Comparison of extenders and storage temperature in chilling canine semen / Diferentes diluentes e temperaturas de armazenamento para a refrigeração de sêmen canino

This study aimed to compare the effects a commercial milk-based extender and a self-made egg yolk extender had on the quality of canine semen stored at two different temperatures, 5ºC or 15ºC. The ejaculate obtained was split into two aliquots of equal volume and diluted with the milk or egg yolk extender. The final concentration was 100×106 spermatozoa/mL. Diluted semen was placed in transport containers and maintained at final storage temperatures of 5ºC and 15ºC. The quality of the chilled semen was assessed 12, 24, and 36 hours after storage. Semen diluted with the milk extender had higher motility, vigour, and plasma membrane integrity (p<0.05) of the spermatozoa than that diluted with the egg yolk extender. No difference in the semen quality was observed between the stored temperatures in both the groups. The difference observed between the extenders could be due to the standard formulation of the commercial milk extender and the presence of glucose in the mixture. In conclusion, the milk extender was better than the egg yolk extender at preserving the motility, viability, and membrane integrity of chilled canine semen for up to 36 hours. The storage temperature did not seem to affect the semen quality, suggesting that canine semen can be refrigerated at 15ºC.(AU)

O objetivo desse estudo foi avaliar a influência de um diluente comercial à base de leite, comparado à um diluente preparado com de gema de ovo na qualidade do sêmen de cão, armazenado em duas diferentes temperaturas (5º C ou 15º C). O ejaculado obtido foi dividido em duas alíquotas de volumes iguais, que foram diluídas com o diluente leite ou o diluente gema de ovo, apresentando uma concentração final de 100x106 espermatozoides/mL. O sêmen diluído foi colocado em caixas de transporte, mantendo temperaturas finais de refrigeração de 5º C e 15º C. A qualidade do sêmen refrigerado foi avaliada após 12, 24 e 36h de armazenamento. O sêmen diluído com o diluente leite resultou em maior motilidade, vigor e integridade de membrana plasmática (p<0,05) dos espermatozoides que o diluído com o diluente gema de ovo. Dentro de cada grupo, não foi encontrada nenhuma influencia da temperatura de armazenamento em relação à qualidade do sêmen. A diferença observada entre os diluentes, pode ter ocorrido devido à formulação padrão do diluente comercial à base de leite, além da presença de glicose em sua composição. Em conclusão, o diluente leite apresentou superior preservação da motilidade, viabilidade e integridade de membrana plasmática do sêmen de cão refrigerado, por até 36h de armazenamento, que o diluente gema de ovo, e a temperatura de armazenamento não interferiu na qualidade seminal, sugerindo que 15º C também pode ser utilizado para a refrigeração do sêmen canino.(AU)

Comparison of extenders and storage temperature in chilling canine semen / Diferentes diluentes e temperaturas de armazenamento para a refrigeração de sêmen canino

This study aimed to compare the effects a commercial milk-based extender and a self-made egg yolk extender had on the quality of canine semen stored at two different temperatures, 5ºC or 15ºC. The ejaculate obtained was split into two aliquots of equal volume and diluted with the milk or egg yolk extender. The final concentration was 100×106 spermatozoa/mL. Diluted semen was placed in transport containers and maintained at final storage temperatures of 5ºC and 15ºC. The quality of the chilled semen was assessed 12, 24, and 36 hours after storage. Semen diluted with the milk extender had higher motility, vigour, and plasma membrane integrity (p<0.05) of the spermatozoa than that diluted with the egg yolk extender. No difference in the semen quality was observed between the stored temperatures in both the groups. The difference observed between the extenders could be due to the standard formulation of the commercial milk extender and the presence of glucose in the mixture. In conclusion, the milk extender was better than the egg yolk extender at preserving the motility, viability, and membrane integrity of chilled canine semen for up to 36 hours. The storage temperature did not seem to affect the semen quality, suggesting that canine semen can be refrigerated at 15ºC.

