ABSTRACT
Disfunción vaginal (DV) (vaginosis/vaginitis) es el síndrome genérico de mayor prevalencia, alcanzando el 50% de todas las mujeres en edad fértil (sintomáticas y asintomáticas). El virus del Papiloma Humano (HPV) se detecta en 30 a 40% de mujeres en edad fértil (sintomáticas y asintomáticas) y se asocia a alteraciones pre-neoplásicas y a carcinoma invasor del cuello uterino. El diagnóstico sindrómico de DV y alteraciones inducidas por HPV es ineficiente y en la actualidad la morfología (macro y microscópica) es el gold standard, pero requiere ordenamiento. El Estudio del Contenido Vaginal es la prueba de laboratorio bacteriológico de mayor solicitud luego del urocultivo. BACOVA normatiza el diagnóstico de vaginosis/vaginitis y ERIGE aumenta el valor predictivo de células que alertan sobre alteraciones epiteliales. Desde 2007 al presente en los talleres BACOVA ERIGE (tinción de Giemsa) se evaluó la sensibilidad de la detección de células anormales exfoliadas. Un 99% de los participantes coincidió con la detección de koi-locitos. BACOVA/ERIGE no reemplaza al Papanicolaou de ninguna manera, pero puede y debe realizarse en laboratorios periféricos, con lo que además del diagnóstico de vaginosis/vaginitis con 100% de valor predictivo, aumentan la cobertura preventiva de estados proliferativos.
Vaginal dysfunction (DV) (vaginosis/vaginitis) is the generic syndrome of major prevalence, reaching 50% of all women in fertile age (symptomatic and asymptomatic). The Human Papillomavirus (HPV) is detected in 30-40% of women in fertile age (symptomatic and asymptomatic) and is associated to pre-neoplastic lesions and invading carcinoma of the uterine cervix. The diagnosis for the symptoms of DV and the alterations induced by HPV are inefficient and at present, the morphology (macroscopic and microscopic) is the standard gold, but it needs better classification. The Study of the Vaginal Content is the test of major request after urocultives in bacteriological laboratories. BACOVA establishes the procedure for the diagnosis of vaginosis/vaginitis and ERIGE increases the predictive value of cells that give the alarm on epithelial alterations. From 2007 to the present sensitivity in the detection of abnormal exfoliated cells from vagina and uterine cervix was evaluated during the BACOVA - ERIGE, (Giemsa's stain) workshops, 99% of the participants coincided with the detection of koilocytes. BACOVA/ERIGE does not replace the Papanicolaou by any means, but it can and must be performed in peripheral laboratories, where apart from the diagnosis of vaginosis/vaginitis with 100% of predictive value, it is possible to increase the detection of precocious proliferative changes of the squamous epithelium.
Disfungào vaginal (DV) (vaginose / vaginite) é a síndrome mais prevalente genérica, atingindo 50% de todas as mulheres em idade fértil (sintomáticas e assintomáticas). O Papilomavírus Humano (HPV) é detectado em 30-40% das mulheres em idade fértil (sintomáticas e assintomáticas) e está associado a alteragòes pré-neoplásicas e a carcinoma invasivo do colo do útero. O diagnóstico sindrómico de DV e alteragòes induzidas pelo HPV é ineficiente e atualmente a morfologia (macroscópica e microscópica) é o padrào ouro, mas precisa de ordenamento. O Estudo do Conteúdo Vaginal é o exame de laboratòrio bacteriológico mais solicitado, seguido da urocultura. BACOVA normatiza o diagnòstico de vaginose/ vaginite e ERIGE aumenta o valor preditivo de células que alertam a respeito de alteragòes epiteliais. Desde 2007 até hoje, nos workshops BACOVA/ERIGE (coloragào de Giemsa), foi avaliada a sensibili-dade da detecgào de células anormais esfoliadas. 99% dos participantes coincidiram com a detecgào de coilócitos. Bacova/Erige nào substitui o Papanicolaou de forma alguma, mas pode e deve ser feito em laboratórios periféricos, com o qual além do diagnóstico de vaginose / vaginite com 100% de valor preditivo, aumentam a cobertura preventiva de estados proliferativos.
