Hematological and histological parameters of Nile tilapia in response to the challenge of different salinity levels / Parâmetros hematológicos e histológicos de tilápia do nilo em resposta ao desafio de diferentes níveis de salinidade

This research aimed to evaluate the influence of different levels of salinity on growth performance, haematological parameters and the cells of Nile tilapia chloride. 144 fish were used during a 97 day trial period, submitted to four experimental treatments of 0%o, 10%o, 20%o and 25%o salinity. Sampling were collected for monitoring of performance parameters, blood samples to determine the erythrocyte count, packed cell volume, hemoglobin concentration, the erythrocyte indices, the count of thrombocytes and leukocytes and the electrophoretic profile of serum proteins. Gill samples were also collected for counting the number of cells chloride. Significant differences were found in hemoglobin concentration, the total plasma proteins and the number of erythrocytes (p < 0.05). There was no difference in the number of white blood cells and thrombocytes. Serum proteins showed differences (p < 0.05) from pre-albunima fractions, alfa1-globulin, alfa2-globulin, beta-globulin, and gama-globulin. There was a direct relationship between the number of chloride cells and increase in salinity levels (p < 0.05). The CBC constituents, the electrophoretic profile of proteins as well as quantitative analysis of gill chloride cells can serve as indicares mechanism of adaptation and tolerance to salinity in Nile tilapia.

Esta pesquisa teve por objetivo avaliar a influência de diferentes níveis de salinidade sobre o desempenho zootécnico, parâmetros hematológicos e células de cloreto de tilápia do Nilo. 144 peixes, durante 97 dias, foram submetidos a quatro tratamentos experimentais de 0%o, 10%o, 20%o e 25%o de salinidade. Realizaram-se biometrias para acompanhamento dos índices zootécnicos, coletas de amostras sanguíneas para determinação do número de eritrócitos, volume globular, concentração de hemoglobina, índices hematimétricos, contagem de trombócitos e de leucócitos total e diferencial, além do perfil eletroforético das proteínas séricas. As amostras branquiais foram para contagem do número de células de cloreto. Diferenças significativas foram encontradas na concentração de hemoglobina, nas proteínas plasmáticas totais e no número de eritrócitos (p < 0,05). Não foi observada diferença no número de leucócitos e de trombócitos. As proteínas séricas apresentaram diferenças (p < 0,05) nas frações pré-albunima, alfa1-globulina, alfa2-globulina, beta-globulina e gama-globulina. Verificou-se relação direta entre o número de células de cloreto e o aumento nos níveis de salinidade (p < 0,05). Os constituintes do hemograma, o perfil eletroforético de proteínas, bem como a análise quantitativa de células de cloreto branquiais, podem servir como indicares do mecanismo de adaptação e de tolerância à salinidade em tilápia do Nilo.

Hematological and histological parameters of Nile tilapia in response to the challenge of different salinity levels / Parâmetros hematológicos e histológicos de tilápia do nilo em resposta ao desafio de diferentes níveis de salinidade

This research aimed to evaluate the influence of different levels of salinity on growth performance, haematological parameters and the cells of Nile tilapia chloride. 144 fish were used during a 97 day trial period, submitted to four experimental treatments of 0%o, 10%o, 20%o and 25%o salinity. Sampling were collected for monitoring of performance parameters, blood samples to determine the erythrocyte count, packed cell volume, hemoglobin concentration, the erythrocyte indices, the count of thrombocytes and leukocytes and the electrophoretic profile of serum proteins. Gill samples were also collected for counting the number of cells chloride. Significant differences were found in hemoglobin concentration, the total plasma proteins and the number of erythrocytes (p < 0.05). There was no difference in the number of white blood cells and thrombocytes. Serum proteins showed differences (p < 0.05) from pre-albunima fractions, alfa1-globulin, alfa2-globulin, beta-globulin, and gama-globulin. There was a direct relationship between the number of chloride cells and increase in salinity levels (p < 0.05). The CBC constituents, the electrophoretic profile of proteins as well as quantitative analysis of gill chloride cells can serve as indicares mechanism of adaptation and tolerance to salinity in Nile tilapia.(AU)