O objetivo desse estudo foi avaliar a influência de um diluente comercial à base de leite, comparado à um diluente preparado com de gema de ovo na qualidade do sêmen de cão, armazenado em duas diferentes temperaturas (5º C ou 15º C). O ejaculado obtido foi dividido em duas alíquotas de volumes iguais, que foram diluídas com o diluente leite ou o diluente gema de ovo, apresentando uma concentração final de 100x106 espermatozoides/mL. O sêmen diluído foi colocado em caixas de transporte, mantendo temperaturas finais de refrigeração de 5º C e 15º C. A qualidade do sêmen refrigerado foi avaliada após 12, 24 e 36h de armazenamento. O sêmen diluído com o diluente leite resultou em maior motilidade, vigor e integridade de membrana plasmática (p<0,05) dos espermatozoides que o diluído com o diluente gema de ovo. Dentro de cada grupo, não foi encontrada nenhuma influencia da temperatura de armazenamento em relação à qualidade do sêmen. A diferença observada entre os diluentes, pode ter ocorrido devido à formulação padrão do diluente comercial à base de leite, além da presença de glicose em sua composição. Em conclusão, o diluente leite apresentou superior preservação da motilidade, viabilidade e integridade de membrana plasmática do sêmen de cão refrigerado, por até 36h de armazenamento, que o diluente gema de ovo, e a temperatura de armazenamento não interferiu na qualidade seminal, sugerindo que 15º C também pode ser utilizado para a refrigeração do sêmen canino.

Proteomic characterization of canine seminal plasma.

The present study was conducted to identify the major proteome of the sperm-rich fraction and prostatic fraction of canine seminal plasma. Three semen samples from four healthy dogs were obtained by digital manipulation. The pre-sperm fraction, sperm-rich fraction and prostatic fraction were separated from each ejaculate. Immediately after sperm analysis, a protease inhibitor was added to the sperm-rich fraction and prostatic fraction, and the fractions were separately centrifuged and frozen at -80 °C. The samples were thawed, re-centrifuged, and the total protein concentration was determined. Samples were subjected to 1D SDS-PAGE and Coomassie-blue stained gels, were analyzed by Quantity One 1D Analysis Software. Bands detected in the gels were excised and proteins subjected to digestion with trypsin. Proteins were identified by nano-HPLC-MS and tools of bioinformatics. Tandem mass spectrometry allowed the detection of 268 proteins in the gels of sperm-rich fraction and prostatic fraction of canine ejaculate. A total of 251 proteins were common to the sperm-rich and prostatic fractions, while 17 proteins were present in the sperm-rich fraction and absent in the prostatic fraction. The intensity of the bands detected in range 1 and 2 represented 46.5% of all of the band intensities detected in the 1D gels for proteins of the sperm-rich fraction and 53.0% of all bands in the prostatic fraction. Arginine esterase and lactotransferrin precursor were the protein with the highest intensity observed in the both fractions. Among the proteins present only in the sperm-rich fraction, the proteins UPF0764 protein C16orf89 homolog and epididymal-specific lipocalin-9 were the most abundant. In conclusion, canine sperm-rich fraction and prostatic fraction express a very diverse set of proteins, with unique biochemical properties and functions. Moreover, although most proteins are common to both sperm-rich fraction and prostatic fraction, there are some exclusive proteins in sperm-rich fraction.

Técnicas de inseminação artificial em cães: revisão / Techniques of artificial insemination in dogs – review / Las técnicas de inseminación artificial en los perros - revisión

La inseminación artificial en los perros es una herramienta de mejoramiento que aumenta la producción de 90% de la tasa de éxito de la fertilización. Es una aplica extensamente en los reproductores biotecnológicos, que consiste en la deposición del semen por medio artificial en el tracto reproductivo de la hembra. El semen puede ser manipulado en su forma fresca, refrigerada o criopreservados (congelados), y se utilizan diferentes técnicas de inseminación de acuerdo a su presentación. Para obtener la máxima eficacia de la técnica que se necesita principalmente un espécimen masculino, la correcta selección de animales adecuados para la reproducción, así como el diagnóstico de la época ideal, de acuerdo con el período fértil de la matriz. Para ello se llevan a cabo pruebas adicionales, como la citología vaginal, vaginoscopia y hormona de dosificación (o dosificación de progesterona). Dado que el método de inseminación artificial se utiliza correctamente, la inseminación es una herramienta útil para mejorar la calidad general de todas las razas, lo que permite uma gran mejora genética y la cría.

Artificial insemination in dogs is a breeding tool that increases production 90% of the fertilizationsuccess rate. It is a biotech widely applied in animal breeding, which consists of the deposition artificially semen in the reproductive tract of the female. Semen can be manipulated in its fresh form, cooled or cryopreserved (frozen), and used different insemination techniques according to your presentation. For most efficiency technique is primaríly needed a male specimen, the correct selection of animais suitable for breeding, as well as the optimal diagnosis point, according to the fertile period of the array. For this are performed additional tests such as cytology Vaginal, Vaginoscopy and Hormone dosing (or Progesterone dosage). Since the artificial insemination method is used correctly, the insemination is a useful tool to improve the overall quality of all races, allowing a large genetic and husbandry improvement.

