of acute or chronic character which principally affects horses, causing enormous losses in the productive chain of this animal. To control the disease, the Ministry of Agriculture, Husbandry and Supply instituted mandatory sanitation measures in the entire national territory which include an official diagnosis through the complement fixation (CF) test, maleinization and sacrifice of the animals that are positive. Nowadays the kits used for the diagnosis of the disease are imported, making their routine application difficult and more expensive. The objective of this study was to standardize an indirect ELISA test, using the proteic extract of Burkholderia mallei isolated from a carrier horse in the state of Pernambuco. The samples were cultivated in 10% blood agar and incubated for 48h at 37°C; later, one of the isolated colonies was characterized phenotypically and genotypically and immediately cultivated in brain heart infusion (BHI) for enrichment; then it was peaked (repicada) for the Dor-set Henley medium which was incubated at 37ºC under 60rpm for eight weeks. To standardize the test the Protein G Peroxidase Sigma Conjugate was used in the dilution of 1:90.000, with serums diluted in 1:100 and the antigen in 1:400. Sixty serums were used as negative controls, tested before the CF to determine the cutting point which was 0.042nm. After establishing the standardization, 300 samples were tested, of which 99% (297) were in agreement with the results obtained in the CF. At the end, of assay presented 100% sensibility and 98.2% specificity, with predictive (preditivo) positive and negative values of 97.7% and 100% respectively. The Kappa concordance test was 0.98 and the intra and interplac repeatability were 8.8% and 10.3% respectively. From the results obtained, it is possible to affirm that the indirect ELISA test can be used as an efficient diagnosis tool. However, more essays must be carried out to consolidate the reliability of this test.