Subject(s)
Humans , Female , Papillomaviridae , Papillomavirus Infections/diagnosis , Uterine Cervical Neoplasms , Alphapapillomavirus , Azure Stains , Gammapapillomavirus , Mupapillomavirus , Reference Values , VaginitisABSTRACT
Disfunción vaginal (DV) (vaginosis/vaginitis) es el síndrome genérico de mayor prevalencia, alcanzando el 50% de todas las mujeres en edad fértil (sintomáticas y asintomáticas). El virus del Papiloma Humano (HPV) se detecta en 30 a 40% de mujeres en edad fértil (sintomáticas y asintomáticas) y se asocia a alteraciones pre-neoplásicas y a carcinoma invasor del cuello uterino. El diagnóstico sindrómico de DV y alteraciones inducidas por HPV es ineficiente y en la actualidad la morfología (macro y microscópica) es el gold standard, pero requiere ordenamiento. El Estudio del Contenido Vaginal es la prueba de laboratorio bacteriológico de mayor solicitud luego del urocultivo. BACOVA normatiza el diagnóstico de vaginosis/vaginitis y ERIGE aumenta el valor predictivo de células que alertan sobre alteraciones epiteliales. Desde 2007 al presente en los talleres BACOVA ERIGE (tinción de Giemsa) se evaluó la sensibilidad de la detección de células anormales exfoliadas. Un 99% de los participantes coincidió con la detección de koi-locitos. BACOVA/ERIGE no reemplaza al Papanicolaou de ninguna manera, pero puede y debe realizarse en laboratorios periféricos, con lo que además del diagnóstico de vaginosis/vaginitis con 100% de valor predictivo, aumentan la cobertura preventiva de estados proliferativos.(AU)
Vaginal dysfunction (DV) (vaginosis/vaginitis) is the generic syndrome of major prevalence, reaching 50% of all women in fertile age (symptomatic and asymptomatic). The Human Papillomavirus (HPV) is detected in 30-40% of women in fertile age (symptomatic and asymptomatic) and is associated to pre-neoplastic lesions and invading carcinoma of the uterine cervix. The diagnosis for the symptoms of DV and the alterations induced by HPV are inefficient and at present, the morphology (macroscopic and microscopic) is the standard gold, but it needs better classification. The Study of the Vaginal Content is the test of major request after urocultives in bacteriological laboratories. BACOVA establishes the procedure for the diagnosis of vaginosis/vaginitis and ERIGE increases the predictive value of cells that give the alarm on epithelial alterations. From 2007 to the present sensitivity in the detection of abnormal exfoliated cells from vagina and uterine cervix was evaluated during the BACOVA - ERIGE, (Giemsas stain) workshops, 99% of the participants coincided with the detection of koilocytes. BACOVA/ERIGE does not replace the Papanicolaou by any means, but it can and must be performed in peripheral laboratories, where apart from the diagnosis of vaginosis/vaginitis with 100% of predictive value, it is possible to increase the detection of precocious proliferative changes of the squamous epithelium.(AU)
DisfungOo vaginal (DV) (vaginose / vaginite) é a síndrome mais prevalente genérica, atingindo 50% de todas as mulheres em idade fértil (sintomáticas e assintomáticas). O Papilomavírus Humano (HPV) é detectado em 30-40% das mulheres em idade fértil (sintomáticas e assintomáticas) e está associado a alteragòes pré-neoplásicas e a carcinoma invasivo do colo do útero. O diagnóstico sindrómico de DV e alteragòes induzidas pelo HPV é ineficiente e atualmente a morfologia (macroscópica e microscópica) é o padrOo ouro, mas precisa de ordenamento. O Estudo do Conteúdo Vaginal é o exame de laboratòrio bacteriológico mais solicitado, seguido da urocultura. BACOVA normatiza o diagnòstico de vaginose/ vaginite e ERIGE aumenta o valor preditivo de células que alertam a respeito de alteragòes epiteliais. Desde 2007 até hoje, nos workshops BACOVA/ERIGE (coloragOo de Giemsa), foi avaliada a sensibili-dade da detecgOo de células anormais esfoliadas. 99% dos participantes coincidiram com a detecgOo de coilócitos. Bacova/Erige nOo substitui o Papanicolaou de forma alguma, mas pode e deve ser feito em laboratórios periféricos, com o qual além do diagnóstico de vaginose / vaginite com 100% de valor preditivo, aumentam a cobertura preventiva de estados proliferativos.(AU)
ABSTRACT
Ante las dificultades frente al tratamiento de la leishmaniasis, es importante buscar alternativas terapéuticas que deben ser analizadas empleando modelos in vitro e in vivo adecuadamente estandarizados. Con este propósito, se implementó un modelo de infección in vitro de Leishmania conmacrófagos U-937 y J-774, para evaluar la internalización de promastigotes a distintos puntos tiempo (2 a 6 horas) y por dos técnicas: coloración de Giemsa (CG) y citometría de flujo (CF). En el análisis por CF, se evaluó la invasión teniendo en cuenta la emisión de fluorescencia de los parásitos transfectados con la proteína verde de fluorescencia (GFP) y el aumento de la densidad citoplasmática de los macrófagos debida a los parásitos internalizados, lo cual fue verificado con el recuento microscópico realizado con CG; se encontró que a una proporción 1:35 (células:parásitos) se pueden establecer cambios densitométricos asociados con la infección empleando cepas de parásitos no transfectadas. También se describe que las J774 internalizan más eficientemente promastigotes de Leishmania que las células U937 (P valor: 0,0006), y se observa a su vez para la línea murina un aumento del número de parásitos por célula, respecto a los macrófagos humanos empleados en este ensayo (P valor 0,0038). Este estudio nos permite concluir: (i) que los cambios en la densidad citoplasmática evidenciados por CF son suficientes para establecer el porcentaje de infección parasitaria, aun para aquellos parásitos no transfectados; (ii) que la CG es menos costosa que el uso de la CF para evaluar infección parasitaria, aunque por su carácter semicuantitativo, la variabilidad intra- e inter-observadores la hace menos precisa; (iii) que los resultados cuantitativos obtenidos por la CF se correlacionan con los observados en la CG, y permiten sugerir que estas dos técnicas resultan complementarias; y (iv) que el porcentaje de infección y el número de parásitos internalizados para la J-774 son mayores que lo encontrado para la U-937, lo cual puede deberse a que un mayor número de receptores de complemento sobre la línea murina favorece la internalización de patógenos intracelulares, proceso menos favorecido en la línea humana por los niveles reducidos de este tipo de receptores en su membrana celular.