Esta pesquisa teve por objetivo avaliar a influência de diferentes níveis de salinidade sobre o desempenho zootécnico, parâmetros hematológicos e células de cloreto de tilápia do Nilo. 144 peixes, durante 97 dias, foram submetidos a quatro tratamentos experimentais de 0%o, 10%o, 20%o e 25%o de salinidade. Realizaram-se biometrias para acompanhamento dos índices zootécnicos, coletas de amostras sanguíneas para determinação do número de eritrócitos, volume globular, concentração de hemoglobina, índices hematimétricos, contagem de trombócitos e de leucócitos total e diferencial, além do perfil eletroforético das proteínas séricas. As amostras branquiais foram para contagem do número de células de cloreto. Diferenças significativas foram encontradas na concentração de hemoglobina, nas proteínas plasmáticas totais e no número de eritrócitos (p < 0,05). Não foi observada diferença no número de leucócitos e de trombócitos. As proteínas séricas apresentaram diferenças (p < 0,05) nas frações pré-albunima, alfa1-globulina, alfa2-globulina, beta-globulina e gama-globulina. Verificou-se relação direta entre o número de células de cloreto e o aumento nos níveis de salinidade (p < 0,05). Os constituintes do hemograma, o perfil eletroforético de proteínas, bem como a análise quantitativa de células de cloreto branquiais, podem servir como indicares do mecanismo de adaptação e de tolerância à salinidade em tilápia do Nilo.(AU)

Physiological effects of gasoline on the freshwater fish prochilodus lineatus (characiformes: prochilodontidae)

The purpose of this work was to evaluate the effects of the water-soluble fraction of gasoline (WSFG) on the Neotropical freshwater fish Prochilodus lineatus. The WSFG was prepared by mixing gasoline in water (1:4) and animals were exposed for 6, 24 and 96h to 5% diluted WSFG or only to water. After exposure, blood was collected from the caudal vein and the gills were removed. The following parameters were analyzed: hematological (hemoglobin, hematocrit, number of red blood cells), osmo-ionic (plasma Na+, Cl- and K+ and plasma osmolarity), metabolic (total plasma proteins and glucose), endocrine (cortisol), density and distribution of chloride cells [CC] in the gills (immunohistochemistry), and branchial Na+/K+-ATPase (NKA) activity. Hemolysis was found to occur after 96h exposure to WSFG, as indicated by the decrease in the hematological parameters analyzed, followed by an increase in plasma K+. Secondary stress response was revealed by the occurrence of hyperglycemia in the three periods of exposure, despite the absence of significant increases in the plasma cortisol. The exposure to WSFG also caused an increase in the quantity of CC and in plasma Na+, after 24h, as well as in the enzymatic activity of NKA and plasma osmolarity, after 24h and 96h. These results indicate that fish exposed to the WSFG showed physiological adjusts to maintain their osmotic balance. However, the increase in the quantity of CC in the lamellae may interfere in the gas exchange impairing respiration.

O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da fração solúvel da gasolina (FSG) em Prochilodus lineatus. A FSG foi preparada misturando-se a gasolina à água (1:4) e os animais foram expostos por 6, 24 e 96h à FSG diluída 5% ou apenas à água. Após a exposição, o sangue foi coletado pela veia caudal e as brânquias foram retiradas. Os seguintes parâmetros foram analisados: hematológicos (hemoglobina, hematócrito, quantidade de células vermelhas), osmo-iônicos (concentrações plasmáticas de Na+, Cl-, K+ e osmolaridade), metabólicos (concentrações plasmáticas de proteínas totais e glicose), endócrino (cortisol plasmático), densidade e distribuição de células-cloreto [CC] nas brânquias (imunohistoquímica) e a atividade da enzima Na+/K+-ATPase (NKA) branquial. Hemólise foi observada após 96h de exposição à FSG, indicada pela diminuição dos parâmetros hematológicos analisados, seguido pelo aumento do K+ plasmático. Houve resposta secundária de estresse visualizada pela ocorrência da hiperglicemia nos três tempos de exposição, apesar da ausência de diferenças significativas na concentração plasmática do cortisol. A exposição à FSG também provocou aumento na quantidade das CC e na concentração de Na+, após 24h, e na atividade enzimática da NKA e osmolaridade, após 24h e 96h. Esses resultados indicam que peixes expostos à FSG apresentaram ajustes fisiológicos para manter o equilíbrio osmótico. Entretanto, o aumento na quantidade de CC nas lamelas pode ter interferido nas trocas gasosas prejudicando a respiração.