A inseminação artificial em cães é uma ferramenta do melhoramento produtivo que aumenta até 90% a taxa de sucesso da fertilização. É uma biotécnica amplamente aplicada na reprodução animal, que consiste na deposição de forma artificial do sêmen no trato reprodutivo da fêmea. O sêmen pode ser manipulado na sua forma fresca, resfriada ou criopreservada (congelada), sendo utilizadas diferentes técnicas de inseminação de acordo com a sua apresentação. Para maior eficácia da técnica é necessário primeiramente um exemplar macho, a seleção correta de animais aptos à reprodução, assim como o diagnóstico do momento ideal, de acordo com o período fértil da matriz. Para isso são realizados exames complementares como: Citologia Vaginal, Vaginoscopia e Dosagem Hormonal (ou Dosagem de Progesterona). Desde que o método de inseminação artificial seja utilizado de forma correta, a inseminação é uma ferramenta útil para melhorar a qualidade geral de todas as raças, permitindo um grande aperfeiçoamento genético e zootécnico.

Técnicas de inseminação artificial em cães: revisão / Techniques of artificial insemination in dogs review / Las técnicas de inseminación artificial en los perros - revisión

La inseminación artificial en los perros es una herramienta de mejoramiento que aumenta la producción de 90% de la tasa de éxito de la fertilización. Es una aplica extensamente en los reproductores biotecnológicos, que consiste en la deposición del semen por medio artificial en el tracto reproductivo de la hembra. El semen puede ser manipulado en su forma fresca, refrigerada o criopreservados (congelados), y se utilizan diferentes técnicas de inseminación de acuerdo a su presentación. Para obtener la máxima eficacia de la técnica que se necesita principalmente un espécimen masculino, la correcta selección de animales adecuados para la reproducción, así como el diagnóstico de la época ideal, de acuerdo con el período fértil de la matriz. Para ello se llevan a cabo pruebas adicionales, como la citología vaginal, vaginoscopia y hormona de dosificación (o dosificación de progesterona). Dado que el método de inseminación artificial se utiliza correctamente, la inseminación es una herramienta útil para mejorar la calidad general de todas las razas, lo que permite uma gran mejora genética y la cría.(AU)

Artificial insemination in dogs is a breeding tool that increases production 90% of the fertilizationsuccess rate. It is a biotech widely applied in animal breeding, which consists of the deposition artificially semen in the reproductive tract of the female. Semen can be manipulated in its fresh form, cooled or cryopreserved (frozen), and used different insemination techniques according to your presentation. For most efficiency technique is primaríly needed a male specimen, the correct selection of animais suitable for breeding, as well as the optimal diagnosis point, according to the fertile period of the array. For this are performed additional tests such as cytology Vaginal, Vaginoscopy and Hormone dosing (or Progesterone dosage). Since the artificial insemination method is used correctly, the insemination is a useful tool to improve the overall quality of all races, allowing a large genetic and husbandry improvement.(AU)

A inseminação artificial em cães é uma ferramenta do melhoramento produtivo que aumenta até 90% a taxa de sucesso da fertilização. É uma biotécnica amplamente aplicada na reprodução animal, que consiste na deposição de forma artificial do sêmen no trato reprodutivo da fêmea. O sêmen pode ser manipulado na sua forma fresca, resfriada ou criopreservada (congelada), sendo utilizadas diferentes técnicas de inseminação de acordo com a sua apresentação. Para maior eficácia da técnica é necessário primeiramente um exemplar macho, a seleção correta de animais aptos à reprodução, assim como o diagnóstico do momento ideal, de acordo com o período fértil da matriz. Para isso são realizados exames complementares como: Citologia Vaginal, Vaginoscopia e Dosagem Hormonal (ou Dosagem de Progesterona). Desde que o método de inseminação artificial seja utilizado de forma correta, a inseminação é uma ferramenta útil para melhorar a qualidade geral de todas as raças, permitindo um grande aperfeiçoamento genético e zootécnico.(AU)

Identification of fatty acids in canine seminal plasma.