The treatment for Leishmaniasis has presented some difficulties related with adverse effects and resistance. For these reasons it is important to search therapeutic alternatives which must be analyzed using adequately standardized in vitro and in vivo models. With this purpose, we implemented an in vitro model for leishmania infection using U-937 and J-774macrophages, and evaluating promastigote internalization at consecutive time spans (from 2 to 6 hours). The first approximation assayed involves the flow cytometric (CF) analysis for invasion quantification by measuring the fluorescence emitted by parasites previously transfected with green fluorescence protein (GFP). In the alternative strategy, parasitized cells were subjected to Giemsa stain and CF was applied to measure the increase of macrophages cytoplasm density owed to internalized parasites. Giemsa stain also allowed us to estimate the number of parasites within each cell. We report that the presence of 35 parasites per macrophage produces an increase in cytoplasmic density enough to be detected by CF so that infection can be clearly reported. We also found that J-774 macrophages internalize Leishmania promastigotes more efficiently than U-937 cells (P value: 0.0006). Cells of the murine line were infected by a higher number of parasites than the human counterparts used in this study (P value 0.0038). From the resultas, we conclude: (i) the change in macrophage cytoplasm density demonstrated by CF after Giemsa stain are sufficient to estimate the percentage of infection. (ii) Giemsa stain provides a less expensive strategy to evaluate Leishmania infection than the fluorescence based option, although the intra and inter observer variability (semi-quantitative procedure) makes it less precise; (iii) quantitative results obtained by both techniques correlate to each other, suggesting that these two tools can be considered complementary; and (iv) both the percentage of infection and the number of internalized parasites are higher for J-774 than for U-937 macrophages. This probably suggests the presence of more receptor molecules (binding targets) for Leishmania ligands on the murine cell membrane determining a more efficient internalization rate than in human macrophages.
ABSTRACT
El diagnóstico de histoplasmosis se realiza tradicionalmente mediante el reconocimiento de típicas levaduras intracelulares de Histoplasma capsulatum en preparaciones microscópicas teñidas con Giemsa. Se comparó la eficacia de una modificación rápida de la técnica de Grocott (MRG) y la tradicional de Giemsa para el diagnóstico de la histoplasmosis, a partir de la aplicación de ambas a 10 secreciones respiratorias, 8 escarificaciones de lesiones cutáneas y una biopsia ganglionar, pertenecientes todas a pacientes con sospecha clínica de esta micosis. En 15 de las 19 muestras no se encontraron diferencias significativas en la capacidad y rapidez para arribar al diagnóstico, mientras que en las 4 restantes, fueron reconocidas con la MRG estructuras que pasaron desapercibidas con la coloración de Giemsa. La modificación rápida permitió un reconocimiento más rápido del H. capsulatum en materiales donde este hongo se observó en escaso número y permitió además identificar con seguridad otros patógenos fúngicos diferentes de H. capsulatum, como Pneumocystis jiroveci, Paracoccidioides brasiliensis y Cryptococcus neoformans, difíciles de observar con la coloración de Giemsa. Se propone la técnica de Grocott o su modificación rápida para el diagnóstico de la histoplasmosis, especialmente cuando el empleo de la coloración de Giemsa da lugar a resultados negativos o dudosos.
The diagnosis of histoplasmosis is traditionally achieved by recognizing the typical intracellular yeasts of Histoplasma capsulatum, in smears stained with Giemsa stain. The usefulness of a rapid modification of Grocott and of traditional Giemsa stains for the diagnosis of histoplasmosis was compared applying both techniques in 10 respiratory secretions, 8 cutaneous lesions scrapings and 1 adenomegaly biopsy, all of them belonging to patients with clinically suspected histoplasmosis. In 15 out of the 19 evaluated samples, no significant differences were found in the ability or speed to reach the diagnosis with the applied techniques; while in the remaining 4 samples, structures that had not been observed with Giemsa stain were recognized with the rapid modification. The modification enabled quicker recognition of H. capsulatum than Giemsa stain in those clinical samples where the number of these fungal pathogens was scant. Additionally, the rapid modification also enabled the recognition of fungal pathogens other than H. capsulatum, as Pneumocystis jiroveci, Paracoccidioides brasiliensis and Cryptococcus neoformans, difficult to observe with the Giemsa stain. Use of Grocott technique or rapid modification stain is proposed for the diagnosis of histoplasmosis, when the result obtained with the Giemsa stain is doubtful or negative.