Physiological effects of gasoline on the freshwater fish Prochilodus lineatus (Characiformes: Prochilodontidae)

The purpose of this work was to evaluate the effects of the water-soluble fraction of gasoline (WSFG) on the Neotropical freshwater fish Prochilodus lineatus. The WSFG was prepared by mixing gasoline in water (1:4) and animals were exposed for 6, 24 and 96h to 5% diluted WSFG or only to water. After exposure, blood was collected from the caudal vein and the gills were removed. The following parameters were analyzed: hematological (hemoglobin, hematocrit, number of red blood cells), osmo-ionic (plasma Na+, Cl- and K+ and plasma osmolarity), metabolic (total plasma proteins and glucose), endocrine (cortisol), density and distribution of chloride cells [CC] in the gills (immunohistochemistry), and branchial Na+/K+-ATPase (NKA) activity. Hemolysis was found to occur after 96h exposure to WSFG, as indicated by the decrease in the hematological parameters analyzed, followed by an increase in plasma K+. Secondary stress response was revealed by the occurrence of hyperglycemia in the three periods of exposure, despite the absence of significant increases in the plasma cortisol. The exposure to WSFG also caused an increase in the quantity of CC and in plasma Na+, after 24h, as well as in the enzymatic activity of NKA and plasma osmolarity, after 24h and 96h. These results indicate that fish exposed to the WSFG showed physiological adjusts to maintain their osmotic balance. However, the increase in the quantity of CC in the lamellae may interfere in the gas exchange impairing respiration.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da fração solúvel da gasolina (FSG) em Prochilodus lineatus. A FSG foi preparada misturando-se a gasolina à água (1:4) e os animais foram expostos por 6, 24 e 96h à FSG diluída 5% ou apenas à água. Após a exposição, o sangue foi coletado pela veia caudal e as brânquias foram retiradas. Os seguintes parâmetros foram analisados: hematológicos (hemoglobina, hematócrito, quantidade de células vermelhas), osmo-iônicos (concentrações plasmáticas de Na+, Cl-, K+ e osmolaridade), metabólicos (concentrações plasmáticas de proteínas totais e glicose), endócrino (cortisol plasmático), densidade e distribuição de células-cloreto [CC] nas brânquias (imunohistoquímica) e a atividade da enzima Na+/K+-ATPase (NKA) branquial. Hemólise foi observada após 96h de exposição à FSG, indicada pela diminuição dos parâmetros hematológicos analisados, seguido pelo aumento do K+ plasmático. Houve resposta secundária de estresse visualizada pela ocorrência da hiperglicemia nos três tempos de exposição, apesar da ausência de diferenças significativas na concentração plasmática do cortisol. A exposição à FSG também provocou aumento na quantidade das CC e na concentração de Na+, após 24h, e na atividade enzimática da NKA e osmolaridade, após 24h e 96h. Esses resultados indicam que peixes expostos à FSG apresentaram ajustes fisiológicos para manter o equilíbrio osmótico. Entretanto, o aumento na quantidade de CC nas lamelas pode ter interferido nas trocas gasosas prejudicando a respiração.(AU)

Osmoregulation of juvenile marine goliath grouper (Epinephelus itajara) in low-salinity water / Osmorregulación de juveniles del mero guasa juvenil (Epinephelus itajara) en aguas de baja salinidad / Osmorregulação de juvenis do peixe garupa (Epinephelus itajara) em águas de baixa salinidade

Background: goliath grouper (Epinephelus itajara) is an economically valuable marine species and an excellent candidate for domestication for aquaculture purposes. If this grouper can osmoregulate in lowsalinity water, its cultivation can provide socio-economic benefits, for both coastal communities and the mainland agricultural sector. Objective: to evaluate the osmoregulatory capacity of juvenile goliath grouper when exposed to low-salinity water. Methods: juvenile goliath grouper (Epinephelus itajara) were either directly or gradually transferred from seawater to freshwater to test osmoregulatory ability. Body weight was assessed during acclimation and blood samples were taken to measure total osmolality and electrolytes. Results: all fish survived the transfer to freshwater and were maintained for up to 12 days after termination of the acclimation trials which lasted 72 hours. Juvenile goliath grouper were hyposmotic (342-462 mosmol/kg) to seawater and hyperosmotic (272-292 mosmol/kg) to freshwater. The gills and kidneys were found to have principal roles in the osmoregulatory processes. Numerous chloride cells were found on superficial regions of the gill filament epithelium, most likely serving to eliminate the excess of electrolytes while in seawater. The kidneys had numerous nephrons to make urine and retain electrolytes while in freshwater. Conclusions: these observations lead to the conclusions that juvenile goliath grouper have the ability to osmoregulate in freshwater and should be considered a marine euryhaline species. Such adaptability opens for consideration the possibility that goliath grouper could be successfully farmed in brackish water or even in freshwater.

