Impacto do uso da reação em cadeia da polimerase para o diagnóstico de meningite bacteriana em substituição a contraimunoeletroforese / Impact of using polymerase chain reaction for the diagnosis of bacterial meningitis in substitution for counterimmunoelectrophoresis

Introdução: a meningite bacteriana é um grave problema de Saúde Pública mundial, tendo como principais agentes: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae e Haemophilus influenzae. A metodologia de diagnóstico empregada no Instituto Adolfo Lutz ­ Centro de Laboratório Regional Santo André até o ano de 2011 era a contraimunoeletroforese (CIE), depois foi substituída pela reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR), que apresenta maior sensibilidade. Objetivo: este trabalho objetivou comparar ambas as metodologias no período de 2009 a 2018, para avaliação do impacto da introdução da qPCR no diagnóstico das meningites bacterianas nos 7 municípios da região do ABC do Estado de São Paulo. Metodologia: foram avaliadas a quantidade total de exames realizados, a média mensal, a positividade no período, os municípios requisitantes e a prevalência das bactérias causadoras de meningite, no período de abril/2009 até dezembro/2018. Resultados: Foram 377 exames de CIE e 1305 de qPCR, com média anual de 230 exames em 2010-2013 e 130 exames em 2014-2018. Observou-se aumento da positividade entre as técnicas, 17,8% para CIE e 33,8% para qPCR. N. meningitidis foi responsável pela maioria dos casos entre 2011 e 2013, cerca de 61% dos casos positivos, enquanto que entre 2014 e 2018 foi S. pneumoniae, cerca de 53%. Conclusão: os resultados indicaram que a qPCR foi mais eficiente em detectar os agentes causadores de meningite bacteriana na região do que a técnica de CIE. Por fim, este trabalho suporta a implantação da metodologia de qPCR para diagnóstico de meningite em substituição de técnicas menos sensíveis.

Introduction: bacterial meningitis is still a serious worldwide public health problem, and the main etiological agents are: Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae. The diagnostic methodology employed at the Adolfo Lutz Institute ­ Santo André Regional Laboratory Center until 2011 was the ounterimmunoelectrophoresis (CIE), then it was replaced by the real-time polymerase chain reaction (qPCR), which is more sensitivity. Objective: this study aimed to compare both methodologies from 2009 to 2018 to evaluate the impact of the introduction of qPCR in the diagnosis of bacterial meningitis in the 7 cities of the ABC region of São Paulo State. Methodology: the total number of tests performed, the month average, the positivity in the period, the requesting cities and the prevalence of bacteria causing meningitis were evaluated from April/2009 to December/2018. Results: there were 377 CIE exams and 1305 qPCR exams, with an annual average of 230 exams in 2010-2013 and 130 exams in 2014-2018. There was an increase in positivity between the performed techniques, 17.8% for CIE and 33.8% for qPCR. N. meningitidis accounted for most cases of bacterial meningitis between 2011 and 2013, about 61% of positive cases, whereas between 2014 and 2018 it was S. pneumoniae, with about 53%. Conclusion: the results indicated that qPCR was more efficient in detecting the agents that cause bacterial meningitis in the region than the CIE technique. Finally, this work supports the implementation of qPCR methodology for diagnosis of meningitis in replacement of less sensitive techniques.

Validação da técnica de contraimunoeletroforese (CIE) para o diagnóstico laboratorial das meningites por Neisseria meningitidis sorogrupos A, B, C e W135 / Validation of the counterimmunoelectrophoresis assay for laboratory diagnosis of meningitis caused by Neisseria meningitidis serogroups A, B, C and W135

A contraimunoeletroforese (CIE) é uma técnica amplamente empregada no Brasil para o diagnóstico laboratorial indireto das meningites causadas por Neisseria meningitidis (Men) dossorogrupos A, B, C e W135 ou Haemophilus influenzae sorotipo b (Hib). O objetivo deste trabalho foi validar a CIE empregando-se 301 amostras de líquido cefalorraquidiano (LCR) e 236amostras de soro de pacientes com suspeita de meningite bacteriana dos municípios de São Paulo e Campinas no período de 4 de junho de 2007 a 30 de maio de 2009. Em amostras de LCR, a CIE apresentou sensibilidade de 62,7% (42/67) (IC 95%, 50%-74,2%) e especificidade de 88,9% (208/234) (IC 95%, 84,1%-92,6%) para a detecção de Men. Em soro, a sensibilidade foi de35,3% (6/17) (IC 95%, 14,2%-61,7%) e a especificidade de 90,9% (199/219) (IC 95%, 86,3%-94,4%) Estes mesmos parâmetros não foram calculados para o componente Hib, devido à indisponibilidade de número significativo de amostras com cultura positiva para esta bactéria. Osresultados demonstraram que a técnica de CIE, embora tenha apresentado alta especificidade, apresentou baixa sensibilidade, especialmente em amostras de soro; assim, o uso da CIE não é recomendado como teste único para o diagnóstico das meningites bacterianas. Portanto, ressaltasea necessidade do emprego de outros testes indiretos com alta sensibilidade e especificidade, como a PCR em tempo real, para a melhoria do diagnóstico e do sistema de vigilância da doença