Seminal plasma contains various biochemical components associated with sperm function. However, there is limited information regarding the fatty acid composition of seminal plasma and their effect on sperm. The aim of this study was to identify the fatty acid content in canine seminal plasma using gas chromatography. Twelve ejaculates were studied, the seminal plasma was obtained by centrifugation and then the lipids were extracted, methylated and analysed by chromatography. The total lipids in the seminal plasma were 2.5 ± 0.3%, corresponding to 85% saturated fatty acids (SFA) and 15% unsaturated fatty acids (UFA). The greatest proportions of SFA were palmitic acid (30.4%), stearic acid (23.4%) and myristic acid (5.3%) and of UFA oleic acid (9.0%). Therefore, the protocols and techniques used enabled the identification of 18 different fatty acids in canine seminal plasma, which constitutes a good method to evaluate and quantify the fatty acid profile in this species.

Evaluación del semen canino, sometido a congelación con diferentes concentraciones de glicerol como crioprotector / Evaluation of canine semen that has gone through a freezingand thawing process with different glycerol concentrations as a crioprotector / Avaliação do sêmen canino, sujeito a congelamento com diferentes concentrações de glicerol como crioprotetor

El estudio de las biotecnologías usadas con fines reproductivos en caninos, constituye uno de los principalespuntos de estudio investigativo para el campo de la Medicina Veterinaria y la Zootecnia en los últimos años 28. Conel objetivo de evaluar el efecto de tres diferentes concentraciones de glicerol sobre el semen canino sometido aprocesos de criopreservación, se obtuvieron por medio de manipulación manual, 12 muestras seminales de machos de la raza labrador, clínicamente sanos y sometidos a las mismas condiciones de manejo. Cada muestra se dividió en cuatro tratamientos (T1: control, T2: 4%, T3: 6% y T4: 8% de glicerol); a los cuales se les evaluó el volumen,pH, movilidad, concentración, morfología y vitalidad, respectivamente. Luego en el análisis pos descongelaciónse determinaron las diferencias seminales y se estableció su relación con la concentración del crioprotector. De los resultados obtenidos en este proyecto se encontraron diferencias significativas entre las variables morfología, mortalidad y concentración, igualmente se estableció que los tratamientos T2 (4% de glicerol) y T3 (6% de glicerol) presentaron mejores resultados para la congelación de semen en caninos.

The study of biotechnology used in canines for reproductive purposes, is a of the principal research study points tothe area of Veterinary Medicine in last years28. In the objective to evaluate the effect of three different concentrationsof glycerol on canine semen, to subjected cryo-preservation process, were obtained using manual manipulation, 12semen samples of male Labrador clinically healthy and subject to the same driving conditions. Each sample was divided in four treatments (T1: control, T2: 4%, T3: T4 6% and 8% glycerol), to which they evaluated the volume, pH, motility, concentration, morphology and vitality, respectively. Then in the analysis were determined after thawing seminal differences and its relationship to the concentration of cryoprotectant. From the results obtained in this project are significant differences between the variables morphology, mortality and concentration, also establishedthat T2 (4% glycerol) and T3 (6% glycerol) provide better results for freezing semen canines.

O estudo da biotecnologia utilizada em cães para fins reprodutivos constitui um dos principais pontos de pesquisapara o campo da medicina veterinária e zootecnia nos últimos anos28. Com o objetivo de se avaliar o efeito de trêsdiferentes concentrações de glicerol sobre sêmen canino submetidos a processos crioconservação, foram obtidaspor meio de manipulação manual 12 amostras de sêmen de Labrador macho, clinicamente saudáveis e submetidasàs mesmas condições de manejo. Cada amostra foi dividida em quatro tratamentos (T1: controle, T2: 4%, T3: 6% e T4: 8% de glicerol), os quais foram avaliados quanto ao volume, pH, mobilidade, concentração, morfologia evitalidade, respectivamente. Nas análises pós descongelamento foram determinadas as diferenças entre os semens e se estabeleceu uma relação com a concentração do crioprotetor. A partir dos resultados obtidos neste trabalho foram encontradas diferenças significativas entre a variável morfologia, mortalidade e concentração e também ficou estabelecido que T2 (4% de glicerol) e T3 (6% de glicerol) apresentaram os melhores resultados para o congelamento de sêmen em caninos.