Antecedentes: el mero guasa Epinephelus itajara es una especie marina de gran valor comercial y un excelente candidato a domesticar con fines acuícolas. Si el mero guasa puede osmoregular en agua de baja salinidad, su cultivo puede proporcionar beneficios socio económicos, tanto para las comunidades costeras, como al sector agropecuario en tierra firme. Objetivo: evaluar el efecto en la osmoregulación de juveniles de mero guasa expuestos a aguas de baja salinidad. Métodos: juveniles de mero guasa mantenidos en agua de mar fueron transferidos directamente o de manera gradual a agua dulce para poner a prueba su capacidad osmorreguladora. Durante el proceso de aclimatación se les evaluó el peso corporal y se extrajo sangre para medir la osmolalidad total y electrolitos. Resultados: todos los peces sobrevivieron la transferencia al agua dulce y durante 12 días más, después de la finalización de los ensayos de aclimatación que tuvieron una duración de 72 horas. Juveniles de mero guasa fueron hiposmóticos (342-462 mosmol/kg) respecto al agua de mar e hiperosmóticos (272-292 mosmol/kg) respecto al agua dulce. La histología de branquias y riñones reveló que estos órganos son de gran importancia en los procesos osmorregulatorios. Un gran número de células de cloruro fueron localizadas como parte del epitelio de los filamentos branquiales; estas células trabajan para librar al cuerpo del exceso de electrolitos mientras los peces se encuentran en el mar. En el riñón se observaron numerosas nefronas y túbulos colectores para la formación de orina y retención de electrolitos; tejidos esenciales si estos peces permanecen en agua dulce. Conclusión: estas observaciones llevan a la conclusión de que los juveniles de mero guasa tienen la capacidad de osmorregular en agua dulce y debe ser considerada una especie marina eurihalina. Tal adaptabilidad supone la posibilidad de que el mero guasa podría ser cultivado en agua salobre o incluso en agua dulce.

Antecedentes: o peixe garoupa Epinephelus itajara é uma espécie marinha de muito valor comercial a qual seria ótimo ter domesticada para sua produção industrial na aquicultura. Se o peixe garoupa pode osmoregular em água de baixa salinidade, sua cultura pode proporcionar benefícios socioeconômicos, tanto para as comunidades costeiras, quanto para o sector agrícola no interior do continente. Objetivo: avaliar a osmoregulação de juvenis do peixe garoupa expostos a águas de baixa salinidade. Métodos: juvenis do peixe Garoupa mantidos no mar foram transferidos direta ou gradualmente para água doce testando assim sua capacidade osmorregulatória. Durante o processo de aclimatização, foi avaliado o peso corporal e amostras de sangue foram coletadas para medir a osmolalidade total e alguns eletrólitos. Resultados: todos os peixes sobreviveram à transferência para água doce 12 dias mais após a conclusão dos estudos de aclimatação que se fizeram durante um período de 72 horas. Juvenis do peixe garupa foram hiposmoticos (342-462 mosmol/kg) com respeito à água marinha e hiperosmóticos (272-292 mosmol/kg) com respeito à água doce. Histologia das brânquias e os rins revelaram que estes órgãos são de grande importância nos processos de osmoregulaçao. Um grande número de células de cloreto foi localizado como parte do epitélio dos filamentos branquiais; estas células trabalham no organismo para livrar o corpo do excesso de eletrólitos enquanto os peixes estão no mar. Nos rins foram observados numerosos néfrons e ductos recoletores para a formação de urina e retenção de eletrólitos; tecidos essenciais no caso de que estes peixes permaneçam em água doce. Conclusão: estas observações levam à conclusão de que os juvenis do peixe garupa tem a capacidade de osmoregular em água doce e deve ser considerado uma espécie marinha eurialina. A adaptabilidade deste peixe em água doce supõe a possibilidade de que o peixe garupa poderia ser cultivado nesta água em criadouros no interior do continente.