Limitações no uso da técnica de contraimunoeletroforese (CIE) para o diagnóstico das meningites causadas por Haemophilus influenzae tipo b / limitations in the use of couterimmunoelectrophoresis (CIE) for diagnosis of Haemophilus influenzae type b meningitis

A contraimunoeletroforese (CIE) é uma técnica amplamente utilizada noBrasil para o diagnóstico laboratorial indireto de meningites causadas porNeisseria meningitidis (Men) dos sorogrupos A, B e C e Haemophilusinfluenzae (Hi) tipo b, desde a década de 1970. A introdução da técnica dePCR em tempo real (RT-PCR) na rotina diagnóstica das meningitescausadas por Men, Hi e Streptococcus pneumoniae (Spn), no InstitutoAdolfo Lutz, levou à identificação de resultados discrepantes entre as duasmetodologias. O objetivo deste trabalho foi investigar 46 amostras comresultados de CIE positivos para Hib. Deste total, 26 amostras (57%)tiveram resultados caracterizados como falsos positivos para Hib, poisnenhuma delas foi positiva para este agente por RT-PCR e teste de látex.Destas, 21 (46%) foram positivas para Spn por RT-PCR e látex e 5 (11%)foram negativas tanto para Hib ou Spn por ambas as técnicas. Estes dadosevidenciaram a alta porcentagem de resultados falsos positivos para ocomponente Hib obtidos pela técnica de CIE. Nós recomendamos o uso dolátex ou RT-PCR e não a CIE para a detecção de Hib ou, então, o uso de umsegundo teste para confirmar casos de Hib positivos por CIE

Contribuiçäo de amostras de sangue no diagnóstico laboratorial da doença meningocócica / Contribution of blood samples in laboratorial diagnosis of meningococcal disease

Foram estudados retrospectivamente 73 casos de doença meningocócica (DM), dos quais, analisou-se amostras de líquido céfalorraquidiano (LCR) e de sangue, empregando-se as técnicas de cultura e pesquisa de antígenos polissacarídicos, através da contraimunoeletroforese (CIE) e pela reaçäo de aglutinaçäo de partículas de látex sensibilizadas por antissoros específicos (LA). Os resultados laboratoriais revelaram que 45,2 por cento das amostras foram positivas através da análise do LCR; 41,0 por cento foram positivas pela análise do LCR, hemocultura e/ou soro e 13,6 por cento foram positivas através da análise de hemocultura e/ou soro. Quanto ao tipo de exame realizado com o sangue, notou-se que 35,2 por cento dos casos foram positivos pela hemocultura, e quando se pesquisou o antígeno no soro dos pacientes, obteve-se 24,6 por cento de positividade pela CIE e 46,7 por cento pelo LA. Constatou-se que 13,6 por cento dos casos, só tiveram a confirmaçäo laboratorial, através dos exames realizados em amostras de sangue, destacando-se assim, a importante contribuiçäo desse tipo de material na identificação do agente etiológico e no aumento da positividade do diagnóstico laboratorial da DM. (AU)

73 cases of meningococcal disease (MD) have been studied retrospectively in whichsamples of cerebrospinal fluid (CSF) and blood were analysed using culture and meningococcal antigendetection through counterimmunoelectrophoresis (CIE) and reaction of latex agglutination (LA). Thelaboratory results showed that 45,2% of the samples were found positive in the CSF alone; 41,0% in theCSF, blood culture and/or serum, and only 13,6% in the blood culture and/or serum. As for the type of testcarried out in the blood, it was observed that 35,2% of the cases were positive in the blood culture, whilethe tests of antigen detection in the serum, showed that 24,6% were positive by CIE and 46,7% by LA. Itwas noticed that 13,6% of the cases only had the laboratorial confirmation through blood samples, thusshowing the important contribution of the blood in the identification of the ethiological agent and theincrease of the positivity of MD laboratorial diagnosis. (AU)