Conservação do sêmen canino a 37ºc em diluentes à base de água de coco

The aim of this study was to evaluate the canine semen diluted with coconut water extender, added of 3-indol acetic acid (IAA) and egg yolk at 37ºC. Sperm of six stud dogs was collected by digital manipulation and divided in three equal aliquots. Dilution was performed by the addiction of coconut water (extender 1), coconut water plus 4% of IAA (extender 2) and coconut water plus 4% of IAA and 20% of egg yolk (extender 3). Sperm motility, vigor and morphology immediately after dilution and periodically until 180 minutes, as well as media degradation motility rate (DMR), were evaluated. Extenders were compared by Whitney-Mann test (P 0.05). Statistical differences were not shown between the extenders up to 60 minutes. After 90 minutes, sperm motility on the extender A was superior to the other extenders (95%). The DMR on the extender A (7.5%) was significantly inferior to the other extenders. Thus, coconut water extender is adequate for the preservation of canine semen at 37ºC for 180 minutes.

O presente trabalho objetivou avaliar a eficiência do diluidor à base de água de coco acrescido de ácido 3-indol acético (AIA) e gema de ovo na conservação do sêmen canino a 37ºC. Coletou-se o sêmen de seis cães adultos por manipulação digital, fracionando-o em três alíquotas. Procedeu-se a diluição do sêmen com o diluidor à base de água de coco (grupo A), com este acrescido de 4% de AIA (grupo B) e, com o mesmo acrescido de 20% de gema de ovo e 4%AIA (grupo C). Avaliou-se a motilidade, o vigor e a percentagem de alterações morfológicas espermáticas imediatamente após a coleta e periodicamente durante 180 minutos (T0, T5, T15, T30, T60, T90, T120, T180), avaliando-se também a taxa de degradação média de motilidade espermática (TDM). Os diluidores foram comparados pelo teste de Whitney-Mann (P 0,05). Não foram verificadas diferenças estatísticas entre os grupos até T60. A motilidade no uso do grupo A foi superior à dos demais grupos a partir de T90, ficando em torno de 95%.A TDM foi significativamente menor no diluente A (7,5%) em relação aos demais diluentes. Dessa forma, o diluente à base de água de coco mostrou-se adequado para a preservação do sêmen canino a 37ºC por 180 minutos.

CONSERVAÇÃO DO SÊMEN CANINO A 37ºC EM DILUENTES À BASE DE ÁGUA DE COCO

The aim of this study was to evaluate the canine semen diluted with coconut water extender, added of 3-indol acetic acid (IAA) and egg yolk at 37ºC. Sperm of six stud dogs was collected by digital manipulation and divided in three equal aliquots. Dilution was performed by the addiction of coconut water (extender 1), coconut water plus 4% of IAA (extender 2) and coconut water plus 4% of IAA and 20% of egg yolk (extender 3). Sperm motility, vigor and morphology immediately after dilution and periodically until 180 minutes, as well as media degradation motility rate (DMR), were evaluated. Extenders were compared by Whitney-Mann test (P 0.05). Statistical differences were not shown between the extenders up to 60 minutes. After 90 minutes, sperm motility on the extender A was superior to the other extenders (95%). The DMR on the extender A (7.5%) was significantly inferior to the other extenders. Thus, coconut water extender is adequate for the preservation of canine semen at 37ºC for 180 minutes.

O presente trabalho objetivou avaliar a eficiência do diluidor à base de água de coco acrescido de ácido 3-indol acético (AIA) e gema de ovo na conservação do sêmen canino a 37ºC. Coletou-se o sêmen de seis cães adultos por manipulação digital, fracionando-o em três alíquotas. Procedeu-se a diluição do sêmen com o diluidor à base de água de coco (grupo A), com este acrescido de 4% de AIA (grupo B) e, com o mesmo acrescido de 20% de gema de ovo e 4%AIA (grupo C). Avaliou-se a motilidade, o vigor e a percentagem de alterações morfológicas espermáticas imediatamente após a coleta e periodicamente durante 180 minutos (T0, T5, T15, T30, T60, T90, T120, T180), avaliando-se também a taxa de degradação média de motilidade espermática (TDM). Os diluidores foram comparados pelo teste de Whitney-Mann (P 0,05). Não foram verificadas diferenças estatísticas entre os grupos até T60. A motilidade no uso do grupo A foi superior à dos demais grupos a partir de T90, ficando em torno de 95%.A TDM foi significativamente menor no diluente A (7,5%) em relação aos demais diluentes. Dessa forma, o diluente à base de água de coco mostrou-se adequado para a preservação do sêmen canino a 37ºC por 180 minutos.