Pseudobrânquia do guaru Poecilia reticulata (Peter, 1859): análise estrutural, morfométrica e histoquímica para detecção de glicoconjugados / Pseudo-gill of guppy, Poecilia reticulata (Peter, 1859): structural, morphometric, and histochemical analyses for the detection of glycoconjugates

A morfologia, os parâmetros citomorfométricos e os glicoconjugados presentes na pseudobrânquia de guaru, Poecilia reticulata Peter, 1859 (Cyprinodontiformes: Poeciliidae), foram investigados por microscopia de luz acoplada ao sistema de captura e análise de imagens, juntamente por histoquímica com lectinas. A anatomia microscópica indicou que P. reticulata possui pseudobrânquia glandular formada por dois lóbulos, a qual se localiza abaixo do epitélio faringiano. O órgão é constituído por parênquima vascularizado e rico em células pseudobranquiais. Esse tipo celular exibe estado citofisiológico ativo, com abundante sistema de biomembranas e ausência de óstio na superfície apical,que por sua vez é encontrado nas células ricas em mitocôndrias das holobrânquias. Assim, indica-se que as células da pseudobrânquia se distinguem das células das holobrânquias em relação à morfologia, histoquímica e fisiologia. Em decorrência dessas características intrínsecas, a pseudobrânquia de alevinos do guaru pode desempenhar funções não respiratórias nas fases iniciais do desenvolvimento. Além disso, a caracterização da pseudobrânquia do guaru possibilitará estudos futuros sobre o efeito de poluentes aquáticos em espécies biomonitoras, como P. reticulata.

The morphology, cytomorphometric parameters, and glycoconjugates present in the pseudo-gill of guppy, Poecilia reticulata Peter, 1859 (Cyprinodontiformes: Poeciliidae), were investigated by light microscopy coupled to image capture and analysis system, and also by lectin histochemistry. The microscopic anatomy indicates that P. reticulata has a glandular pseudo-gill formed by two lobes, located underneath the pharynx epithelium. The organ is formed by vascularized parenchyma rich in pseudo-gill cells. This cell type exhibits active cytophysiological state with an abundant system of biomembranes and lacking of ostium in apical surface, which in turn is found in the mitochondria-rich cells of the holobranch. This indicates that the pseudo-gill cells distinguishe from the holobranch cells in their morphology, histochemistry and physiology. Due to these intrinsic characteristics, the pseudo-gill of guppy fingerlings may have non-respiratory function in the initial phase of their development. The characterization of guppy's pseudo-gill could facilitate further studies about the effect of water pollutants on biomonitor species, such as P. reticulata.

Pseudobrânquia do guaru Poecilia reticulata (Peter, 1859): análise estrutural, morfométrica e histoquímica para detecção de glicoconjugados / Pseudo-gill of guppy, Poecilia reticulata (Peter, 1859): structural, morphometric, and histochemical analyses for the detection of glycoconjugates

A morfologia, os parâmetros citomorfométricos e os glicoconjugados presentes na pseudobrânquia de guaru, Poecilia reticulata Peter, 1859 (Cyprinodontiformes: Poeciliidae), foram investigados por microscopia de luz acoplada ao sistema de captura e análise de imagens, juntamente por histoquímica com lectinas. A anatomia microscópica indicou que P. reticulata possui pseudobrânquia glandular formada por dois lóbulos, a qual se localiza abaixo do epitélio faringiano. O órgão é constituído por parênquima vascularizado e rico em células pseudobranquiais. Esse tipo celular exibe estado citofisiológico ativo, com abundante sistema de biomembranas e ausência de óstio na superfície apical,que por sua vez é encontrado nas células ricas em mitocôndrias das holobrânquias. Assim, indica-se que as células da pseudobrânquia se distinguem das células das holobrânquias em relação à morfologia, histoquímica e fisiologia. Em decorrência dessas características intrínsecas, a pseudobrânquia de alevinos do guaru pode desempenhar funções não respiratórias nas fases iniciais do desenvolvimento. Além disso, a caracterização da pseudobrânquia do guaru possibilitará estudos futuros sobre o efeito de poluentes aquáticos em espécies biomonitoras, como P. reticulata.(AU)

The morphology, cytomorphometric parameters, and glycoconjugates present in the pseudo-gill of guppy, Poecilia reticulata Peter, 1859 (Cyprinodontiformes: Poeciliidae), were investigated by light microscopy coupled to image capture and analysis system, and also by lectin histochemistry. The microscopic anatomy indicates that P. reticulata has a glandular pseudo-gill formed by two lobes, located underneath the pharynx epithelium. The organ is formed by vascularized parenchyma rich in pseudo-gill cells. This cell type exhibits active cytophysiological state with an abundant system of biomembranes and lacking of ostium in apical surface, which in turn is found in the mitochondria-rich cells of the holobranch. This indicates that the pseudo-gill cells distinguishe from the holobranch cells in their morphology, histochemistry and physiology. Due to these intrinsic characteristics, the pseudo-gill of guppy fingerlings may have non-respiratory function in the initial phase of their development. The characterization of guppy's pseudo-gill could facilitate further studies about the effect of water pollutants on biomonitor species, such as P. reticulata.(AU)

Efeitos do fluoreto de sódio no epitélio da brânquia do peixe Guaru (Poecilia vivipara) / Effects of sodium fluoride in gill epithelium of Guppy fish (Poecilia vivipara)

O flúor é muito utilizado pelo homem e facilmente encontrado na natureza. Por isso, vários estudos foram realizados visando a toxicidade e o seu efeito cumulativo nos tecidos animais. É descrito que o fluoreto de sódio pode ser empregado no controle do hospedeiro da esquistossomose (Biomphalaria glabrata). Visando a preservação do meio aquático, propõe-se a verificação do efeito do fluoreto de sódio em peixes (Poecilia vivipara). Dez peixes foram submetidos à água declorinada (GC) e o restante foi submetido à água contendo fluoreto de sódio na concentração de 5 ppm (GE), por vinte e um dias. Após esse período, os animais foram sacrificados e suas brânquias foram retiradas. As brânquias foram fixadas, pós-fixadas e desidratadas de acordo com o protocolo das técnicas de histoquímica e análise ultra-estrutural, respectivamente. As peças foram diafanizadas em xilol. Para observação histológica das células mucosas e células do cloro, foi utilizada a técnica de coloração de Hematoxilina + eosina. E para a detecção histoquímica de glicoconjugados utilizou-se as técnicas de P.A.S., P.A.S + amilase salivar, P.A.S. + acetilação, P.A.S. + acetilação reversível, alcian Blue (AB) pH 2,5 + metilação, AB pH 2,5 + metilação reversível, AB pH 2,5 e AB pH 0,5. Observou-se aumento na secreção de muco e na quantidade de células mucosas do epitélio branquial, além de diferenças na reatividade histoquímica das células mucosas do GE comparados ao GC, sugerindo uma resposta adaptativa desses animais ao novo ambiente. (AU)

Fluorine is an element much used by man and easily found in nature. Some studies have been carried out on the toxicity of fluorine and its cumulative effect on animal tissues. Sodium fluoride is described as being used in controlling the host of schistosomiasis (Biomphalaria glabrata). With a view to preserve the aquatic environment, it is proposed to verify the effect of sodium fluoride on fish (Poecilia vivipara). Ten fishes were divided into two groups. The first group was exposed to freshwater with sodium fluoride with a concentration of 5 ppm for a period of 21 days; the second group was exposed to freshwater. After 21 days the animals were sacrificed and their gills removed and processed according to histochemical/histologic methods and ultrastructural study. The gill leaflets were diaphanized in xylol. Histologic analyses using hematoxyline-eosin identified branchial epithelium and revealed mucous and chloride cells. The histochemical methods to detect glycoconjugate contents of mucous cells used: P.A.S, P.A.S. + salivar amylase; P.A.S. + acetylation ; P.A.S. + reversible acetylation; Alcian blue pH 2.5; Alcian blue pH 0.5; Alcian blue pH 2.5 + methylation; and Alcian blue pH 2.5 + reversible methylation. An increase in secretion of mucus and an alteration to the content of the granules were also observed, suggesting behavior changes of mucous type to enable these animals to adapt to the environment, thus altering the concentration of sodium fluoride. (AU)